一种用于检测冬生疫霉的引物及探针组合物及其试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测冬生疫霉的引物及探针组合物及其试剂盒和检测方法，该引物和探针序列为：RPA‑PSYPT‑F：5'‑TTCCACCCTTCCACCAGACTGCTGAGGAGG‑3'，RPA‑PSYPT‑R：5’‑[Biotin]TGTTAGCTGCGTGTTCGTTGGTCACCCCAGA‑3’，SYPT‑P：5’‑[FAM]CTTCTGTGATTTATCCAGAAAATCCGTACGAT‑THE‑GAGCTGGACGGCAAGA[C3‑spacer]‑3’。本发明专利技术所使用的引物探针组RPA扩增效果好，条带特异性强，与其他病菌无交叉反应，在检测区的有阳性反应，增加了检测的灵敏性。

A combination of primers and probes for the detection of Phytophthora infestans and its kit and detection method

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测冬生疫霉的引物及探针组合物及其试剂盒和检测方法
本专利技术属于生物
，基于RPA-侧流层析技术检测冬生疫霉，专用于海关进出境水果所带冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)的高灵敏度快速检测，同时可用于林间冬生疫病的早期诊断和病菌的监测。具体涉及一种用于检测冬生疫霉的引物及探针组合物及其试剂盒和检测方法。
技术介绍
冬生疫霉(Phytophthorahibernalis)是我国重要的植物检疫性病原菌，最早在澳大利亚西部的柑橘果实上发现，目前主要分布在以色列、土耳其、南非、法国、英国、西班牙、希腊、意大利、葡萄牙、美国、阿根廷、委内瑞拉、特立尼达和多巴哥、澳大利亚、新西兰、斐济等国家。其近似种丁香疫霉曾在2011年和2012年2次被我国天津口岸截获，同时各口岸也加大了对冬生疫霉的检查力度。传统的检测冬生疫霉的方法费时费力而且要求操作者具备专业的疫霉分离、形态学鉴定知识和丰富的经验。随着核酸相关的鉴定方法的发展，基于PCR的方法已经成功用于检测冬生疫霉，虽然PCR法在特异性和敏感性上有较大的提高，但是检测时间仍然比较长，大概4～5h,同时PCR方法依赖精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于冬生疫霉的RPA‑侧流层析检测的引物和探针组合，其特征在于，具体如下：正向引物为RPA‑PSYPT‑F：5'‑TTCCACCCTTCCACCAGACTGCTGAGGAGG‑3'；反向引物为RPA‑PSYPT‑R：5’‑[Biotin]TGTTAGCTGCGTGTTCGTTGGTCACCCCAGA‑3’；探针为PSYPT‑P：5’‑[FAM]CTTCTGTGATTTATCCAGAAAATCCGTACGAT‑THE‑GAGCTGGACGGCAAGA[C3‑spacer]‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种用于冬生疫霉的RPA-侧流层析检测的引物和探针组合，其特征在于，具体如下：正向引物为RPA-PSYPT-F：5'-TTCCACCCTTCCACCAGACTGCTGAGGAGG-3'；反向引物为RPA-PSYPT-R：5’-[Biotin]TGTTAGCTGCGTGTTCGTTGGTCACCCCAGA-3’；探针为PSYPT-P：5’-[FAM]CTTCTGTGATTTATCCAGAAAATCCGTACGAT-THE-GAGCTGGACGGCAAGA[C3-spacer]-3’。2.权利要求1所述的引物和探针组合在检测冬生疫霉中的应用。3.一种检测冬生疫霉的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含由权利要求1所述的引物和探针组成的引物探针混合液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针液的组成为：正向引物和反向引物终浓度均为0.42μmol/L，探针的终浓度为0.06μmol/L。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括：标准阳性DNA、缓冲液、酶扩增八联管、无菌双蒸水、反应驱动液、产物稀释液和侧流层析试纸条。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，每50μL扩增体系中含有缓冲液29.5μL、冬生疫霉RPA相应的引物探针液4.8μL、无菌双蒸水11.2μL、待测样本DNA为阳性对照分别为2μL或以无菌双蒸水为空白对照2μL、反应驱动液2.5μL。7.一种基于RPA-侧流层析技术检测冬生疫霉的方法，其特征在于，步骤如下：1)提取待测样本DNA；2)以DNA为模板，进行RPA扩增，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴婷婷，焦彬彬，胡涛，徐月，廖婷婷，田雯，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32