用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体技术

使用(i)抗‑CD3抗体、(ii)抗‑CD56抗体、(iii)抗‑CD14抗体、(iv)抗‑CD38抗体、(v)抗‑CD45抗体、(vi)抗‑CD90抗体、(vii)抗‑CD135抗体、(viii)抗‑CD10抗体、(ix)抗‑CD11c抗体、(x)抗‑CD19抗体、(xi)抗‑CD34抗体、(xii)抗‑CD45RA抗体、(xiii)抗‑CD7抗体、(xiv)抗‑CD71抗体、(xv)抗‑CD41/CD61复合抗体或抗‑CD41抗体和/或抗‑CD61抗体、(xvi)抗‑CD33抗体和/或抗‑CD66b抗体，用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型，确定分离样品中造血细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中造血细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗‑CD33抗体和抗‑CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗‑CD33抗体和抗‑CD66b抗体，和其中当(xv)是抗‑CD41抗体和抗‑CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗‑CD41抗体和抗‑CD61抗体。

Uses, methods, kits, compositions and antibodies for identification of hematopoietic cell subtypes

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体专利
本专利技术涉及使用荧光染料标记的抗体用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型、确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量的用途。
技术介绍
造血系统是血液中发现的不同成熟细胞谱系细胞的复杂层次结构，这些包括提供对病原体的防护的免疫系统的细胞，携带氧通过机体的细胞和参与创伤愈合的细胞。这些成熟细胞来自造血干细胞(HSC)池，其在称为造血作用的过程中能够自我更新并分化成任何造血细胞谱系。共有20多种不同类型的造血细胞——包括完全分化的成熟细胞类型、部分分化的祖细胞和未成熟细胞以及未分化的多能干细胞。人类造血作用是一个过程，通过该过程具有不同特性和特征的不同造血细胞的分层组织系统从主要存在于骨髓(BM)中的原始造血祖细胞连续产生。对这种复杂系统的精细调控能够维持其重要功能，如凝血、氧/代谢物的转运和病原体/病毒的清除。一些病理状况(如免疫缺陷和肿瘤)能够引起造血细胞分化途径的改变，导致未成熟对比成熟细胞类型的频率失衡或者导致异常的细胞表型(1–13)。例如，原发性免疫缺陷(PID)是影响先天性和适应性免疫系统不同成分(如中性粒细胞、巨噬细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.使用(i)抗‑CD3抗体、(ii)抗‑CD56抗体、(iii)抗‑CD14抗体、(iv)抗‑CD38抗体、(v)抗‑CD45抗体、(vi)抗‑CD90抗体、(vii)抗‑CD135抗体、(viii)抗‑CD10抗体、(ix)抗‑CD11c抗体、(x)抗‑CD19抗体、(xi)抗‑CD34抗体、(xii)抗‑CD45RA抗体、(xiii)抗‑CD7抗体、(xiv)抗‑CD71抗体、(xv)抗‑CD41/CD61复合抗体或抗‑CD41抗体和/或抗‑CD61抗体、(xvi)抗‑CD33抗体和/或抗‑CD66b抗体用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型，确定分离样品中造血细胞亚型的相对频率和/或对分离样...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.17 GB 1617572.11.使用(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗-CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体、(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型，确定分离样品中造血细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中造血细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体。2.使用(B-i)抗-CD3抗体、(B-ii)抗-CD56抗体、(B-iii)抗-CD45抗体、(B-iv)抗-CD19抗体、(B-v)抗-CD45RA抗体、(B-vi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体、(B-vii)抗-CD4抗体、(B-viii)抗-CD8抗体、(B-ix)抗-CD95抗体、(B-x)抗-TCRγδ抗体、(B-xi)抗-CD127抗体、(B-xii)抗-CD62L抗体、(B-xiii)抗-CD25抗体用于鉴定分离样品中的淋巴细胞亚型，确定分离样品中淋巴细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中淋巴细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(B-i)至(B-xiii)的每一个，其中当(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。3.根据权利要求1所述的用途，其中(xv)是抗-CD41/CD61复合抗体。