本发明专利技术涉及一种利用DPPH‑UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法，包括以下步骤：将与DPPH反应前和反应后的待测样品分别进行超高效液相色谱仪检测；根据UPLC检测得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，计算没食子酸和鞣花酸含量及清除率。本发明专利技术能够同时检测桃金娘根中有效物质的抗氧化性及其含量；且操作简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高，可用于评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。
A Method for Simultaneous Evaluation of Antioxidant Components and Contents in the Roots of Myrtle
【技术实现步骤摘要】
一种同时评价桃金娘根中抗氧化活性成分和含量的方法
本专利技术涉及中药材抗氧化活性成分分析领域，具体为一种利用DPPH-UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法。
技术介绍
桃金娘根中的主要有效成分为没食子酸和鞣花酸，而没食子酸和鞣花酸已被证实具有抗氧化功效，因此，评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，能够为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。目前，评价中药材中有效成分抗氧化性的方法主要为UV法、HPLC-UV-DPPH法、HPLC-DPPH-UV-MS法等。UV法繁琐，试剂消耗大，耗时长，重现性差；HPLC-UV-DPPH法耗时长；HPLC-DPPH-UV-MS法仪器价格昂贵，对操作人员要求高，普及率不高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，利用超高效液相色谱(UPLC)具有超高速度、灵敏度、分离度等优点，以及DPPH与自由基反应后吸收减弱的原理，基于UPLC建立一种快速、简便的同时评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分和含量的方法。本专利技术解决上述技术问题所采取的技术方案是：一种利用DPPH-UPLC同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，包括以下步骤：(1)桃金娘根鉴定；(2)标准溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸50～500μg/mL和鞣花酸50～500μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；(3)供试品溶液的制备：将干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.1～1.0g桃金娘根粉末置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入10～150mL甲醇，称定重量，在50～1500W，25～100kHz，25～60℃条件下超声提取10～90min，放冷，过滤，挥干，甲醇溶解残渣，并定容至25mL容量瓶中。分别精密吸取5mL上述溶液置10mL棕色容量瓶内，分别加入甲醇和5.04mmol/L的DPPH溶液定容至刻度，摇匀，室温下避光反应10～60min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液，所有供试品溶液过0.2μm滤膜后再进行测定。(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：色谱柱：2.1mm×100mm、1.6μmWatersT3色谱柱；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：6％乙腈0～2min，6％～16％乙腈2～3min，16％～20％乙腈3～8min，6％乙腈8～10min；检测波长：240～350nm；流速：0.1～0.5mL/min；柱温：25～50℃；进样体积0.5～10μL。(5)成分含量及其抗氧化作用评价：记录UPLC测定得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，依据下式计算清除率：清除率＝1-A/A0，其中A0为DPPH反应前化合物峰面积，A为DPPH反应后化合物峰面积，评价桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量和抗氧化能力。本专利技术利用DPPH-UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法，与现有技术相比具有以下优点和积极效果：(1)本专利技术能够同时检测桃金娘根中有效物质的抗氧化性及其含量；(2)本专利技术操作简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高。(3)本专利技术可用于评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，能够为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。附图说明图1为本专利技术中没食子酸和鞣花酸混合对照品、DPPH反应前供试品和DPPH反应后供试品溶液的UPLC色谱图，其中A代表没食子酸和鞣花酸混合对照品，B为DPPH反应前供试品，C为DPPH反应后供试品，峰1为没食子酸，峰2为鞣花酸。具体实施方式下面结合具体实施方法和附图对本专利技术的技术方案做进一步说明。以下所述两个实施例所采用的桃金娘根药材产地分别为广西玉林和广西金秀，经广西植物研究所温放副研究员鉴定为桃金娘根。实施例1(1)标准溶液的配置：分别精密称取适量没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸98.72μg/mL和鞣花酸74.01μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；(2)样品前处理：将产地为广西金秀的干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.5g细粉置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入50mL甲醇，称定重量，超声(350W，53kHz，35℃)提取40min，放冷，过滤，挥干，甲醇溶解残渣，并定容至25mL容量瓶中。分别精密吸取5mL上述溶液置10mL棕色容量瓶内，分别加入甲醇和5.04mmol/L的DPPH溶液定容至刻度，摇匀，室温下避光反应30min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液，过0.2μm滤膜后再进行测定。(3)色谱条件：色谱柱：WatersT3色谱柱(2.1mm×100mm，1.6μm)；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：0～2min，6％乙腈；2～3min，6％～16％乙腈；3～8min，16％～20％乙腈；8～10min，6％乙腈；检测波长：271nm；流速：0.25mL/min；柱温：35℃；进样体积5μL。(4)成分含量及其抗氧化作用评价：依据下式计算清除率：清除率＝1-A/A0(A0为DPPH反应前化合物峰面积，A为DPPH反应后化合物峰面积)。广西金秀桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量及其清除率见表1。结果显示桃金娘根中的没食子酸和鞣花酸都具有较强的抗氧化能力，其中，鞣花酸的抗氧化能力高于没食子酸。表1没食子酸和鞣花酸的含量及清除率(n＝3)实施例2(1)标准溶液的配置同实施例1。(2)样品前处理：将产地为广西玉林的干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.5g细粉置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入50mL甲醇，称定重量，超声(350W，53kHz，40℃)提取30min，放冷，过滤，挥干，甲醇溶解残渣，并定容至25mL容量瓶中。分别精密吸取5mL上述溶液置10mL棕色容量瓶内，分别加入甲醇和5.04mmol/L的DPPH溶液定容至刻度，摇匀，室温下避光反应30min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液，过0.2μm滤膜后再进行测定。(3)色谱条件同实施例1。(4)成分含量及其抗氧化作用评价：依据下式计算清除率：清除率＝1-A/A0(A0为DPPH反应前化合物峰面积，A为DPPH反应后化合物峰面积)。广西玉林桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量及其清除率见表2。结果显示桃金娘根中的没食子酸和鞣花酸都具有较强的抗氧化能力，其中，鞣花酸的抗氧化能力高于没食子酸。表2没食子酸和鞣花酸的含量及清除率(n＝3)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用DPPH‑UPLC同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)桃金娘根鉴定；(2)标准溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸50～500μg/mL和鞣花酸50～500μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；(3)供试品溶液的制备：将干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；称取桃金娘根粉末置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶解后称定重量，在50～1500W、25～100kHz、25～60℃条件下超声提取10～90min，放冷，过滤，挥干，加入甲醇溶解残渣并定容；再分别吸取所得溶液置两个棕色容量瓶内，分别加入甲醇和DPPH溶液定容，摇匀，室温下避光反应10～60min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液；(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：色谱柱：2.1mm×100mm、1.6μm Waters
【技术特征摘要】
1.一种利用DPPH-UPLC同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)桃金娘根鉴定；(2)标准溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸50～500μg/mL和鞣花酸50～500μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；(3)供试品溶液的制备：将干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；称取桃金娘根粉末置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶解后称定重量，在50～1500W、25～100kHz、25～60℃条件下超声提取10～90min，放冷，过滤，挥干，加入甲醇溶解残渣并定容；再分别吸取所得溶液置两个棕色容量瓶内，分别加入甲醇和DPPH溶液定容，摇匀，室温下避光反应10～60min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液；(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：色谱柱：2.1mm×100mm、1.6μmWatersT3色谱柱；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：6％乙腈0～2min，6％～16％乙腈2～3min，16％～20％乙腈3～8min，6％乙腈8～10min；检...
【专利技术属性】
技术研发人员：银慧慧，刘伟，赵武，孟菲，姜源明，覃振华，孙建华，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。