一种白桦花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法技术

本发明专利技术提供了本发明专利技术涉及一种白桦花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法，该白桦花粉变应原浸液，其白桦花粉变应原含如SEQ ID NO.4‑SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。白桦花粉变应原浸液还可经白桦花粉收集、干燥、脱脂、提取、超滤浓缩、冷冻干燥、复溶等工艺方法制得。该白桦花粉变应原浸液具有特异性高的特点，白桦致敏蛋白组分提取充分，总生物效价稳定，有效期长，无菌效果好；可有效用于变态反应疾病的皮肤点刺试验诊断、体外嗜碱性粒细胞活化试验诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由白桦花粉诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

A birch pollen allergen extract, its extract and preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种白桦花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种白桦花粉标准化变应原浸提物、其浸液及其制备方法。
技术介绍
人们对变态反应疾病的认识始于“花粉热”，花粉热又称过敏性鼻炎。1911年Noon和Freeman首次利用花粉提取液来治疗花粉热，变态原疾病治疗的历史从此开始。目前，变态反应性疾病是全球性重大卫生问题之一。工业化国家超过25％的人口被变应性哮喘、变应性鼻结膜炎及变应性皮炎困扰，其中以变应性哮喘最为常见。吸入致敏花粉是引发变应性哮喘及其他呼吸道变态反应性疾病的最重要因素。VRTA—L.A等调查发现近50％的变态反应性疾病患者对草类花粉过敏。中国白桦(BetulaplatyphyllaSuk)属山毛榉目桦木科桦木属，生海拔400-4100米的山坡或林中，适应性大，分布甚广，在中国东北、华北、西北、西南及在俄罗斯远东地区、蒙古、朝鲜、日本均有分布，花期为5-6月。根据空气花粉浓度监测数据显示，桦树花粉约占春季气传花粉构成的7％左右。白桦花粉症在中国北方地区非常常见。邹红云的《血清特异性IgE检测在变应性鼻炎病因诊断中的应用》指出261例AR患者中白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白桦花粉变应原浸提物，其特征在于，其含有白桦花粉变9应6原蛋白Bet P 1.0106、Bet P 1.0201、Bet P 1.0301、Bet P 2、Bet P 3、Bet P 4、Bet P 6和Bet P 7；其中，所述Bet P 1.0106含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，所述Bet P 1.0201含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，所述Bet P 1.0301含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，所述Bet P 2含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，所述Bet P 3含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，所述Bet P 4含如SE...

【技术特征摘要】
2018.03.23 CN 20181024367801.一种白桦花粉变应原浸提物，其特征在于，其含有白桦花粉变9应6原蛋白BetP1.0106、BetP1.0201、BetP1.0301、BetP2、BetP3、BetP4、BetP6和BetP7；其中，所述BetP1.0106含如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列，所述BetP1.0201含如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列，所述BetP1.0301含如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列，所述BetP2含如SEQIDNO.7所示的氨基酸序列，所述BetP3含如SEQIDNO.8所示的氨基酸序列，所述BetP4含如SEQIDNO.9所示的氨基酸序列，所述BetP6含如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列，所述BetP7含如SEQIDNO.11所示的氨基酸序列。2.一种白桦花粉变应原浸液，其特征在于，所述变应原浸液中含如权利要求1所述的白桦花粉变应原浸提物、体积比为0.2～0.4％的苯酚、体积比为45～55％的甘油和4.5～5.5g/L的NaCl，其pH值为6.0～8.0的缓冲液。3.根据权利要求2所述的白桦花粉变应原浸液，其特征在于，所述白桦花粉变应原的活性浓度为5000～20000BAU/ml。4.根据权利要求2所述的白桦花粉变应原浸液，其特征在于，所述白桦花粉变应原浸液的总蛋白浓度为0.27mg/ml～1.08mg/ml，其中主要致敏蛋白含量0.10mg/ml～0.60mg/ml。5.根据权利要求2所述的白桦花粉变应原浸液，其特征在于，通过SDS-PAGE和WesternBlotting检测，所述白桦花粉变应原的蛋白分布主要在7-8kDa、15kDa、17-18kDa、24kDa、27kDa、35kDa和92kDa的条带，所述桦花粉变应原的蛋白的等电点分布在3.5～7之间。6.根据权利要求2所述的白桦花粉变应原浸液，其特征在于，通过全蛋白质谱或经SDS-PAGE分离后将对应分子量胶条分别取样进行质谱检测，所述白桦花粉变应原浸提物主要包含且不限于如SEQIDNO.20-SEQIDNO.97所示的特征性肽段。7.一种根据权利要求2-6中任一项所述白桦花粉变应原浸液的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：S1、采集白桦花粉，常温干燥或真空干燥或流化床干燥；S2、对干燥后的花粉脱脂、干燥；S3、将脱脂干燥后的白桦花粉按重量g体积ml比1:50～1:10加入pH为7.9～8.2磷酸盐—盐水缓冲液，2～8℃搅拌22～26h进行浸提；S4、取步骤S3后的浸提液，离心取上清液；将上清液过滤及除菌过滤；S5、将过滤后的上清液进行超滤浓缩，获得超滤浓缩液；S6、将所述超滤浓缩液经过二次过滤和除菌过滤后，真空冻干获得白桦花粉变应原冻干品；S7、将所述白桦花粉变应原冻干品用pH6.5～7.5磷酸盐—盐水缓冲液复溶配置为白桦花粉变应原原液，2～8℃放置，与等体积灭菌的甘油混匀，调节溶液pH值至6.0～8.0。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述花粉脱脂采用花粉与丙酮以1：5～1:1的重量g体积ml比进行脱脂处理，重复脱脂至上层液...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹佳，周俊雄，顾建青，高冬傲，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11