厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术公开了厚藤HPLC/UPLC指纹图谱的建立方法，采用高效/超高效液相色谱，以厚藤中的主要成分绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C为参照物，据此获得了厚藤药材共有模式的HPLC/UPLC指纹图谱。其中，HPLC指纹图谱中可以检测到13个共有峰，UPLC指纹图谱可以检测到16个共有峰，10批厚藤药材HPLC指纹图谱与共有模式的相似度均大于0.956，10批厚藤药材UPLC指纹图谱与共有模式的相似度均大于0.945，厚藤HPLC指纹图谱、UPLC指纹图谱及其共有模式均可为厚藤的真伪鉴别、质量优劣提供科学的依据，可根据实际情况运用。

Establishment of HPLC Fingerprint and UPLC Fingerprint of Rhizoma Caulis

【技术实现步骤摘要】
厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法
本专利技术属于中药指纹图谱
，尤其涉及厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法。
技术介绍
中药指纹图谱概念的起源是一种刑侦手段——“指纹鉴定”。中药指纹图谱技术分为中药生物指纹图谱和中药化学指纹图谱，其中，中药化学指纹图谱应用了非同种植物化学特征的多样性及同种植物化学成分的相似性原理，中药化学成分复杂多变，受自然环境、生长年限、采收炮制方法的影响变化较大，然而同种植物受制于基因调控，次生代谢的主成分具有稳定性和唯一性，同理不同种植物间的主成分类别有显著差异性。利用该原理，借助现代色谱技术，不但可以鉴别中药真伪、质量优劣、品质均一性，而且现代分析仪器可反馈出整体、大数据量信息，包括已知成分、未知成分；主要成分、微量成分；药效成分、当前无药效研究成分等综合信息。所以，中药指纹图谱技术可用于有效成分不明确的中药质量控制，也可为中药产区、采收、加工、储存期限等提供控制。但将中药指纹图谱应用到实际生产加工时，必须建立计算机模式识别系统，而化学计量学作为桥梁至关重要。化学计量学研究是一门涉及化学、统计学及计算机科学的交叉学科，其最大优点就是可对未知的、无规律的化学研究数据进行多变量分析，挖掘到更多隐藏的信息，对于多组分、多靶点的中药具有重大意义。中药指纹图谱技术近年来发展迅速，包括薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X-射线衍射法等光谱法。目前，以色谱方法最为常用，由于HPLC具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，已成为公认的一种常规分析手段。超高效液相色谱(UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)是在传统的高效液相色谱(HPLC)基础上发展起来的，和HPLC相比，具有更高的分离度、速度和灵敏度等优点。目前多应用于代谢组学分析及其他一些生化领域，在天然产物的分析方面运用也逐渐兴起。使用UPLC进行指纹图谱研究，进而建立新型质量控制方法，对于中药质量控制研究领域的发展将是一个极大的促进。目前，关于厚藤的中药指纹图谱鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法，为厚藤药材的质量控制提供更为科学、合理、详实的依据。为解决上述技术问题，本专利技术以下技术方案：厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用；(3)色谱条件：色谱柱为安捷伦色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.1％磷酸水系统，紫外检测波长为254nm；(4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到HPLC指纹图谱。步骤(1)按以下操作进行：精密称定适量绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加甲醇分别定容于5mL棕色容量瓶，配制成绿原酸3.0080mɡ/mL、咖啡酸2.0960mɡ/mL、异槲皮苷2.0300mɡ/mL、异绿原酸B3.0400mɡ/mL、异绿原酸A3.0400mɡ/mL、异绿原酸C3.0480mɡ/mL的标准溶液；精密移取以上标准溶液配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液。步骤(3)的色谱条件为：色谱柱：AnglientHC-C18(2)色谱柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；流速：1.0ml/min；柱温：30±5℃；检测波长：λ＝254nm；进样量：5μL；洗脱梯度，A为乙腈：0～10min，7％～8％A；10～20min，8％～12％A；20～30min，12％～16％A；30～40min，16％～17％A；40～50min，17％～19％A；50～65min，19％～20％A；65～70min，25％～27％A；70～75min，25～27％A；85～86min，36～40％A；86～92min，40％～40％A；92～97min，40％～85％A。厚藤UPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用；(3)色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液，紫外检测波长为254nm；(4)测定：精密吸取供试品溶液注入超高效液相色谱仪测定，得到UPLC指纹图谱。步骤(1)按以下操作进行：精密称定适量绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加甲醇分别定容于5mL棕色容量瓶，配制成绿原酸3.0080mɡ/mL、咖啡酸2.0960mɡ/mL、异槲皮苷2.0300mɡ/mL、异绿原酸B3.0400mɡ/mL、异绿原酸A3.0400mɡ/mL、异绿原酸C3.0480mɡ/mL的标准溶液；精密移取以上标准溶液配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液。步骤(3)的色谱条件为：色谱柱：AcquityUPLCBEHC18色谱柱，型号：100mmX2.1mm，1.7μm；流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液；洗脱程序，A为乙腈：0～3min，13％～13％A；3～4min，13％～19％A；4～8min，19％～19％A；8～9min，19％～25％A；9～12min,25％～35％A；12～14min，35％～95％A；流速：0.2ml/min；柱温：35±5℃；检测波长：λ＝254nm；进样量：2μL。HPLC指纹图谱共有峰13个，其中六个峰分别为绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的色谱峰。UPLC指纹图谱共有峰16个，其中六个峰分别为绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的色谱峰。为提高厚藤药材的质量控制和真伪鉴别的水平，专利技术人建立了厚藤HPLC/UPLC指纹图谱的建立方法，采用高效/超高效本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B 0.4001mɡ/mL、异绿原酸A 0.8001mɡ/mL、异绿原酸C 0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用；(3)色谱条件：色谱柱为安捷伦色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈‑0.1％磷酸水系统，紫外检测波长为254nm；(4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到HPLC指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用；(3)色谱条件：色谱柱为安捷伦色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.1％磷酸水系统，紫外检测波长为254nm；(4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到HPLC指纹图谱。2.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤(1)按以下操作进行：精密称定适量绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加甲醇分别定容于5mL棕色容量瓶，配制成绿原酸3.0080mɡ/mL、咖啡酸2.0960mɡ/mL、异槲皮苷2.0300mɡ/mL、异绿原酸B3.0400mɡ/mL、异绿原酸A3.0400mɡ/mL、异绿原酸C3.0480mɡ/mL的标准溶液；精密移取以上标准溶液配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B0.4001mɡ/mL、异绿原酸A0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液。3.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)的色谱条件为：色谱柱：AnglientHC-C18(2)色谱柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；流速：1.0ml/min；柱温：30±5℃；检测波长：λ＝254nm；进样量：5μL；洗脱梯度，A为乙腈：0～10min，7％～8％A；10～20min，8％～12％A；20～30min，12％～16％A；30～40min，16％～17％A；40～50min，17％～19％A；50～65min，19％～20％A；65～70min，25％～27％A；70～75min，25～27％A；85～86min，36～40％A；86～92min，40％～40％A；92～97min，40％～85％A。4.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述HPLC指纹图谱共有峰13个...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯小涛，邓家刚，郝二伟，杜正彩，冯小慧，韦玮，秦健峰，易湘茜，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45