栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，特别涉及栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用。本发明专利技术所述栅藻(Desmodesmus armatus)保藏在中国典型培养物保藏中心，CCTCCNO:M2019211。将该微藻作为饵料、饵料添加剂分别投喂鲤鱼幼鱼，均能够明显提高鲤鱼的体重、体长和肥满度，结果表明本发明专利技术所述栅藻可有效促进鲤鱼生长，适合淡水动物养殖，可用于制备淡水动物饵料及饵料添加剂，应用前景较广。

Scenedesmus and its application as bait/bait additive

【技术实现步骤摘要】
栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用
本专利技术涉及微生物
，特别涉及栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用。
技术介绍
微藻是在全球经济中未被充分利用的广阔的可再生资源。微藻生长所占耕地面积少，可以有效减轻土地压力。微藻作为丰富且相对容易培养的资源正在不断增加，并且正在广泛应用到多个领域。微藻不同的代谢途径合成的化合物种类繁多，可提供多种高附加值营养物质。当前我国的水产养殖中高密度的养殖模式被普遍采用，养殖过程中产生大量的残饵和养殖动物的代谢排泄物等有机物分解常造成水体富营养化。微藻生物饵料具有良好的营养价值、不污染水质等优点。目前，部分微藻已被用作幼鱼、幼体贝类和鱼类的养殖饲料，以及饲养幼年动物所需的浮游动物。其营养物质可防御多种疾病，促进鱼、虾、蟹、贝类等水产生物的生长和品质，是水产养殖过程中应用最普遍的生物饵料。在水产养殖中最常使用的微藻有螺旋藻、小球藻、扁藻、等鞭金藻、三角褐指藻、角毛藻和骨条藻等。栅藻是淡水中常见的一种藻类，又称栅列藻，属于绿藻门、绿球藻目、栅藻科、栅藻属。细胞常为椭圆形或纺锤形，以长轴排成1～2列或多列。栅藻营养丰富、生长速率快、对水环境污染物具有一定的耐受性，常作为指示生物应用于水质评价。近年来，栅藻主要用来处理水产养殖废水，减轻水产养殖环境压力。栅藻在处理养殖废水的同时，能为经济类水产养殖动物提供饵料，将促进水产养殖的可持续发展。栅藻能产生大量功能化合物，如类胡萝卜素，不饱和脂肪酸等，在适合的培养条件下还可获得生物柴油、蛋白质等高附加值产品。大量繁殖的藻体也可作为家禽、水生动物的饲料。尽管微藻具有良好的应用前景，并且相关的研究正在大力发展，但是目前已知的微藻，尤其是栅藻，营养价值较高且适合水产养殖的极为少见。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用，使得该藻株能够显著提高水产动物的生长。本专利技术从自然水体中分离获得一株栅藻(Desmodesmusarmatus)，命名B38，其保藏编号为CCTCCNO:M2019211，分离方法如下：于自然水体中采集藻种，除去杂物，使用平板划线法将藻种在固体培养基上进行划线、培养。纯化后的藻株再经平板划线纯化后，通过光学显微就观察是否为相同藻株，用接种环挑出单藻落，将藻体转移至装有BG11培养基的无菌试管中培养，然后接种到含BG11培养基的锥形瓶中培养，获得藻株B38。使用MEGA7.0对ITS扩增产物进行分析，通过邻接法(Neighbor-Joining)构建系统发育树对微藻的种属进行鉴定，结合形态学鉴定结果鉴定该微藻为栅藻(Desmodesmusarmatus)，命名为栅藻B38(DesmodesmusarmatusB38)。本专利技术所述栅藻B38(DesmodesmusarmatusB38)已于2019年3月28日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2019211。在一个具体实施例中，将本专利技术栅藻作为饵料、饵料添加剂分别投喂鲤鱼幼鱼，均能够明显提高鲤鱼的体重、体长和肥满度，结果表明本专利技术栅藻可有效促进鲤鱼生长，且培养期间鲤鱼幼鱼均未出现死亡现象。因此，本专利技术还提供了所述栅藻在制备促进水产动物生长的产品中的应用。作为优选，所述水产动物为鱼类。在一些具体实施例中，所述鱼类为鲤鱼。作为优选，所述产品为水产动物饵料或水产动物饵料添加剂。本专利技术还提供了由所述栅藻制得的水产动物饵料。所述水产动物饵料的制备方法为：将保藏编号为CCTCCNO:M2019211的栅藻经絮凝、离心、洗涤、冻干，获得所述鱼类饵料。本专利技术还提供一种复合饵料，所述水产动物饵料和基础饵料组成的本专利技术提供的复合饵料中，基础饵料可以为水产动物养殖领域中常用的种类。