一种具有抗菌活性的放线菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物菌种及其应用领域，具体的说是一种具有抗菌活性的放线菌及其应用。放线菌为糖多孢菌Saccharopolyspora sp.MG16044，已于2019年3月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCC NO：17274。本发明专利技术糖多孢菌分离自海洋沉积物中，对草莓灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌等均有较好的抑菌活性，表明该菌在生物农药、微生物制剂及其他抗菌相关领域具有较好的开发应用前景。

An Actinomycete with Antibacterial Activity and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗菌活性的放线菌及其应用
本专利技术涉及微生物菌种及其应用领域，具体的说是一种具有抗菌活性的放线菌及其应用。
技术介绍
植物病害一直是农业生产中存在的一个严重威胁，世纪全球气候变化给粮食作物带来严重的流行病害，对未来的粮食安全构成巨大的威胁。作物保护是确保农业可持续发展的一个重要手段。我国农用抗生素的研究起始于二十世纪50年代，相继成功开发井冈霉素、春雷霉素、灭瘟素、公主岭霉素、庆丰霉素、中生菌素等十多种农用抗生素，为我国农业作物病虫害的防治及农作物的丰产提供了强有力保障。对于造成全球粮食和其他作物的严重减产的植物病害来说，杀菌剂仍是防治植物病害的首要选择。但是，合成农药给环境及人类健康带来了一定的安全隐患，因此，农业的可持续发展需要一种新的、安全的植物病害防治措施来实现。在这一大环境下，人们对以微生物为基础的制剂或这类制剂与化学药品结合制成生物防治剂来防治植物病害越来越感兴趣。放线菌是一种革兰氏阳性菌，其次级代谢产物结构多样并且具有广泛的生物活性，是酶制剂、有机酸等多种活性物质的主要产生者，是新颖生物活性次生代谢产物的重要来源，所产次生代谢产物涉及生物碱、蒽醌、内酯、黄酮及酚等。其代谢产物其中许多已广泛应用在医药、农业和畜牧业中并体现出重要价值。海洋中的微生物为了适应诸如低温、高盐、高压、无光等各种极端条件，其生长特性、营养需求、繁殖规律、细胞结构、膜结构、蛋白及酶的结构、核酸结构、基因表达调控等均与普通环境中的微生物有着巨大的差异。生存于海洋这种特殊生境的放线菌，经过长期的进化选择，必然具有特殊的代谢类型，从而合成结构新颖、独特、生物活性广泛的次生代谢产物，这必然将极大地提高新颖生物活性化合物的发现几率，是发现具有生物活性的新结构天然产物的宝藏。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有抗菌活性的放线菌及其应用。为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：一种具有抗菌活性的放线菌，放线菌为糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044，已于2019年3月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCCNO：17274。所述糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044为革兰氏阳性菌，通过下述方法分离得到：将海洋沉积物样品置于通风处自然风干，然后用无菌研钵研成粉末，称取1g土样加入到99mL无菌水中，水浴37℃，温育15min，采用梯度稀释涂布法使其终浓度为10-3g/mL、10-4g/mL，取0.2mL涂布于分离培养基上，培养4周。该菌株气生菌丝发达，在ISP2、ISP4、高氏一号及R2A培养基上生长良好。生长温度范围为10-37℃,最适生长温度为28℃，pH生长范围为6.0-11.0，最适pH为7.2，盐浓度（NaCl）生长范围为0-5%。菌株全细胞壁氨基酸DAP类型主要组分为meso-DAP；全细胞水解产物主要包括半乳糖和阿拉伯糖；极性脂主要由双磷脂酰甘油(DPG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)等组成；甲基萘醌主要为MK-9(H4)；主要脂肪酸为iso-C15:0,iso-C16:0,iso-C17:0,anteiso-C17:0和C17:0,基因组DNA(G+C)含量为70.6mol%，在发酵培养基中产生具有抗革兰氏阳性菌及真菌等多种活性化合物。该菌株16SrRNA基因序列与最近有效菌株SaccharopolysporagloriosaeYIM60513T(EU005371)的相似率为98.11%，且在进化树上成独立分支，为潜在新菌种。一种具有抗菌活性的放线菌的应用，所述菌株在防治真菌中的应用。所述真菌为草莓灰霉病菌、芦笋茎枯病菌、黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌或水稻稻瘟病菌。一种菌剂，菌剂含所述糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044。所述糖多孢菌为该菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵菌丝体或发酵分离上清液。