一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法技术

本发明专利技术公开了一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，涉及遗传育种技术领域，首先确定酥瓜取胚条件为：开花并授粉后16～18天，此种条件下获取的去皮种子经组织培养后的存活率较佳且比成熟种子提前10天；然后确定上述去皮种子的最佳培养基为：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L、碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L、琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L等，同时确定了耐盐逆境鉴定筛选的最佳条件；本发明专利技术的方法够快速筛选出目标材料。

A Rapid Screening Method for Salt-tolerant Breeding Materials of Crisp Melon

【技术实现步骤摘要】
一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法
本专利技术涉及遗传育种
，尤其涉及一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法。
技术介绍
酥瓜(CucumismeloL.var.conomonGroup)是葫芦科甜瓜属薄皮甜瓜种的变种，主要特色为瓜肉酥脆、香气浓郁。近年来，酥瓜的设施栽培越来越广泛，设施栽培土壤缺乏自然雨水淋融，由于人为化肥施用多、植物自身选择性吸收等，导致土壤盐分过高，影响酥瓜的生长，给酥瓜生产带来损失，培育耐盐酥瓜品种，是酥瓜设施高效栽培的重要方法。江淮地区甜瓜品种选育时，通常一年仅能繁殖一至两代，育种材料目标性状纯合周期较长。甜瓜育种中，针对高盐逆境进行育种材料筛选时，目前常是在待种子完全成熟后，取种播种，再通过苗期或成株期，在栽培土壤或基质中，人工加入盐分进行培育观察，由于土壤、基质性质不稳定，盐分分布不均匀，且易受外界温度、湿度等环境因子影响，进行大量筛选时，筛选效果不稳定，需要多次重复试验，工作量大，费工费时。因此，如何提高酥瓜耐盐育种材料的快速筛选，是急需解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，以解决现有技术中针对酥瓜耐盐育种方法周期过长、筛选效果差且费工费时等技术问题。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16-18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基；培养基以MS配方为基础进行了调整，具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；琼脂粉：8500mg/L；蔗糖：18000mg/L；激素：赤霉素(GA3)1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L步骤5、将步骤3获取的无皮种子在步骤4制备的培养基中进行无菌培养；培养条件为：前三日，温度25-28℃，白天给予弱光，促种子萌发；然后，12h光照/d，光照2500lx，白天温度25-28℃，夜间18-20℃，培养7天；然后移入新培养基中培养5～8天，所述新培养基的配方与步骤4制备的培养基相同且添加有5850mg/L的氯化钠，考察根的长度、数量、幼苗株高、茎粗等生长情况，筛选出耐盐后代，剔除弱苗，移至与步骤4制备的培养基相同组分的培养基中继续培养，培养至6片真叶；步骤6、步骤5获取的植株再次进行步骤2；步骤7、重复步骤2-6，重复4-8次后，即可获得酥瓜耐盐育种材料。进一步，所述步骤3中获得无皮种子的具体方法为：将酥瓜果实用纯净水清洗3遍后，放入已准备好的超净工作台中，将果实放入75％乙醇中消毒60s，利用解剖刀、剪刀等工具，无菌操作，将幼嫩种子从酥瓜果实中取出，种子在纯净水清洗3遍，再放入75％乙醇中消毒60s后取出，用灭菌水冲洗3次，用解剖刀、剪刀、镊子等工具。进一步，步骤7中重复次数为4次。进一步，所述步骤5中移入新培养基中培养的天数具体为6天。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术提供一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，本专利技术，针对酥瓜种子发育特点及育种要求，明确酥瓜幼种培养最佳取胚时期，以及最佳培养基配方；在此基础上，通过组培未完全成熟的种子，并在培养基中加入一定浓度的盐分，既保证组培幼苗有一定的成活率，又直接剔除部分不耐盐的材料，减轻后续筛选工作量及环境控制难度；同时，在采用幼胚培养+逆境筛选的基础上，进行设施驯化栽培，可实现一年4代以上筛选，达到快速筛选的目的。具体实施方式下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。