基因在阿尔茨海默诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了基因在阿尔茨海默诊断中的应用，本发明专利技术公开了CREG2在阿尔茨海默患者中表达下调，通过检测CREG2的表达水平可以判断受试者是否患有阿尔茨海默或者存在患阿尔茨海默的风险。

Application of Gene in Alzheimer's Diagnosis

【技术实现步骤摘要】
基因在阿尔茨海默诊断中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及基因在阿尔茨海默诊断中的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)是一种神经系统退行性疾病，主要以进行性记忆损害、认知功能下降、为改变以及语言障碍为主要临床表现，是老年痴呆中最常见的类型(MatsumotoY,NiimiN,KohyamaK.DevelopmentofanewDNAvaccineforAlzheimerdiseasetargetingawiderangeofabetaspeciesandamyloidogeniepeptides[J].PLoSOne,2013,$(9):e75203)。本病起病隐袭，发展缓慢，患者认知功能持续减退，病程一般5-10年，有研究发现该病患者在出现临床症状前10年以上就已存在神经元病理生理改变。目前普遍认为该病是由β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)异常沉积和tau蛋白过度磷酸化引起，最终导致老年斑、神经元纤维缠结的形成，以及海马锥体细胞颗粒空泡变性和神经元缺失等病理改变(BloomGS.Amyloid-betaandtau:thetriggerandbulletinAlzheimerdiseasepathogenesis[J].JAMANeurol,2014,71(4):505-508.)。随着我国人口老龄化进程的日益加快，AD发病率呈逐年升高趋势。该病不仅严重危害老年人身心健康，同时也给患者家属及社会带来沉重的经济负担。年龄65岁以上老年人发病率为10％，85岁以上的发病率达50％(GonsalvesD,JovanovieK,DaCostaDiasB,etal.GlobalAlzheimerResearchSummit:basicandclinicalresearch:presentandfutureAlzheimerresearch[J].Prion,2012,6(1):7-10)。AD唯一的确诊方法是通过脑组织的病理学检测，而现在临床对AD的诊断主要依据患者临床症状或表现、神经心理学量表及影像学技术。临床常用的评价认知功能的神经心理学量表主要有简易精神状态检查量表(Mini-MentalStateExamination,MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MontrealCognitiveAssessrrient,MoCA，但对于轻度痴呆的敏感性尚不理想(Malek-AhmadM,DavisK,BeldenCM,etal.ComparativeanalysisoftheAlzheimerquestionnaire(AQ)withtheCDRsumofboxes,MoCA,andMMSE[J].AlzheimerDisAssocDisord,2014,28(3):296-298.)。在脑结构影像领域，CT和MRI技术可以清晰地显示脑萎缩及脑室扩大等脑组织结构的变化，但对于脑萎缩不明显的轻度患者不足以提供可靠的诊断依据。在脑功能影像领域中，利用氟代显的轻度患者不足以提供可靠的诊断依据。目前，诊断AD的生物标志物种类较少，灵敏性及特异性也不理想，仅有少数几种作为辅助诊断方法应用于临床。随着生物技术的发展，AD发病的遗传学研究成为热点，寻找更多的AD生物指标，对于更早的对疾病进行预防和治疗，最大限度的降低AD给病人带来的痛苦具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种与阿尔茨海默病相关的生物标志物，采用生物标志物进行诊断。可以更早的对疾病进行预防和治疗，最大限度的降低AD给病人带来的痛苦，减轻患者对家属及社会带来的各种负担。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测CREG2的试剂在制备诊断阿尔茨海默的产品中的应用。进一步，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术、蛋白免疫技术检测CREG2表达水平的试剂。进一步，通过反转录PCR检测CREG2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增CREG2的引物，通过实时定量PCR检测CREG2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增CREG2的引物，通过原位杂交检测CREG2表达水平的试剂包括特异性识别CREG2的探针，通过芯片技术检测CREG2表达水平的试剂包括特异性识别CREG2的探针，通过蛋白免疫技术检测CREG2表达水平的试剂包括特异性结合CREG2蛋白的抗体。进一步，通过实时定量PCR检测CREG2表达水平的特异性扩增CREG2的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。进一步，所述产品包括芯片、试剂盒。芯片包括基因芯片、蛋白芯片，基因芯片包括用于检测CREG2基因转录水平的寡核苷酸探针，蛋白芯片包括用于检测CREG2蛋白水平的特异性结合剂；试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白检测试剂盒，基因检测试剂盒包括用于检测CREG2基因转录水平的引物或寡核苷酸探针，蛋白检测试剂盒包括用于检测CREG2蛋白水平的特异性结合剂。用于检测CREG2基因转录水平的寡核苷酸探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。本专利技术包括任何本领域可用的检测内在基因CREG2表达的方法。“检测表达”是指确定内在基因的RNA转录物或其表达产物的量或存在。检测本专利技术公开的内在基因表达，即基因表达概况分析的方法包括基于多核苷酸杂交分析的方法、基于多核苷酸测序、基于蛋白免疫检测的方法。这些方法通常检测本文所述的内在基因的表达产物。许多表达检测方法使用分离的RNA。起始材料典型地是从生物样品，例如分别从疾病或疾病细胞系，以及相应的正常组织或细胞系分离的总RNA。如果RNA的来源是组织，则可以从冷冻的或保存的石蜡包埋并固定的(例如福尔马林固定的)组织样品(例如病理学家指导的组织核心样品)中提取RNA(例如mRNA)。RNA提取的一般方法是本领域熟知的。特别地，可以使用来自商业制造商，例如TIANGEN的纯化试剂盒、缓冲剂套组和蛋白酶进行RNA分离，按照制造商的说明进行。其它可商购的RNA分离试剂盒包括MASTERPURETMCompleteDNA和RNA纯化试剂盒(Epicentre,Madison,Wis.)和ParaffinBlockRNA分离试剂盒(Ambion,Austin,TX)。例如，可以使用RNAStat-60(Tel-Test,Friendswood,TX)从组织样品中分离总RNA。例如，可以使用高纯FFPERNAMicrokit,货号04823125001(RocheAppliedScience,Indianapolis,IN)从FFPE中分离总RNA。例如，可以通过氯化铯密度梯度离心分离从样本制备的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测CREG2的试剂在制备诊断阿尔茨海默的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测CREG2的试剂在制备诊断阿尔茨海默的产品中的应用。2.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术、蛋白免疫技术检测CREG2表达水平的试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过反转录PCR检测CREG2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增CREG2的引物，通过实时定量PCR检测CREG2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增CREG2的引物，通过原位杂交检测CREG2表达水平的试剂包括特异性识别CREG2的探针，通过芯片技术检测CREG2表达水平的试剂包括特异性识别CREG2的探针；通过蛋白免疫技术检测CREG2表达水平的试剂包括特异性结合CREG2蛋白的抗体。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过实时定量PCR检测CREG2表达水平的特异性扩增CREG2的引物序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨庆河，
申请(专利权)人：聊城市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：山东,37