全面筛检转基因成分的标志物组、组合物及应用制造技术

本申请公开了一种全面筛检转基因成分的标志物组、组合物及应用。所述标志物组包括：7种筛选元件：PCAMV35S、TCAMV35S、TNOS、PRbcS4、TPINII、TE9、PAT，还包括玉米DAS40278、大豆DP305423和大豆CV127的品系特异性序列。所述组合物为检测所述标志物组的试剂，优选为SEQ ID No.1—33所示引物和探针。本发明专利技术可覆盖市面上66种商业化的转基因品系，具有重复性好、高通量、灵敏、准确和快速的优点，在转基因成分检测方面具有很好的应用前景。

Comprehensive Screening of Markers, Compositions and Applications of Transgenic Components

【技术实现步骤摘要】
全面筛检转基因成分的标志物组、组合物及应用
本专利技术涉及生物
，具体说是一种全面筛检转基因成分的标志物组、组合物及应用。
技术介绍
转基因作物已经商业化二十余年，2016年时种植面积已达到了1.851亿公顷，超过26个国家种植了转基因作物。随着转基因作物在全球范围内的大规模种植和消费，越来越多的国家和地区开始实施转基因产品标识管理制度。鉴于转基因作物在种植收割、生产加工和运输消费等过程中会出现不可避免的混杂，目前有60多个国家和地区对转基因产品标识设置了阈值。我国相关部门也正在研究将其引入转基因安全管理体系当中。标识阈值的采用，为转基因安全管理带来更加科学合理的技术措施，同时也对转基因成分的精准定量提出了迫切而具体的需求。目前，转基因成分定量检测一般采用实时荧光PCR技术，是通过绘制标准物质浓度曲线，通过检测阈值来计算转基因成分含量的，但是在实际应用中局限性很大，最主要的是标准曲线的制备，首先很难做到精准的标准浓度梯度，其次在操作步骤及绘制曲线过程中会不可避免地产生误差，数字PCR就能很好地避免这一点并可以不受扩增效率的影响，实现精准的定量。数字PCR(以下简称dPCR)是一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一标志物组，其特征在于，所述标志物组包括如下7种筛选元件：豌豆核酮糖‑1,5‑二磷酸羧化酶小亚基E9基因终止子(TE9)、胭脂碱合成酶基因终止子(TNOS)、花椰菜花叶病毒启动子(PCAMV35S)、绿产色链霉菌编码膦丝菌素乙酰转移酶基因(PAT)、马铃薯蛋白酶抑制剂II终止子(TPINII)、拟南芥RbcS4基因启动子(PRbcS4)、和花椰菜花叶病毒终止子(TCAMV35S)；任选的，所述标志物组还包括玉米DAS40278的品系特异性序列、和/或大豆DP305423的品系特异性序列、和/或大豆CV127的品系特异性序列。