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的用途，其中(xvi)或(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，用于鉴定选自下组的一种或多种造血细胞亚型，确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量：未成熟多形核白细胞(iPMN)、多形核白细胞(PMN)、单核细胞、树突状细胞(DC)/DC祖细胞、成髓细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT)、自然杀伤细胞(NK)、B-细胞、前-B细胞、原-B细胞、原淋巴细胞、原成红细胞、成红细胞、造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)、多能淋巴祖细胞(MLP)、早期T祖细胞(ETP)、前-B/自然杀伤细胞(PRE-B/NK)、共同骨髓祖细胞(CMP)、粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞/红细胞祖细胞(MEP)。6.一种用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型、确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量的方法，所述方法包括以下步骤：(a)将所述样品与(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗-CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体接触，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体；(b)检测荧光染料标记的造血细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤：(c)提供所述样品的另一部分，该部分未在步骤(a)和/或(b)中使用；(d)将步骤(c)的所述样品与(B-i)抗-CD3抗体、(B-ii)抗-CD56抗体、(B-iii)抗-CD45抗体、(B-iv)抗-CD19抗体、(B-v)抗-CD45RA抗体、(B-vi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体、(B-vii)抗-CD4抗体、(B-viii)抗-CD8抗体、(B-ix)抗-CD95抗体、(B-x)抗-TCRγδ抗体、(B-xi)抗-CD127抗体、(B-xii)抗-CD62L抗体、(B-xiii)抗-CD25抗体接触，其中使用不同荧光染料标记(B-i)至(B-xiii)的每一个，其中当(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体；(e)检测荧光染料标记的淋巴细胞。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中(xv)是抗-CD41/CD61复合抗体。9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其中(xvi)和/或(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。10.根据权利要求6-9中任意一项所述的方法，其中检测荧光染料标记的造血和/或淋巴细胞的步骤通过流式细胞术进行。11.根据权利要求6-10中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括将所述样品与荧光细胞活力标记物接触的步骤；优选地其中所述荧光细胞活力标记物选自碘化丙啶(PI)、叠氮溴化丙啶、叠氮溴化乙锭、钙黄绿素AM、7-氨基放线菌素(7-AAD)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及其衍生物；更优选地其中所述荧光细胞活力标记物是PI。12.根据权利要求6-11中任意一项所述的方法，其中在步骤(a)和/或步骤(c)的接触之前，将所述样品与已知数量的微球接触。13.根据权利要求6-12中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括使用门控策略，所述门控策略包括以下步骤：(a)排除细胞聚集体和死细胞；(b)鉴定CD45+细胞(白细胞)；(c)区分骨髓细胞群和淋巴细胞群；(d)鉴定所述骨髓细胞和淋巴细胞的主要亚群；(e)鉴定造血干细胞和祖细胞(HSPC)子集。14.根据权利要求6-12中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括使用门控策略，所述门控策略包括以下步骤：(a)排除细胞聚集体和死细胞；(b)鉴定CD34+细胞(祖细胞)；(c)鉴定CD45+细胞(白细胞)；(d)从CD34+CD45+细胞群鉴定HSPC子集和LIN+CD34+子集。15.根据权利要求6-14中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤：(a)裂解所述样品中的红细胞；和(b)从所述裂解的红细胞中分离所述样品中的未裂解细胞。16.根据权利要求6-15中任意一项所述的方法，其中所述方法用于鉴定选自下组的一种或多种造血细胞亚型，确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量：未成熟多形核白细胞(iPMN)、多形核白细胞(PMN)、单核细胞、树突状细胞(DC)/DC祖细胞、成髓细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT)、自然杀伤细胞(NK)、B-细胞、前-B细胞、原-B细胞、原淋巴细胞、原成红细胞、成红细胞、造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)、多能淋巴祖细胞(MLP)、早期T祖细胞(ETP)、前-B/自然杀伤细胞(PRE-B/NK)、共同骨髓祖细胞(CMP)、粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞/红细胞祖细胞(MEP)。17.根据权利要求6-16中任意一项所述的方法，其中所述样品是全血样品，和/或其中所述样品获自外周血、骨髓、脐带血(CB)、动员的PB(mPB)、人向小鼠(human-in-mouse)的异种移植或体外人细胞悬液。18.根据权利要求6-17中任意一项所述的方法，其中所述样品是50-1000μl，优选地其中所述样品是100-500μl。19.根据权利要求6-18中任意一项所述的方法，其中鉴定了所述样品中大于95...

【专利技术属性】
技术研发人员：L巴索里奇，L比亚斯科，A艾乌蒂，
申请(专利权)人：圣拉斐尔医院有限责任公司，特莱索恩基金会，
类型：发明
国别省市：意大利,IT