一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法技术

本发明专利技术公开了一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，涉及遗传育种技术领域，首先确定酥瓜取胚条件为：开花并授粉后16～18天，此种条件下获取的去皮种子经组织培养后的存活率较佳且比成熟种子提前10天；然后确定上述去皮种子的最佳培养基为：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L、碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L、琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L等，同时确定了获取的酥瓜幼苗培养至子叶展开时，逆境鉴定的最佳条件：白天温度15‑18℃，夜间12‑15℃；本发明专利技术的方法够快速筛选出目标材料。

【技术实现步骤摘要】
一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法
本专利技术涉及遗传育种
，尤其涉及一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法。
技术介绍
江淮流域，酥瓜栽培的主要设施为塑料薄膜大棚，冬春育苗亦以塑料薄膜大棚进行多层覆盖为主，而江淮流域冬春季节温度相对较低，常用生产设施的保温、补光能力较差，同时，江淮流域冬春常遭遇连阴雨天气，低温、弱光逆境表现更为突出，制约了酥瓜的春早熟栽培进程。因而有必要针对低温、弱光逆境，进行酥瓜新品种的选育。江淮地区酥瓜品种选育时，通常一年仅能繁殖一至两代，育种材料目标性状纯合周期较长。同时，针对低温弱光逆境进行育种材料筛选时，目前常是在待种子完全成熟后，取种播种，再通过人工创造低温弱光环境在苗期进行培育观察，进行大量筛选时，需用人工气候箱、人工气候室进行环境模拟，低温弱光环境常不够均一、稳定，筛选效果差且费工费时。如何快速获取耐低温弱光的酥瓜育种材料，是急需解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，以解决现有技术中针对酥瓜耐低温、弱光的新品种的育种方法周期过长、筛选效果差且费工费时等技术问题。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16-18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基培养基以MS配方为基础，具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；其他：琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L；激素：赤霉素(GA3)1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L；步骤5、将去皮种子在步骤4中的培养基内进行无菌培养，温度25-28℃，白天时间给予弱光，促种子萌发；三天后，给予12h光照/d，光强3000lx，白天温度25-28℃，夜间18-20℃；培养至子叶展开时，进行相对低温培养，白天温度15-18℃，夜间12-15℃，培养一周后，恢复正常温度培养，培养至2片真叶时，考察培养基中根的长度、数量，幼苗株高、茎粗等生长情况，剔除弱苗，获得目标幼苗；步骤6、将步骤5获得的目标幼苗在塑料大棚内栽培步骤7、重复步骤1-6，重复4-8次后，即可获得耐低温弱光的育种材料。进一步，步骤2中去除种皮的具体方法为：将采收的果实用纯净水清洗3遍后，放入已准备好的超净工作台中，将果实放入75％乙醇中消毒60s，利用解剖刀、剪刀等工具，无菌操作，将幼嫩种子从酥瓜果实中取出，种子在纯净水清洗3遍，再放入75％乙醇中消毒60s后取出，用灭菌水冲洗3次，用解剖刀、剪刀、镊子等工具，去除种皮，获得去皮种子。进一步，所述步骤2中取胚时间为16天。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术提供一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，本专利技术，针对酥瓜种子发育特点及育种要求，明确了酥瓜幼种培养最佳取胚条件，以及最佳培养基配方；在此基础上，针对耐低温弱光育种目标，在幼胚组培阶段，利用组培过程中，光、温环境易于调控的特点，明确最佳的弱光、低温逆境筛选条件，既保证有一定的成活率，又直接剔除部分不符合育种目标的材料，减轻后续筛选工作量及环境控制难度；同时，在采用幼胚培养+逆境筛选的基础上，进行设施驯化栽培，可实现一年4代以上筛选，达到快速筛选的目的。具体实施方式下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。本专利技术中选用的所有原辅材料、试剂和仪器、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本专利技术的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本专利技术以下实施方式的实施。