【技术特征摘要】
1.一标志物组，其特征在于，所述标志物组包括如下7种筛选元件：豌豆核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶小亚基E9基因终止子(TE9)、胭脂碱合成酶基因终止子(TNOS)、花椰菜花叶病毒启动子(PCAMV35S)、绿产色链霉菌编码膦丝菌素乙酰转移酶基因(PAT)、马铃薯蛋白酶抑制剂II终止子(TPINII)、拟南芥RbcS4基因启动子(PRbcS4)、和花椰菜花叶病毒终止子(TCAMV35S)；任选的，所述标志物组还包括玉米DAS40278的品系特异性序列、和/或大豆DP305423的品系特异性序列、和/或大豆CV127的品系特异性序列。2.权利要求1所述的标志物组在检测转基因成分中的应用；优选的，所述转基因成分来源于转基因植物和/或其加工品；所述转基因植物包括但不限于如下植物：玉米、大豆、油菜、马铃薯、甜菜、苜蓿、和/或水稻；更优选的，所述转基因植物包括但不限于如下任意一种或几种转基因品系及其衍生品种：玉米MON810，玉米NK603，玉米MON89034，玉米MON88017，玉米MON87460，玉米MON87427，玉米MON863，玉米Bt11，玉米3272，玉米5307，玉米MIR604，玉米GA21，玉米MIR162，玉米Bt176，玉米TC1507，玉米59122，玉米4114，玉米T25，玉米98140，玉米VCO-01981-5，大豆GTS40-3-2，大豆MON89788，大豆MON87701，大豆MON87705，大豆MON87708，大豆MON87769，大豆MON87751，大豆DP356043，大豆A5547-127，大豆A2704-12，大豆SYHT0H2，大豆FG72，大豆DAS44406-6，大豆DAS68416-4，大豆DAS81419，油菜GT73，油菜MON88302，油菜73496，油菜RF3，油菜MS8，油菜Topas19/2，油菜OXY-235，油菜T45，油菜MS1，油菜RF1，油菜RF2，甜菜H7-1，苜蓿J101，苜蓿J163，苜蓿KK179，水稻LLRICE62，水稻114-7-2，水稻BT63，水稻HuahuiNo.1，水稻KMD，水稻KF6，水稻KF8，水稻T2A-1，水稻T1c-19，马铃薯AM04-1020，马铃薯EH92-527-1，马铃薯PH05-026-0048，马铃薯AV-43-6-G7；任选的，所述转基因植物还选自以下任意一种或几种转基因品系及其衍生品种：玉米DAS40278，大豆DP305423，大豆CV127。3.一种用于检测转基因成分的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测权利要求1或2所述标志物组的PCR引物组合。4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述PCR引物组合包括如下引物对：用于特异检测筛选元件TE9的引物对1，所述引物对1的上游引物如SEQIDNo.1所示，下游引物如SEQIDNo.2所示；用于特异检测筛选元件TNOS的引物对2，所述引物对2的上游引物如SEQIDNo.4所示，下游引物如SEQIDNo.5所示；用于特异检测筛选元件PCAMV35S的引物对3，所述引物对3的上游引物如SEQIDNo.7所示，下游引物如SEQIDNo.8所示；用于特异检测筛选元件PAT的引物对4，所述引物对4的上游引物如SEQIDNo.10所示，下游引物如SEQIDNo.11所示；用于特异检测筛选元件TPINII的引物对5，所述引物对5的上游引物如SEQIDNo.13所示，下游引物如SEQIDNo.14所示；用于特异检测筛选元件PRbcS4的引物对6，所述引物对6的上游引物如SEQIDNo.16所示，下游引物如SEQIDNo.17所示；或所述引物对6的上游引物如SEQIDNo.31所示，下游引物如SEQIDNo.32所示；用于特异检测筛选元件TCAMV35S的引物对7，所述引物对7的上游引物如SEQIDNo.19所示，下游引物如SEQIDNo.20所示；用于特异检测玉米DAS40278的品系特异性序列的引物对8，所述引物对8的上游引物如SEQIDNo.22所示，下游引物如SEQIDNo.23所示；用于特异检测大豆CV127的品系特异性序列的引物对9，所述引物对9的上游引物如SEQIDNo.25所示，下游引物如SEQIDNo.26所示；用于特异检测大豆DP305423的品系特异性序列的引物对10，所述引物对10的上游引物如SEQIDNo.28所示，下游引物如SEQIDNo.29所示；优选的，所述PCR引物组合还包括检测所述引物对的扩增产物的探针组；更优选的，所述探针组包括：用于检测引物对1扩增产物的探针1，所述探针1的序列为SEQIDNo.3或其互补序列；用于检测引物对2扩增产物的探针2，所述探针2的序列为SEQIDNo.6或其互补序列；用于检测引物对3扩增产...

【专利技术属性】
技术研发人员：付伟，王晨光，朱鹏宇，朱水芳，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11