双醋瑞因在角膜Ⅱ-Ⅲ度碱烧伤治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了双醋瑞因在II‑III度角膜碱烧伤治疗中的应用。本发明专利技术中，双醋瑞因从减轻碱烧伤角膜中性粒细胞，降低MPO活性，减轻炎症对角膜造成的损伤，加快角膜上皮修复，从而减轻碱烧伤浑浊程度，减小碱烧伤浑浊面积，实现对II‑III度角膜碱烧伤的治疗。

【技术实现步骤摘要】
双醋瑞因在角膜Ⅱ-Ⅲ度碱烧伤治疗中的应用
本专利技术涉及到化学性眼外伤的治疗，具体来说是双醋瑞因在角膜Ⅱ-Ⅲ度碱烧伤治疗中的应用。
技术介绍
角膜碱烧伤是一种临床常见而处理棘手的眼外伤之一，伤后发生的化学物质的直接损伤以及继发的无菌性炎症，最终导致的角膜翼，甚至角膜白斑是眼部致残的常见原因。碱的浓度以及与角膜的接触时间不同可引起程度不同的角膜损害，Hughes、Roper-Hall及我国许多学者均提出过不同的诊断分级标准，目前国内的眼外伤与职业病协作小组通过的角膜烧伤的分为：I、II、III、IV共四度，四个等级。正确适当的抗炎治疗对于尽快恢复视功能、减少角膜翼，甚至角膜白斑十分重要。双醋瑞因是白细胞介素-1抑制剂，具有确切的抗炎作用，目前主要用于骨关节炎的治疗，近年来在其他疾病中的治疗作用逐渐受到关注，但是在眼科方面还无应用，本专利技术将双醋瑞因应用在角膜Ⅱ、Ⅲ度碱烧伤治疗中，从减轻碱烧伤浑浊程度、减小碱烧伤浑浊面积、加快角膜上皮修复、减轻碱烧伤角膜中性粒细胞及巨噬细胞浸润方面实现对II-III度角膜碱烧伤的治疗，改善角膜碱烧伤的预后。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了双醋瑞因在角膜Ⅱ-Ⅲ度碱烧伤治疗中的应用。所述的双醋瑞因为采用双醋瑞因为原料制备的滴眼制剂。本专利技术的有益效果在于：(1)双醋瑞因能够减轻碱烧伤角膜中性粒细胞浸润，减轻中性粒细胞引起的角膜损伤。角膜碱烧伤后，损伤区域募集的最主要的炎症细胞为中性粒细胞，中性粒细胞在角膜的损伤修复中起到了重要的作用，但是该细胞过度募集却会起到双刃剑作用：中性粒细胞释放的多种酶类(诸如MPO、MMP8等)以及氧自由基均可造成角膜胶原的降解，导致角膜组织的损伤。双醋瑞因能抑制碱烧伤局部过多的中性粒细胞浸润从而能减轻中性粒细胞引起的角膜损伤。(2)双醋瑞因能够降低角膜中MPO活性，减轻对角膜组织的损伤。MPO在中性粒细胞中表达最丰富，并产生低盐酸以发挥其抗菌活性。它是一种溶酶体蛋白，储存在中性粒细胞的嗜氮颗粒中，在脱颗粒过程中释放到细胞外空间。MPO是过氧化物酶亚家族的成员，在中性粒细胞呼吸爆发时，产生次氯酸和酪氨酸，次氯酸和酪氨酸自由基具有细胞毒性，可用来杀死细菌和其他病原体。然而，这种次氯酸也可能引起宿主组织的氧化损伤。我们的实验结果显示，双醋瑞因能够降低角膜中MPO活性，因此，可以减轻MPO释放的自由基对角膜组织的损伤。(4)双醋瑞因能够加快角膜上皮修复。角膜上皮是一种极薄的非角质化的复层鳞状上皮，由生长迅速、易再生的角膜上皮细胞组成，覆盖在角膜最表层，是角膜和眼球前部的屏障。碱烧伤破坏了角膜的上皮，II-III度角膜碱烧伤的角膜上皮完全脱落，上皮的愈合取决于角膜基底细胞进行的快速的增殖和迁移。双醋瑞因在碱烧伤后显示出促进角膜上皮修复的作用。(5)双醋瑞因能够减轻碱烧伤角膜的浑浊程度和浑浊面积。角膜是眼球最前方的透明部分。正常角膜高度透明，表面光滑，组织学分为五层：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层和内皮细胞层。角膜是视觉通路的一部分，角膜的透明性影响视力。碱烧伤时，角膜水肿以及角膜炎症介质以及各种酶类的释放，角膜胶原降解破坏造成角膜浑浊，影响视力。双醋瑞因能够减轻碱烧伤角膜的浑浊程度和浑浊面积，进而提高视力。附图说明图1为碱烧伤不同时间点各组小鼠角膜的中性粒细胞浸润情况。中性粒细胞被Gr-1-FITC标记为绿色荧光，在荧光显微镜下观察，中性粒细胞显示为绿色。由于用药开始时间为造模后36h(1.5d)，所以，造模后2d、3d、5d分别为用药后0.5d、1.5d、3.5d的角膜中性粒细胞的荧光显微镜图片。