优选的，本专利技术采用以蛋白质为主要成分的基础饵料，基础饵料的营养成分为：粗蛋白含量≥40％；粗脂肪含量≥5％；粗纤维含量≥3％；水分含量≥10％。在一些实施方案中，所述水产动物饵料添加剂和所述基础饵料的质量比为1:1～1:4。在一些具体实施例中，所述水产动物饵料添加剂和所述基础饵料的质量比为1:2。经检测，本专利技术所述栅藻B38蛋白质含量丰富，可达49％及以上，将其作为饵料、饵料添加剂分别投喂鲤鱼幼鱼，均能够明显提高鲤鱼的体重、体长和肥满度，结果表明本专利技术所述栅藻可有效促进鲤鱼生长，适合淡水动物养殖，可用于制备淡水动物饵料及饵料添加剂，应用前景较广。生物保藏说明栅藻B38(DesmodesmusarmatusB38)，于2019年3月28日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2019211。附图说明图1为栅藻细胞显微镜图像(40×)；图2为ITS序列的系统发育树。具体实施方式本专利技术公开了一种栅藻及其作为饵料/饵料添加剂的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1藻种的分离、纯化实验藻种采集于自然水体中，除去杂物，使用平板划线法将藻种在固体培养基上进行划线，于27±1℃，光照强度108μmolm-2s-1，光照周期12：12h条件下培养20d。纯化后的藻株再经平板划线纯化后，通过光学显微就观察是否为相同藻株，用接种环挑出单藻落，将藻体转移至装有10mL培养基的无菌试管中，在相同条件下培养15d后，将BG11培养基分装于500mL锥形瓶中，每瓶250mL，121℃灭菌30min，待培养基冷却后，取5mL长势良好的藻液接种于锥形瓶中，置于光照摇床中培养15d，光照摇床设置为转速120rpm，温度27±1℃，光密度光照强度108μmolm-2s-1。表1BG11培养基组成实施例2藻种鉴定微藻的形态学鉴定：使用光学显微镜观察微藻的形态，根据形态学初步鉴定。藻种分子生物学鉴定：取待测藻粉50mg,根据植物DNA提取试剂盒(HPPlantDNAKit)使用手册上的方法对微藻的基因组总DNA进行提取。使用紫外分光光度计在260nm下对DNA的存在和浓度进行检测。使用PCR仪对提取出的微藻DNA进行扩增。PCR反应采用ITS序列通用引物进行扩增。ITS序列为：5'–TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'(Forward)和5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'(Reverse)。PCR(50μL)反应体系：2μLDNA模板，1μL(10μmmol/L)前引物，1μL(10μmmol/L)后引物，5μL(2μmmol/L)dNTPs，5μL10×DreamTaqTMBuffer，0.5μLDreamTaqTMDNA聚合酶和35.5μLddH2O.PCR热循环反应条件：95℃预变性5min，94℃变性30s循环35次，59℃退火30s，72℃延伸1min，最后72℃终延伸10min。扩增产物使用1.5％琼脂糖凝胶电泳进行分离检测，最终产物与MarkDNA进行对比从而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.栅藻(Desmodesmus armatus)，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO:M2019211。

【技术特征摘要】
1.栅藻(Desmodesmusarmatus)，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO:M2019211。2.权利要求1所述的栅藻在制备促进水产动物生长的产品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述水产动物为鱼类。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述鱼类为鲤鱼。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品为水产动物饵料或水产动物饵料添加剂。6.权利要求1所述的栅藻制得的水产动物饵料。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平怀，王盛林，王秀海，刘积光，曹猛，潘孝妍，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46