一种基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法技术

一种基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法，涉及干细胞再生医学与药物。所述基于Rbm24基因序列构建的表达载体包括其核苷酸序列如序列表所示的Rbm24基因、荧光报告基因以及抗生素筛选基因。所述干细胞为胚胎干细胞或诱导多能性干细胞。所述Rbm24基因转染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。所述Rbm24基因感染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。构建含有编码RNA结合蛋白Rbm24的基因序列的转染载体；将构建的转染载体转染到干细胞中；转染后，用骨骼肌定向分化诱导液进行诱导分化，直至获得成熟的骨骼肌细胞。

A Method of Obtaining Skeletal Muscle Cells Derived from Stem Cells Based on Rbm24 Gene

【技术实现步骤摘要】
一种基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法
本专利技术涉及干细胞再生医学与药物，尤其涉及一种基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法。
技术介绍
基于干细胞的再生医学为生命科学、医学与药物研发的发展开辟了一个崭新的、广阔的领域。研究者认为干细胞(再生医学)研究有潜力通过修复特定的组织或器官，改变人类对疾病的应对方法。干细胞再生医学在治疗骨骼肌病等目前尚无良好治疗方案的疾病方面具有广泛的应用前景。干细胞是原始未分化的细胞，具有分化为其他细胞类型的能力。根据来源不同，可将干细胞分为多能干细胞和来自成熟组织的干细胞。多能干细胞是指具有无限增殖、多分化潜能的一类干细胞，包括胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESC)和诱导型多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,iPSC)。ESC是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离出的多潜能细胞；iPSC是将4种转录因子Oct4，Sox2，c-myc和Klf4组合导入体细胞，将分化的体细胞重编程，转变为ESC样细胞。这些多能干细胞，在给予合适的信号或合适的培养环境下，可分化为具有不同形态和功能的成熟细胞。虽然研究证实干细胞可分化为骨骼肌样细胞[1]，但分化的骨骼肌样细胞的成活度和效率还有待提高[2]。因此促进干细胞分化成为有功能的成熟的骨骼肌细胞成为急需解决的问题。骨骼肌细胞的分化受很多因子的调控影响，其中成肌细胞调节因子MRFs家族(MyoD、Myf5、MRF4、Myogenin)，能与骨骼肌特异性基因启动子上的特定DNA序列结合，激活这些骨骼肌特异基因的表达，对骨骼肌的发育成熟起着至关重要的作用。其中，MyoD和Myf5在干细胞分化为成肌细胞过程中起着重要作用，而Myogenin在肌纤维的成熟及形态方面起重要作用[3、4]Rbm24是一种RNA结合蛋白，特异性的表达在心脏和骨骼肌中，有研究表明，Rbm24在斑马鱼，小鼠的早期胚胎发育中，参与骨骼肌的早期形成[5]。Yang等报道在Rbm24的敲除鼠中，小鼠体节发育缺陷，M-band消失[6]，表明Rbm24在骨骼肌发育中起重要调控作用。且在C2C12细胞中，Rbm24可调节Myogenin的转录和表达，对C2C12细胞来源的肌管形成中有着重要的作用[7]。我们实验发现，ESC来源的骨骼肌细胞中高表达Rbm24,并且Rbm24的过表达可以通过肌肉特异性的可变剪切，促进ESC向骨骼肌分化，这为重建和再生受损的骨骼肌，以及治疗肌萎缩等骨骼肌疾病提供了新的方案。参考文献：1.Salani,S.,etal.,Generationofskeletalmusclecellsfromembryonicandinducedpluripotentstemcellsasaninvitromodelandfortherapyofmusculardystrophies.JCellMolMed,2012.16(7):p.1353-64.2.Bhagavati,S.andW.Xu,Generationofskeletalmusclefromtransplantedembryonicstemcellsindystrophicmice.BiochemBiophysResCommun,2005.333(2):p.644-9.3.Bentzinger,C.F.,Y.X.Wang,andM.A.Rudnicki,Buildingmuscle:molecularregulationofmyogenesis.ColdSpringHarbPerspectBiol,2012.4(2).4.Comai,G.andS.Tajbakhsh,Molecularandcellularregulationofskeletalmyogenesis.CurrTopDevBiol,2014.110:p.1-73.5.Grifone,R.,etal.,TheRNA-bindingproteinRbm24istransientlyexpressedinmyoblastsandisrequiredformyogenicdifferentiationduringvertebratedevelopment.MechDev,2014.134:p.1-15.6.Yang,J.,etal.,RBM24isamajorregulatorofmuscle-specificalternativesplicing.DevCell,2014.31(1):p.87-99.7.Miyamoto,S.,etal.,RNA-bindingproteinsRbm38andRbm24regulatemyogenicdifferentiationviap21-dependentand-independentregulatorypathways.GenesCells,2009.14(11):p.1241-52.
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供Rbm24基因。本专利技术的第二目的在于提供过表达或激活的Rbm24基因。本专利技术的第三目的在于提供基因Rbm24基因序列构建的表达载体。本专利技术的第四目的在于提供Rbm24基因转染多能性干细胞。本专利技术的第五目的在于提供Rbm24基因转染多能性干细胞的应用。本专利技术的第六目的在于提供Rbm24基因感染多能性干细胞。本专利技术的第七目的在于提供Rbm24基因感染多能性干细胞的应用。本专利技术的第八目的在于提供基于Rbm24基因获得干细胞源成熟骨骼肌细胞的方法。所述Rbm24基因的核苷酸序列如序列表所示。所述Rbm24基因为过表达或激活Rbm24基因。所述基于Rbm24基因序列构建的表达载体包括其核苷酸序列如序列表所示的Rbm24基因、荧光报告基因以及抗生素筛选基因。所述干细胞为胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESC)或诱导多能性干细胞(inducedpluoripotentstemcells,iPSC)。所述Rbm24基因转染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。所述Rbm24基因感染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。所述基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法包括以下步骤：1)构建含有编码RNA结合蛋白Rbm24的基因序列的转染载体；2)将步骤1)中构建的转染载体转染到干细胞中；3)转染后，用骨骼肌定向分化诱导液进行诱导分化，直至获得成熟的骨骼肌细胞。在步骤2)中，所述干细胞为胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESC)或诱导型多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,iPSC)。本专利技术所需解决的技术问题在于提供基于过表达或激活Rbm24基因促进多能干细胞定向分化成骨骼肌细胞的方法，通过表达外源Rbm24基因或促进内源Rbm24的表达，促进干细胞体外向骨骼肌细胞分化，可提高干细胞向骨骼肌细胞分化的效率。本专利技术通过过表达或激活Rbm24的表达，高效促进干细胞分化为骨骼肌样细胞，为临床治疗骨骼肌疾病和药物研发提供了细胞来源和实验体系。与现有技术相比，本专利技术有以下技术效果：1)本专利技术克隆了Rbm24基因并构建了表达载体。2)本专利技术在多能干细胞的分化过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Rbm24基因的核苷酸序列如序列表所示。

【技术特征摘要】
1.Rbm24基因的核苷酸序列如序列表所示。2.Rbm24基因为过表达或激活Rbm24基因。3.基于Rbm24基因序列构建的表达载体包括其核苷酸序列如序列表所示的Rbm24基因、荧光报告基因以及抗生素筛选基因。4.干细胞为胚胎干细胞或诱导多能性干细胞。5.如权利要求4所述干细胞，其特征在于Rbm24基因转染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。6.如权利要求4所述干细胞，其特征在于Rbm24基因感染多能性干细胞在...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐秀琴，韩月，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35