本专利技术中选用的所有原辅材料、试剂和仪器、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本专利技术的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本专利技术以下实施方式的实施。一、明确最佳取胚时间选取同种品质的酥瓜种子分为第一组、第二组、第三组、第四组、第五组和第六组，在同等条件下种植，待每组内的酥瓜开花并人工授粉后，结出果实后取胚，每组取胚时间不同，即每组执行一种取胚时间，共五组取胚时间，其中，取胚时间如下：表1对获取的五组幼胚种子，分别进行去皮操作，具体操作为：将采收的果实用纯净水清洗3遍后，放入已准备好的超净工作台中，将果实放入75％乙醇中消毒60s，利用解剖刀、剪刀等工具，无菌操作，将幼嫩种子从酥瓜果实中取出，种子在纯净水清洗3遍，再放入75％乙醇中消毒60s后取出，用灭菌水冲洗3次，用解剖刀、剪刀、镊子等工具，去除种皮，获得去皮种子。获得五组去皮种子，对五组去皮种子在同等条件下进行组织培养，分别培养15d，获得五组培养结果，分别统计五组培养结果的成活率，统计结果如表2第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组成活率％510234080818386表2根据表1和表2，可以确定，取胚过早(少于花后于12天)时，成苗率均较低，取胚较晚时(大于花后18天)，虽然成苗率较高，但已经接近种子正常成熟时间，对于提早培育下一代效果不明显。综合考虑，第五组取胚时间较好，培养16天成苗率达80％以上(表2)，且对于薄皮早熟甜瓜，花后16～18天亦基本可以确定果实形状，利于结合农艺性状进行后代选择，又能比待种子完全成熟在育苗提前10天以上。因此，酥瓜幼苗开花并人工授粉后，取胚时间为16d时，是最佳的取胚时间，是酥瓜幼胚培养的最佳取胚条件。二、明确最佳培养基配方对由步骤一明确的最佳取胚条件，获取相应的去皮种子，并分别在以下条件下的培养基内进行培养。表3统计上述六种培养基在同等外部环境下，培养出酥瓜幼苗的成活率，统计结果如表4配方1配方2配方3配方4配方5配方6成活率％397841816834表4其中外部环境均为：无菌培养，前三日，温度25-28℃，白天给予弱光，促种子萌发；然后，12h光照/d，光照2500lx，白天温度25-28℃，夜间18-20℃，培养7天。根据表3和表4，可得知酥瓜去皮种子的最佳培养基配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；其他：琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L；激素：赤霉素(GA3)1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L。三、耐盐幼苗筛选培养基中盐浓度的确定然后进行下述步骤以配方4为基础，分别按照0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16‑18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基；培养基具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；琼脂粉：8500mg/L；蔗糖：18000mg/L；激素：赤霉素1.0mg/L，6‑苄氨基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.5mg/L步骤5、将步骤3获取的无皮种子在步骤4制备的培养基中进行无菌培养；培养条件为：前三日，温度25‑28℃，白天给予弱光，促种子萌发；然后，12h光照/d，光照2500lx，白天温度25‑28℃，夜间18‑20℃，培养7天；然后移入新培养基中培养5～8天，所述新培养基的配方与步骤4制备的培养基相同且添加有5850mg/L的氯化钠，考察根的长度、数量、幼苗株高、茎粗等生长情况，筛选出耐盐后代，剔除弱苗，移至与步骤4制备的培养基相同组分的培养基中继续培养，培养至6片真叶；步骤6、步骤5获取的植株再次进行步骤2；步骤7、重复步骤2‑6，重复4‑8次后，即可获得酥瓜耐盐育种材料。...

【技术特征摘要】
1.一种酥瓜耐盐育种材料快速筛选的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16-18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基；培养基具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；琼脂粉：8500mg/L；蔗糖：18000mg/L；激素：赤霉素1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.5mg/L步骤5、将步骤3获取的无皮种子在步骤4制备的培养基中进行无菌培养；培养条件为：前三日，温度25-28℃，白天给予弱光，促种子萌发...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪承刚，侯金锋，朱世东，袁凌云，陈国户，苏亚，单国雷，王安源，李仁杰，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34