造模后2d小鼠中性粒细胞主要集中在角膜缘部位；造模后3d，角膜旁中央及损伤区中性粒细胞增加；造模后5d，小鼠中性粒细胞浸润减少。双醋瑞因组用药后各时间点中性粒细胞数量均较生理盐水对照组减少(标尺＝1000μm)。图2为碱烧伤不同时间点各组小鼠角膜上皮缺损情况。图2所有图片均为荧光素染色后在裂隙灯显微镜下用钴蓝光模式拍摄。由于用药开始时间为造模后36h(1.5d)，所以，6h和1.5d均为用药前照片，造模后2d、3d、4d、5d分别为用药后0.5d、1.5d、2.5d、3.5d的裂隙灯照片。造模后6h，碱烧伤部位角膜上皮完全缺损，荧光素全部着色。造模后1.5d，上皮缺损面积减少，呈现部分缺损。从2d到5d缺损面积逐渐减少。双醋瑞因组用药后各时间点均较生理盐水对照组缺损面积减少。图3为碱烧伤模型不同时间点各组小鼠角膜浑浊度典型图片。图3所有图片均为裂隙灯显微镜拍摄。由于用药开始时间为造模后36h(1.5d)，所以，1.5d为用药前照片，造模后2d、3d、4d、5d分别为用药后0.5d、1.5d、2.5d、3.5d的裂隙灯照片。造模后1.5d(用药前)，角膜中央中度混浊，透过病灶隐约可见瞳孔和虹膜。之后角膜浑浊进一步加重，病灶区瞳孔隐约可见，虹膜纹理几乎不可见。双醋瑞因组角膜浑浊度较生理盐水对照组有明显改善。图4为碱烧伤模型不同时间点各组小鼠角膜病灶浑浊面积的典型图片。图4所有图片均为裂隙灯显微镜拍摄。由于用药开始时间为造模后36h(1.5d)，所以，1.5d为用药前照片，造模后2d、3d、4d、5d分别为用药后0.5d、1.5d、2.5d、3.5d的裂隙灯照片。造模后前3天各组小鼠角膜混浊度及病灶浑浊面积均逐渐增加，3d生理盐水组病灶浑浊面积最大，之后混浊面积均逐渐下降。双醋瑞因组角膜浑浊面积较生理盐水对照组有明显缩小。具体实施方式为了说明双醋瑞因在治疗角膜碱烧伤中的治疗效果，专利技术人用常用的实验动物C57BL/6J制备了Ⅱ-Ⅲ度的角膜碱烧伤模型，对双醋瑞因滴眼液进行了药效学观察，并且以生理盐水作为无药物单纯溶媒对照。1、实验材料(1)实验动物SPF级C57BL/6J雄性小鼠，周龄8-12周，体重23-28g，购自南京大学-南京生物医药研究院，小鼠的饲养与使用均遵照视觉与眼科研究协会制定的科研动物使用规范，经河南省眼科学与视觉科学重点实验室管理及伦理审查委员会批准。(2)实验试剂及仪器设备试剂：NaOH(1310-73-2，美国Sigma公司)；双醋瑞因滴眼液(河南省眼科学与视觉科学重点实验室制备)；FITC/Gr-1(11-5931-85，eBioscience)；荧光素钠(H11619-1009，美国Alcon公司)；髓过氧化物酶(MPO)测试盒(A044，南京建成生物工程研究所)。仪器设备：手术显微镜(YZ20T4，苏州六六视觉科技股份有限公司)；裂隙灯(SLM-8E，中国康华瑞明)；角膜剪及显微镊(苏州明仁医疗器械厂)；全自动数字切片扫描仪(Pannoramic250/MIDI，匈牙利3DHISTECH)；离心机(D1008E，美国Scilogex公司)；分光光度计(UV-1601，日本Shimadzu公司)。2、实验方法(1)角膜碱烧伤模型的建立经裂隙灯检查角膜无异常后的小鼠，参照文献方法制作角膜碱烧伤模型，具体如下：按照80mg/kg的剂量腹腔内注射1％戊巴比妥钠进行全身麻醉，用4g/L盐酸奥布卡因滴眼液进行角膜表面麻醉，以直径2mm的圆形滤纸片浸入0.3mol/LNaOH溶液中60s，在干燥滤纸上吸除多余的碱液，立即均匀地贴于小鼠角膜中央6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.双醋瑞因在角膜II‑III度碱烧伤治疗中的应用。

【技术特征摘要】
1.双醋瑞因在角膜II-III度碱烧伤治疗中的应用。2.根据权利要求1所述的双醋瑞因在角膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：张红敏，刘素素，谢艳亭，陈世伟，代闫芳，岳娟，简守珺，董军璐，赵素华，柳慧，金鑫，
申请(专利权)人：河南省人民医院，
类型：发明
国别省市：河南,41