一、明确最佳取胚时间选取同种品质的酥瓜种子分为第一组、第二组、第三组、第四组、第五组和第六组，在同等条件下种植，待每组内的酥瓜开花并人工授粉后，结出果实后取胚，每组取胚时间不同，即每组执行一种取胚时间，共五组取胚时间，其中，取胚时间如下：表1对获取的五组幼胚种子，分别进行去皮操作，具体操作为：将采收的果实用纯净水清洗3遍后，放入已准备好的超净工作台中，将果实放入75％乙醇中消毒60s，利用解剖刀、剪刀等工具，无菌操作，将幼嫩种子从酥瓜果实中取出，种子在纯净水清洗3遍，再放入75％乙醇中消毒60s后取出，用灭菌水冲洗3次，用解剖刀、剪刀、镊子等工具，去除种皮，获得去皮种子。获得五组去皮种子，对五组去皮种子在同等条件下进行组织培养，分别培养15d，获得五组培养结果，分别统计五组培养结果的成活率，统计结果如表2第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组成活率％510234080818386表2根据表1和表2，可以确定，取胚过早(少于花后于12天)时，成苗率均较低，取胚较晚时(大于花后18天)，虽然成苗率较高，但已经接近种子正常成熟时间，对于提早培育下一代效果不明显。综合考虑，第五组取胚时间较好，培养16天成苗率达80％，且对于薄皮早熟酥瓜，花后16～18天亦基本可以确定果实形状，利于结合农艺性状进行后代选择，又能比待种子完全成熟在育苗提前10天以上。因此，酥瓜幼苗开花并人工授粉后，取胚时间为16d时，是最佳的取胚时间，是酥瓜幼胚培养的最佳取胚条件。二、明确最佳培养基配方对由步骤一明确的最佳取胚条件，获取相应的去皮种子，并分别在以下条件下的培养基内进行培养。表3统计上述六种培养基在同等外部环境下，培养出酥瓜幼苗的成活率，统计结果如表4配方1配方2配方3配方4配方5配方6成活率％397841816834表4其中外部环境均为：无菌培养，温度25-28℃，白天时间给予弱光，促种子萌发；三天后，给予12h光照/d，光强3000lx，白天温度25-28℃，夜间18-20℃；培养至子叶展开。根据表3和表4，可得知酥瓜去皮种子的最佳培养基配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；其他：琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L；激素：赤霉素(GA3)1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L。三、明确最佳弱光、低温逆境筛选条件弱光、低温逆境条件的确定弱光常规组培本身就是在弱光条件下培养，为充分利用组培条件，减少筛选工序，减少不必要的投入，就直接按照常规组培技术的光照条件给予光照，观测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16‑18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基培养基以MS配方为基础，具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；其他：琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L；激素：赤霉素1.0mg/L，6‑苄氨基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.5mg/L；步骤5、将去皮种子在步骤4中的培养基内进行无菌培养，温度25‑28℃，白天时间给予弱光，促种子萌发；三天后，给予12h光照/d，光强3000lx，白天温度25‑28℃，夜间18‑20℃；培养至子叶展开时，进行相对低温培养，白天温度15‑18℃，夜间12‑15℃，培养一周后，恢复正常温度培养，培养至2片真叶时，考察培养基中根的长度、数量，幼苗株高、茎粗等生长情况，剔除弱苗，获得目标幼苗；步骤6、将步骤5获得的目标幼苗，并重新进行步骤2操作；步骤7、重复步骤2‑6，重复4‑8次后，即可获得耐低温弱光的育种材料。...

【技术特征摘要】
1.一种酥瓜耐低温弱光育种材料快速筛选的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、在塑料大棚内对育种材料进行播种；步骤2、待育种材料成长至开花并人工授粉16-18天后，采收所结果实备用；步骤3、获取步骤2采收果实的种子，去除种皮，获得去皮种子；步骤4、准备培养基培养基以MS配方为基础，具体配方为：大量元素：硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，无水硫酸镁90mg/L，无水氯化钙165mg/L；微量元素：碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，一水合硫酸锰16.9mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.26mg/L，无水硫酸亚铁15.2mg/L；其他：琼脂粉8500mg/L，蔗糖18000mg/L；激素：赤霉素1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L，萘乙酸0.5mg/L；步骤5、将去皮种子在步骤4中的培养基内进行无菌培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯金锋，汪承刚，朱世东，袁凌云，陈国户，苏亚，赵冠艳，王安源，李仁杰，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34