一种细胞表面预处理及细胞定向解冻的方法技术

本发明专利技术属于定向凝固及生物组织低温保存技术领域，具体涉及一种细胞表面预处理及细胞定向解冻的方法，包括以下步骤：S1，制备含有活细胞的PBS悬浮液；S2，依次向含有活细胞的PBS悬浮液中加入单宁酸水溶液、六水氯化铁水溶液，摇匀；加入MOPS水溶液，放置10‑20分钟，得到表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S3，用PBS溶液离心清洗S2得到的表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S4，将S2‑S3重复3‑4次，最后一次离心收集的沉淀与PBS溶液混匀后‑30℃至‑20℃冻存，得到经细胞表面预处理的冻存细胞；细胞表面预处理的冻存细胞经水平定向解冻装置进行解冻。本发明专利技术通过细胞表面的处理和在解冻过程中温度场的定向改变，避免了解冻过程中冰晶动态再结晶晶界迁移对细胞的剪切应力伤害。

A method of cell surface pretreatment and directional thawing

【技术实现步骤摘要】
一种细胞表面预处理及细胞定向解冻的方法
本专利技术属于定向凝固及生物组织低温保存
，具体涉及一种细胞表面预处理及细胞定向解冻的方法。
技术介绍
近年来，由于器官移植、活体细胞培养等领域的需要，生物组织冷冻保存为人们提供了大量可靠的生物组织来源，生物材料的冷冻保存通常是在生物组织培养液中加入大量的DMSO、抗冻蛋白等添加剂来进行冷冻，企图改变冰晶的生长形态，减小冷冻及解冻过程中冰晶对生物组织的伤害。其基本原理是改变外界冰晶生长的形态，使其与细胞接触时更加温和。然而，冷冻保存的现有技术存在若干问题和技术限制，首先，现存技术中向培养液中加入大量的添加剂可能会破坏生物组织与周围环境的渗透压平衡，导致细胞凋亡或细胞破裂；其次，解冻期间冰晶在动态再结晶时对生物组织的剪切应力尤其可能使细胞损坏。
技术实现思路
针对上述
技术介绍
中的不足，本专利技术是在细胞表面生成可降解的纳米薄膜，减小冷冻过程中冰晶对细胞的压应力，同时维持细胞周围的渗透压平衡；并在解冻过程中通过施加定向的温度场，使细胞主动迁移出冰晶，减小冰晶在动态再结晶时对细胞的剪切应力。本专利技术的第一个目的是提供一种细胞表面预处理的方法，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞表面预处理的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，制备含有活细胞的PBS悬浮液；S2，依次向含有活细胞的PBS悬浮液中加入单宁酸水溶液、六水氯化铁水溶液，摇匀；加入pH为7.0‑7.5的MOPS水溶液，放置10‑20分钟，得到表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S3，用PBS溶液离心清洗S2得到的表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S4，将S2‑S3重复3‑4次，最后一次离心收集的沉淀与PBS溶液混匀后‑30℃至‑20℃冻存，得到经细胞表面预处理的冻存细胞。

【技术特征摘要】
1.一种细胞表面预处理的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，制备含有活细胞的PBS悬浮液；S2，依次向含有活细胞的PBS悬浮液中加入单宁酸水溶液、六水氯化铁水溶液，摇匀；加入pH为7.0-7.5的MOPS水溶液，放置10-20分钟，得到表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S3，用PBS溶液离心清洗S2得到的表面形成纳米膜的细胞悬浮液；S4，将S2-S3重复3-4次，最后一次离心收集的沉淀与PBS溶液混匀后-30℃至-20℃冻存，得到经细胞表面预处理的冻存细胞。2.根据权利要求1所述的一种细胞表面预处理的方法，其特征在于，所述单宁酸水溶液的浓度为40mg/ml，六水氯化铁水溶液浓度为10mg/ml，MOPS水溶液的终浓度为20mM。3.根据权利要求2所述的一种细胞表面预处理的方法，其特征在于，所述含有活细胞的PBS悬浮液、单宁酸水溶、六水氯化铁水溶液和MOPS水溶液的体积比为：98：1：1：1。4.一种利用权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：游家学，尚利，陈乔，张运涵，谢一帆，袁瑞，李建卫，陈庆玺，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61