一种菌剂的应用，所述菌剂在防治真菌中的应用。所述真菌为草莓灰霉病菌、芦笋茎枯病菌、黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌或水稻稻瘟病菌。本专利技术所具有的优点：本专利技术糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044分离自海洋沉积物中，对草莓灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌等均有较好的抑菌活性，表明该菌在生物农药、微生物制剂及其他抗菌相关领域具有较好的开发应用前景。附图说明：图1是本专利技术实施例提到的糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044于ISP2培养一周后的照片。图2是本专利技术实施例提到的糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044的抑菌圈活性照片。图3是本专利技术实施例提到的基于16SrRNA基因序列构建的菌株Saccharopolysporasp.MG16044与其邻近糖多孢菌属菌株的系统进化树。具体实施方法下面举实施例说明本专利技术，但是本专利技术并不限于下述实施例。以下结合实例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本专利技术，并不局限于本专利技术。实施例1：糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044的筛选和分离及鉴定将海洋沉积物置于通风处自然风干，然后用无菌研钵研成粉末，称取上述粉碎的土样1g加入到99mL无菌水中，水浴37℃，温育15min；采用梯度稀释涂布法使其终浓度为10-3、10-4g/mL，取0.2mL涂布于分离培养基上，28℃恒温培养4-8周。分离培养基：蛋白胨5g，酵母提取物1g，柠檬酸铁0.1g，氯化钠19.45g，氯化镁5.9g，硫酸镁3.24g，氯化钙1.8g，氯化钾0.55g，碳酸氢钠0.16g，溴化钾0.08g，氯化锶34g，硼酸22g，硅酸钠4g，氟化钠2.4g，硝酸铵1.6g，磷酸二钠8g，琼脂20g，海水和蒸馏水各500mL，pH7.8。121℃高温高压灭菌20min。根据上述于分离培养基中形成的菌落形态特征和生长特性，挑取单菌落，以ISP2培养基作为纯化培养基进行菌株的分离纯化，将纯化得到的菌株接种于ISP2斜面培养基，置于4℃保存。同时，以15%甘油作为保护剂，-80℃保藏。实施例2：糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044的生长特性将上述筛选获得菌株接种在ISP2培养基上，分别在4℃、10℃、15℃、20℃、28℃、32℃、37℃、42℃、45℃培养，每周观察一次，四周结束，重复2次；再将上述筛选获得菌株接种在含有不同浓度NaCl（不同浓度的NaCl依次为0%，3%，5%，8%，10%，15%）的ISP2培养基内，37℃培养，每周观察一次，四周结束，重复2次；另，再将上述筛选获得菌株接种在含有不同缓冲液（不同缓冲液为：pHBuffer：pH5.0-5.5：0.1M柠檬酸-0.1M柠檬酸钠；pH6.0-8.0：10mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸-0.5MNaOH；pH8.5-11.5：0.5MNaHCO3-0.5MNa2CO3）的ISP2培养基中，并以空白培养基作阴性对照，37℃培养，每周观察一次，四周结束，重复2次。结果表明：菌株生长温度范围为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗菌活性的放线菌，其特征在于：放线菌为糖多孢菌

【技术特征摘要】
1.一种具有抗菌活性的放线菌，其特征在于：放线菌为糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044，已于2019年3月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：17274。2.按权利要求1所述的具有抗菌活性的放线菌，其特征在于：所述菌株糖多孢菌Saccharopolysporasp.MG16044为革兰氏阳性菌，气生菌丝发达，生长温度范围为10-37℃,最适生长温度为28℃，pH生长范围为6.0-11.0，最适pH为7.2，盐浓度（NaCl）生长范围为0-5%；菌株全细胞壁氨基酸DAP类型主要组分为meso-DAP；全细胞水解产物主要包括半乳糖和阿拉伯糖；极性脂主要由双磷脂酰甘油(DPG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)等组成；甲基萘醌主要为MK-9(H4)；主要脂肪酸为iso-C15:0,is...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢则平，郭琳，刘掬汀，刘军鹏，冯大伟，王一平，
申请(专利权)人：烟台水禾土生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37