一种高致病性H7N9禽流感病毒、疫苗、检测试剂以及病毒、疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，该方法可以提高病毒的免疫原性，包括以下步骤：制备Q226L突变HA基因，制备Q226L突变的高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列，得到Q226L突变HA基因；拯救病毒，采用Q226L突变HA基因拯救重组流感病毒。本发明专利技术还公开了通过该方法制备的高致病性H7N9禽流感病毒、采用该高致病性H7N9禽流感病毒制备的疫苗及其制备方法、采用该高致病性H7N9禽流感病毒制备的检测试剂。本发明专利技术所述的高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法提升了重组病毒的生物安全性、提高免疫原性。

A highly pathogenic H7N9 avian influenza virus, vaccine, detection reagent and preparation method of virus and vaccine

【技术实现步骤摘要】
一种高致病性H7N9禽流感病毒、疫苗、检测试剂以及病毒、疫苗的制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及病毒基因工程
，尤其涉及一种高致病性H7N9禽流感病毒及其制备方法，本专利技术还涉及使用该高致病性H7N9禽流感病毒制备出的疫苗以及该疫苗的制备方法，本专利技术还涉及使用该高致病性H7N9禽流感病毒制备出的检测试剂。
技术介绍
甲(A)型流感病毒(InfluenzaAvirus)属于正黏病毒科，病毒主要呈球形，外有囊膜。甲型流感病毒基因组为8节段单股负链RNA，编码超过12种蛋白，其中囊膜表面的主要糖蛋白分别为血凝素蛋白(HA蛋白)和神经氨酸酶(NA)。根据HA蛋白和NA的不同，甲型流感病毒进一步分为18种HA亚型和11种NA亚型。甲型流感病毒基因组的复制依赖于RNA聚合酶。由于RNA聚合酶缺失校对活性，RNA复制保真性降低，导致流感病毒在复制过程中基因组极易发生突变。这些突变会引起流感病毒抗原性发生改变，即抗原漂变(Antigenicdrift)。同时，流感病毒基因组分节段的特性也使得其基因组易发生重排造成抗原转变(Antigenicshift)。当一种新的流感变异株出本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备Q226L突变HA基因：制备突变后的高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列，得到Q226L突变HA基因；拯救病毒：采用Q226L突变HA基因拯救重组流感病毒；其中，所述Q226L突变HA基因序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备Q226L突变HA基因：制备突变后的高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列，得到Q226L突变HA基因；拯救病毒：采用Q226L突变HA基因拯救重组流感病毒；其中，所述Q226L突变HA基因序列如SEQIDNO.2所示。2.根据权利要求1所述的高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，其特征在于，在制备Q226L突变HA基因步骤中，首先合成高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列，所述高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列如SEQIDNO.1所示；通过同源重组将高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列插入流感病毒反向遗传操作质粒pM中，制得pM-H7/GD16/WT质粒。3.根据权利要求2所述的高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，其特征在于，在制备Q226L突变HA基因步骤中，设计点突变引物对插入pM质粒的高致病性H7N9禽流感病毒全长HA蛋白的基因序列进行定点突变，制得pM-H7/GD16/Q226L质粒；其中，所述点突变引物的序列如SEQIDNO.5及SEQIDNO.6所示。4.根据权利要求1所述的高致病性H7N9禽流感病毒的制备方法，其特征在于，在拯救病毒步骤中，将pM-H7/GD16/Q226L质粒与PB2重组pM质粒、PB1重组pM质粒、PA重组pM质粒、NP重组pM质粒、NA重组pM质粒、M重组pM质粒及NS重组pM质粒混合，共转染至293T和MDC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洋，陈凌，潘蔚绮，吕云华，董记，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44