肾素浓度的免疫学测定方法技术

本发明专利技术已成功取得一种与非活性型肾素相比，对活性型肾素显示更高的反应性的抗体。本发明专利技术成功开发出一种通过使用该抗体，即使在肾素抑制剂的存在下，测定值仍与肾素活性显示强相关性的免疫学测定方法。

Immunoassay of renin concentration

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肾素浓度的免疫学测定方法
本专利技术是有关于一种对活性型肾素显示特异性的抗体、利用该抗体的肾素浓度的免疫学测定方法、包含该抗体的药剂、及包含该药剂的试剂盒。
技术介绍
肾素是一种经由肾素-血管紧张素-醛固酮系统来进行血压调节的蛋白质，其活性在高血压或原发性醛固酮增多症等的诊断中为重要的指标。因此，用来测定肾素活性或肾素浓度的方法的开发持续进行，目前在日本，检测利用血浆中的肾素使血管紧张素原分解所生成的血管紧张素-I的肾素活性测定方法已成主流(非专利文献1)。然而，此方法有肾素活性需取决于血浆中的血管紧张素原的浓度的问题。另一方面，作为不受血管紧张素原浓度的影响的方法，亦有人利用检测活性型肾素的方法。活性型的成熟肾素是由肾素原(prorenin)所生成；而肾素原存在有封闭结构(日语：クローズ構造)与开放结构(日语：オープン構造)此2种方式，其中开放结构为活性型。因此，在活性型肾素的测定中，亦有人开发出能以免疫学方式测定成熟肾素与开放结构肾素原此两者的方法(非专利文献1)。然而，此等使用于免疫学手法的抗体，甚而连因与肾素抑制剂结合而呈非活性化的成熟肾素或肾素原皆可识别(非专利文献2、3)，因此，在测定给药肾素抑制剂的患者的活性型肾素时，有测得的肾素浓度与肾素活性不显示相关性的问题。[现有技术文献][非专利文献][非专利文献1]CampbellDJetal.ClinChem.2009May；55(5):867-77[非专利文献2]CampbellDJ.Hypertension.2008Jan；51(1):15-8[非专利文献3]DerkxFH.ClinChem.1996Jul；42(7):1051-63
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题本专利技术鉴于此种情况而完成，其目的在于提供一种方法，其为以免疫学方式测定肾素浓度的方法，即使在肾素抑制剂的存在下，测得的肾素浓度仍与肾素活性显示相关性。又，本专利技术亦以提供一种用于该测定的活性型肾素特异性抗体、包含该活性型肾素特异性抗体的药剂、及包含该药剂的试剂盒为目的。用于解决问题的技术方案本案专利技术人等为解决前述课题，而建构出以免疫学方式测定肾素抑制剂存在下的肾素浓度的系统，并针对选出的抗体，利用该系统来评定添加肾素抑制剂时的肾素浓度的测定值与肾素活性的关系。其结果，终于由所评定的多个抗体中成功鉴定出在肾素抑制剂存在下测定出的肾素浓度与肾素活性极相关的多个抗体。所鉴定的抗体不仅在添加肾素抑制剂之一的阿利吉仑(Aliskiren)时，在添加其他的肾素抑制剂-肾素抑制剂III或VTP-27999时，测得的肾素浓度亦与肾素活性显示强相关性。此事实意味着：取得的抗体对未与肾素抑制剂结合而具有活性的肾素显示高反应性，另一方面对结合肾素抑制剂而呈非活性的肾素的反应性大幅降低。又，显示此种反应性的抗体可识别肾素上的共同的表位。另外，就市售的抗体，如以往报导所述，对结合肾素抑制剂而呈非活性的肾素亦显示高反应性，而完全未看出测得的肾素浓度与肾素活性的相关性。如此，本申请的专利技术人等于世界上首次成功开发出一种无论有无肾素抑制剂存在，对活性型肾素皆显示特异反应性的抗体，并成功利用该抗体，建构出测得的肾素浓度与肾素活性显示强相关性的免疫学测定方法，终至完成本专利技术。亦即，本专利技术是有关于一种对活性型肾素显示特异性的抗体、利用该抗体的肾素浓度的免疫学测定方法、包含该抗体的药剂、及包含该药剂的试剂盒，更详细而言，提供以下方案：[1]一种抗体，其与非活性型肾素相比，对活性型肾素显示更高的反应性。[2]如[1]的抗体，其与包含序列编号：1所记载的氨基酸序列的第30位至第86位的氨基酸序列的肽结合。[3]一种使用抗体来测定试样中的肾素浓度的方法，其中，该抗体为如[1]或[2]的抗体。