【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针及其制备和检测方法本专利技术涉及一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针及其制备和检测方法，属于分析检测
技术介绍
铜离子是维持生物体正常活动必不可少的微量元素之一，在人体内的过渡金属的含量中居于第三位，在各种生理过程中扮演着重要角色。当机体内的铜离子浓度超出或者低于细胞所需的浓度范围时，就会导致正常的生命活动受到影响。铜离子浓度的异常会导致神经退行性疾病(如老年痴呆症和威尔逊疾病)、以及肝豆状核变性疾病等疾病。因此开发新的具有高选择性、高灵敏度、水溶性好的识别Cu2+的荧光探针，对解析这些重要疾病的机理机制具有重要意义。目前，已研发出几种荧光多肽探针用于Cu2+的检测。例如，一种结合Cu2+促使荧光淬灭的传感器NBD-SSH，可用于在纯水中检测Cu2+，但其会受到Hg2+以及Ni2+的干扰，并且检测限较高，最低检测限为724nM，并且没有将其应用于生物成像中。一种检测Cu2+的多肽探针WGGH,其用于检测Cu2+的最适pH为10.0，这不适用于在生物体内成像，并且该探针易受同主族离子的干扰。本专利技术开发的一种特异性识别铜离子的多...
【技术保护点】
1.一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针,其特征在于，包含多肽序列可以靶向结合Cu
【技术特征摘要】
1.一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针,其特征在于，包含多肽序列可以靶向结合Cu2+和多肽序列的N端修饰发光物质。2.一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针的制备方法，其特征在于，固相合成特定序列的多肽，再将发光物质修饰到该多肽。3.一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针的检测方法，其特征在于，包括体外检测和细胞成像，体外检测包括:①、多肽探针的离子选择性；②、多肽探针的铜离子结合比；③、多肽探针的pH响应性；④多肽探针的检测限；细胞成像包括:①、将该多肽探针用于HeLa细胞中，显微镜观察其成像；②、随后加入Cu2+显微镜下观察其成像。4.根据权利要求1所述的一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针，其特征在于：多肽探针的序列为X-DDGGEE，其中X为发光物质，D为天冬氨酸，G为甘氨酸，E为谷氨酸；发光物质为荧光素类、罗丹明类、香豆素类、喹啉类、萘酰亚胺、多芳基乙烯类中的一种或几种；所述发光物质连接在探针多肽的N端。5.根据权利要求2所述的一种特异性识别铜离子的多肽荧光探针的制备方法，其特征在于，为以下步骤：a)将80-100mg的树脂加入具有筛板的反应器中，使用2-8mL二氯甲烷溶胀树脂；b)由15-25％哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱除N端Fmoc保护基，通过显色反应来检测保护基的脱除程度；c)将N端由Fmoc保护的氨基酸4eq与HOBt4eq和HBTU4eq由DMF溶解，活化10-30min后，向溶液中滴加DIEA6eq，溶液混合均匀后加入到反应器中，反应1-6hrs；d)反应结束后，反应液由反应器中抽出，树脂分别由2-8mLDMF和DCM洗2-4次，显色反应检测氨基酸缩合完全，树脂由15-25％哌啶/DMF溶液处理3次，分别为5min、5min和15min，树脂分别由5mLDMF和DCM洗3次，显色反应检测保护基脱除完全；e)之后重复步骤c)和d)，直到合成目标序列的多肽后，向反应器中加入发光物质4eq，显色反应检测反应完全后，树脂分别由3-8mLDMF和DCM洗2-4次；f)树脂分别用DCM和甲醇轮流洗涤2-4次，然后将树脂抽干，加入切割液，切割液的组分为TFA:TIS:水的质量比为95:2.5:2.5，反应1-6hrs；g)向反应液加入冰乙醚中，将多肽沉淀，然后通过离心收集沉淀，用TFA溶解沉淀，加入过量冰乙醚再次沉淀并离心收集沉...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。