调控水稻矮化的B型响应调节基因ORR2及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种水稻B型反应调控因子基因ORR2及其应用，ORR2基因cDNA阅读框为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或为完全与SEQ ID NO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2的核苷酸序列。构建ORR2基因过表达载体，构建的ORR2基因水稻过表达植株株高显著降低。所述水稻B型反应调控因子基因ORR2可应用于调控水稻株型矮化中和矮化育种中。

Type B Response Regulator Gene ORR2 Regulating Rice Dwarfing and Its Application

【技术实现步骤摘要】
调控水稻矮化的B型响应调节基因ORR2及其应用
本专利技术属于农业生物
，具体涉及一种水稻B型响应调节基因ORR2及其应用。
技术介绍
水稻是世界上重要的农作物之一，全世界50％以上的人口以水稻为食，水稻的重要性不言而喻。随着耕地的减少和人口的增加，对水稻的产量和品质也呈现上升趋势，以矮化育种为标志的水稻绿色革命为世界粮食产量的增加做出巨大的贡献。株高作为重要的农艺性状直接影响水稻的株型和产量，水稻株型改良对提高单产具有重要的作用，水稻株型形性状都是由非常复杂的调控机制所调控，因此明确作物株型发育调控机制，挖掘和利用新的调控矮化基因是水稻研究的重要内容。水稻的抗倒伏能力也是育种科学家格外关注的，虽然其不能直接提高水稻的产量，但是在稳定水稻产量上具有重要的作用，同时也是限制水稻产量进一步提高的因素。与水稻高杆品种相比，矮杆品种通过降低株高，提高抗倒伏能力，水稻矮化品种的选育一直是育种家追求的目标。B型反应调节因子是细胞分裂素信号途径中一类重要的转录调控因子，B型反应调节基因在C段较长，含有一个DNA结合区域和一个转录激活区，并具有GARP区，具有识别和结合特异DNA序列的潜在核定位作用，在细胞分裂素的信号转导过程中主要在下游的转录级联反应中起作用。目前，细胞分裂素信号转导领域研究缓慢，尤其在水稻株型研究上鲜有报道。开展B型反应调节基因ORR2在水稻株型调控的研究，不仅可以在遗传方面揭示反应调节基因调控水稻矮化作用，并为水稻理想株型育种提供理论支撑，具有重要的研究价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种水稻B型反应调控因子基因ORR2及其编码蛋白。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种水稻B型反应调控因子基因ORR2，其cDNA阅读框为SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或为完全与SEQIDNO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQIDNO.2的核苷酸序列。一种水稻B型反应调控因子ORR2，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术的另一目的在于提供水稻B型反应调控因子基因ORR2的制备方法。水稻B型反应调控因子基因ORR2的制备方法，包括以下步骤：C)将水稻幼苗真叶的总RNA反转录成cDNA；D)以上述cDNA为模板，用如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示的引物对进行PCR扩增获得。本专利技术的另一目的还在于提供上述水稻B型反应调控因子基因ORR2在调控水稻株型矮化中的应用。本专利技术的另一目的上述水稻B型反应调控因子基因ORR2在矮化育种中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种过表达载体及其制备方法。实现该目的的技术方案是：一种过表达载体，其转入有上述水稻B型反应调控因子基因ORR2。本专利技术的另一目的是提供一种制备水稻转基因植株的方法。实现该目的的技术方案是：一种制备水稻转基因植株的方法，包括以下步骤：4)得到转入有上述水稻B型反应调控因子基因ORR2的过表达载体；5)将上述过表达载体转化到农杆菌；6)将转化后的农杆菌转化水稻愈伤组织，获得水稻转基因植株。本专利技术具有如下优点：本专利技术通过分离得到克隆水稻B型反应调控因子基因ORR2的编码序列信息；利用特异性引物研究水稻B型反应调控因子基因ORR2在水稻各组织器官中的表达，发现其在水稻叶片中表达最高；构建ORR2基因过表达载体，以及构建的ORR2基因水稻过表达植株株高显著降低，说明该基因具有调控株高性状的功能，在水稻的遗传改良中具有潜在的应用价值。附图说明图1：水稻ORR2基因表达模式；附图中选取水稻根、茎、叶片、叶鞘和花进行ORR2表达量分析的结果；图2：水稻ORR2过表达阳性植物的检测；图3：ORR2过表达水稻与野生型相比，株高明显矮化。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术公开内容的理解更加透彻全面。