[4]一种试剂盒，其为用于如[3]的方法的试剂盒，其至少包含如[1]或[2]的抗体。[5]一种药剂，其为用来检测试样中的肾素的药剂，其包含如[1]或[2]的抗体。专利技术的效果根据本专利技术，在肾素抑制剂的存在下，亦可与在其未存在下同样地获得与肾素活性有关的肾素浓度的测定值。因此，对于给药肾素抑制剂的患者亦可进行确实的诊断。又，本专利技术的方法也没有像以血管紧张素原的由肾素所分解的产物的血管紧张素-I为指标的肾素活性的测定方法般，测定值会受到血浆中的血管紧张素原浓度的影响的问题。因此，本专利技术在原发性醛固酮增多症等与肾素活性有关的疾病的诊断等中极为有用。附图说明图1为表示利用SDS-PAGE分析来检测重组肾素原及重组成熟肾素的结果的照片。图2为表示制作的各抗成熟肾素抗体对成熟肾素及肾素原的反应性的图。图3为表示各市售抗体对成熟肾素及肾素原的反应性的图。图4为表示根据使用市售抗体12-12与11-6的组合的夹心ELISA(SandwichELISA,夹心酶联免疫吸附法)的添加阿利吉仑时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。图5为表示根据使用本公司抗体RREN33H11与RREN21E10-19的组合的夹心ELISA的添加阿利吉仑时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。图6为表示各本公司抗体及各市售抗体在添加阿利吉仑时及未添加时对成熟肾素的反应性的图。图7为表示根据使用本公司抗体rREN-I-115与RREN21E10-19的组合的夹心ELISA的添加阿利吉仑时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。于上图，直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。于下图，图中的横轴取相对肾素活性、纵轴取肾素浓度(Abs.450nm)而表示。图8为表示根据使用本公司抗体RREN63A8与RREN21E10-19的组合的夹心ELISA的添加阿利吉仑时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。作为阴性对照组，是使用市售抗体12-12与11-6的组合。直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。图9为表示根据使用市售抗体12-12与11-6的组合的夹心ELISA的添加肾素抑制剂III时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。图10为表示根据使用本公司抗体rREN-I-115或者RREN33H11与RREN21E10-19的组合的夹心ELISA的添加肾素抑制剂III时的肾素浓度与肾素活性的相关性的图。作为阴性对照组，使用市售抗体12-12与11-6的组合。直方图表示肾素活性，折线图表示肾素浓度。图中的横轴取阿利吉仑浓度、纵轴取相对肾素活性(左)与肾素浓度(右)而表示。图11为表示根据使用本公司抗体rREN-I-115与RREN21E10-19的组合的夹心ELISA，来测定添加阿利吉仑时及未添加时对肾素原的反应性的结果的图。图中的横轴取添加的肾素原浓度、纵轴取测得的肾素原浓度(Abs.450nm)而表示。图12为表示使用于表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，其与非活性型肾素相比，对活性型肾素显示更高的反应性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.21 JP 2016-2069571.一种抗体，其与非活性型肾素相比，对活性型肾素显示更高的反应性。2.如权利要求1的抗体，其与包含序列编号：1所记载的氨基酸序列的第30位至第86位的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐久拓弥，滨野久美子，原隆二郎，
申请(专利权)人：富士瑞必欧株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP