固氮的甲基杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种固氮的甲基杆菌菌株及其应用。所述甲基杆菌的保藏编号为GDMCC No:61052。本发明专利技术的甲基杆菌可以生物固氮，在农业生产中具有广泛的开发利用价值。

【技术实现步骤摘要】
固氮的甲基杆菌菌株及其应用
本专利技术涉及微生物学领域，特别是涉及一种固氮的甲基杆菌菌株及其应用。
技术介绍
植物在生长过程中与各种微生物之间发生着相互作用，主要包括植物根际微生物、叶际微生物以及植物内生菌。这些微生物可以通过固氮、解磷、分泌生长素、增加植物抗性等直接或间接的方式促进植物生长。在农业生产中，通过外源接种这类有益微生物不仅可以促进植物生长，增加作物产量，同时，其对环境友好性和作用效果的可持续性，在对生态环境越来越重视的当代农业中备受推崇。甲基杆菌属(Methylobacterium)是一类兼性需氧型细菌，能够利用包括甲醇、甲胺等一碳类化合物作为碳源。甲基杆菌属细菌菌体因能够合成类胡萝卜素而呈粉红色，因此又将这一类细菌称为粉红色兼性甲基营养菌(pink-pigmentedfacultativemethylotrophics，PPFM)。Methylobacterium广泛存在于土壤、空气、水域等环境，以及植物的叶际和根际中，具有能够产生植物激素、拮抗植物病原微生物、缓解非生物逆境等功能，在农业生产中具有较大的开发利用价值。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的是提供一种新的甲基杆菌YT2019B002，其可有效固氮。具体技术方案如下：一种甲基杆菌YT2019B002，所述甲基杆菌YT2019B002的保藏编号为GDMCCNo:61052。本专利技术的另一目的是提供一种上述的甲基杆菌YT2019B002在生物固氮中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种上述的甲基杆菌YT2019B002在提高土壤氮含量中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种上述的甲基杆菌YT2019B002在制备土壤调理剂中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种生物制剂，其活性成分包括上述的甲基杆菌YT2019B002。本专利技术的另一目的是提供一种上述的甲基杆菌YT2019B002的培养方法，包括以下步骤：将甲基杆菌YT2019B002接种于培养基中，于20～30℃条件下进行培养。进一步地，于22～28℃条件下进行培养；更进一步地，于24～26℃条件下进行培养。在其中一些实施例中，所述培养基为AMS培养基。本专利技术所述的甲基杆菌YT2019B002(Methylobacteriumsp.)已于2020年6月9日保藏于国家知识产权局指定的保藏单位广东省微生物菌种保藏中心(简称：GDMCC，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼)，保藏日期：2020年6月9日，保藏编号：GDMCCNo:61052。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次发现了一种属于甲基杆菌属的新微生物甲基杆菌YT2019B002，其可以进行生物固氮，在农业生产中具有广泛的开发利用价值。附图说明图1为菌株YT2019B002在培养基上的培养形状和革兰氏染色图(A：AMS培养基上培养形状；B：革兰氏染色)；图2为特异性引物(mxaF基因)PCR扩增结果凝胶电泳图，(M：DL2000Marker；1,2：YT2019B002菌株；3,4：阴性对照)；图3为基于16SrRNA序列采用邻接法(Neighbor-Joining，NJ)构建的系统发育树；菌株Escherichiacoli562(J01859)为外群，T：模式菌株；图4为菌株YT2019B002固氮能力平板测定(A：CK正常AMS培养基；B：不含NH4Cl的缺氮AMS培养基)。具体实施方式本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。本专利技术的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。在本专利技术中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细的说明。材料与方法：分离材料来源：分离材料果蔗苗(Saccharumofficinarum‘Badila’)采自于广东省广州市南沙区东涌镇，采集后冰盒低温保藏带回实验室，置于-20℃低温保藏，用于功能微生物分离。固体AMS培养基：根据Whittenburyetal.1970中甲基杆菌属细菌专性培养基ammoniummineralsalt(AMS)培养基，主要成分包括K2HPO40.7g，KH2PO40.54g，MgSO4·7H2O1.0g，CaCI2·2H2O0.2g，FeSO4·7H2O4mg，NH4Cl0.5g，ZnSO4·7H2O100.0mcg，MnCl2·4H2O30.0mcg，H3BO3300.0mcg，CoCl2·6H2O200.0mcg，CuCl2·2H2O10.0mcg，NiCl2·6H2O20.0mcg，Na2MoO4·2H2O60.0mcg，Agar15.0g，蒸馏水1L，pH值6.8，121℃灭菌30min备用，灭菌后带培养基冷却至50-55℃，每100mL培养基加入1mL过滤灭菌的甲醇，混匀后倒平板备用。分离方法：将甘蔗根际土通过梯度稀释法制备得到10-6-10-8g/mL的土壤悬液，将悬液均匀涂布于固体AMS培养基上，25℃恒温倒置培养，观察并分离纯化产生粉红色色素的菌株，命名为YT2019B002，将菌株接入营养肉汤液体培养基中，25℃160rpm摇培48h后，以1:1的体积比加入30％甘油水溶液(v/v)，于-80℃保存菌株，备用。菌株YT2019B002的鉴定：1.菌株YT2019B002的理化性质测定将菌株YT2019B002在大豆酪蛋白琼脂培养基TSA(OXOID)固体培养基上25℃划线培养5天后，挑取单菌落进行革兰氏染色，利用2Systems革兰氏阴性菌鉴定卡(GN卡)进行碳源利用、酶类活性和耐药性检测。2.菌株YT2019B002的分子生物学鉴定用热裂解法提取YT2019B002单菌落DNA，利用特异性引物mxaf1003(5-GCGGCACCAACTGGGGCTGGT-3′，SEQIDNO:2)和mxar1561(5-GGGCAGCATGAAGGGCTCCC-3′，SEQIDNO:3)进行mxaF基因扩增，确认菌株属的种类。同时，利用27F(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，SEQIDNO:4)和1492R(5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲基杆菌YT2019B002，其特征在于，所述甲基杆菌YT2019B002的保藏编号为GDMCC No:61052。/n

【技术特征摘要】
1.一种甲基杆菌YT2019B002，其特征在于，所述甲基杆菌YT2019B002的保藏编号为GDMCCNo:61052。


2.权利要求1所述甲基杆菌YT2019B002在生物固氮中的应用。


3.权利要求1所述甲基杆菌YT2019B002在提高土壤氮含量中的应用。


4.权利要求1所述甲基杆菌YT2019B002在制备土壤调理剂中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨婷，史发超，安玉兴，孙东磊，卢颖林，
申请(专利权)人：广东省生物工程研究所广州甘蔗糖业研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44