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。本专利技术所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术的一实施例，提供了一种水稻B型反应调控因子ORR2，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。还提供了该水稻B型反应调控因子基因ORR2，其cDNA阅读框为SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或为完全与SEQIDNO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQIDNO.2的核苷酸序列。应当理解，考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对上述编码基因的核苷酸序列进行修改，也属于本专利技术的保护范围内。本专利技术的另一实施例中还提供水稻B型反应调控因子基因ORR2的制备方法其，包括以下步骤：A)将水稻幼苗真叶的总RNA反转录成cDNA；B)以上述cDNA为模板，用如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示的引物对进行PCR扩增获得。本专利技术的一实例中还涉及上述水稻B型反应调控因子基因ORR2的应用，其中之一的是在调控水稻株型矮化中的应用。本专利技术的一实例中还涉及一种过表达载体。一种过表达载体，其转入有上述水稻B型反应调控因子基因ORR2；其可以通过In-fusion技术将ORR2基因连接到载体pCAMBIA1390质粒而实现。本专利技术的一实例还涉及一种制备水稻转基因植株的方法，该方法包括以下步骤：(这方法是很常用普遍的，不能算成是我申请里的吧，)1)得到转入有上述水稻B型反应调控因子基因ORR2的过表达载体；2)将上述过表达载体转化到农杆菌；该农杆菌优选为农杆菌GV3101。3)将转化后的农杆菌转化水稻愈伤组织，获得水稻转基因植株。本专利技术将ORR2基因克隆到pCAMBIA1390载体上，获pCAMBIA1390-ORR2植物过表达载体，经过农杆菌转化水稻愈伤组织，获得水稻转基因植株，结果发现，水稻体内过表达ORR2基因发现：所述转基因水稻与野生型水稻相比，株高显著降低。本专利技术所述水稻ORR2基因的核苷酸序列具体如下：SEQIDNO.1ATGCTTCTGGGTGCTTTGAGGATGGAGGAGAGGAAGGGATTGATGGGGAGGGAGAGGGATCAATTCCCCGTCGGCATGCGGGTCCTCGCCGTCGACGATGACCCGGTGTGCCTCAAGGTTCTTGAGACCCTCCTCCGGCGCTGCCAATACCATGTAACATCAACCAACCAGGCTATTACTGCGTTGAAGCTGCTCAGGGAGAACAGGGACATGTTTGATCTTGTCATCAGTGATGTCCACATGCCCGACATGGACGGATTTAAGCTCCTTGAGCTTGTGGGGCTTGAAATGGATCTCCCAGTCATCATGTTATCAGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水稻B型反应调控因子基因ORR2，其cDNA阅读框为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或为完全与SEQ ID NO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种水稻B型反应调控因子基因ORR2，其cDNA阅读框为SEQIDNO：1所示的核苷酸序列，或为完全与SEQIDNO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQIDNO.2的核苷酸序列。2.一种水稻B型反应调控因子ORR2，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。3.一种水稻B型反应调控因子基因ORR2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)将水稻幼苗真叶的总RNA反转录成cDNA；B)以上述cDNA为模板，用如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示的引物对进行PCR扩增获得。4.权利要求1所述水稻B型反应调控因子基因ORR2在调控水稻株型矮化中的应用。5.权利要求1所述水稻B型反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：史发超，安玉兴，孙东磊，卢颖林，龚恒亮，陈立君，付建涛，赵欢欢，戴思行，
申请(专利权)人：广东省生物工程研究所广州甘蔗糖业研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44