检测血液中维生素K1含量的液质分析方法技术

本发明专利技术检测血液中维生素K1含量的液质分析方法是使用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中维生素K1的相对浓度x，内标物工作液中维生素K1同位素浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的维生素K1的浓度，本发明专利技术血清样本经液液萃取前处理后进样分析，检测过程简便快速，检测灵敏度高，更利于在临床治疗中对患者体内的维生素K1含量进行测定。

Liquid quality analysis method for determination of vitamin K1 in blood

【技术实现步骤摘要】
检测血液中维生素K1含量的液质分析方法
本专利技术涉及脂溶性维生素的临床含量浓度监测
，尤其涉及一种检测血液中维生素K1含量的方法。
技术介绍
维生素K1，分子式为C31H46O2，具体化学结构如下图1所示。维生素K1为肝内合成凝血酶原的必需物质，当缺乏时可造成凝血障碍。当血液中维生素K1注射液凝血酶原缺乏时，血液的凝固就会出现迟缓，这时补充适量的维生素K1可促使肝脏合成凝血酶原，起到止血的作用。维生素K1作为医药制剂，在临床上应用于凝血酶过低症、维生素K1缺乏症、新生儿自然出血症的防治以及梗阻性黄疸、胆瘘、慢性腹泻等所致出血，香豆素类、水杨酸钠等所致的低凝血酶原血症。维生素还具有镇痛、缓解支气管痉挛的作用，对内脏平滑肌绞痛、胆管痉挛、肠痉挛引起的绞痛有明显的效果，维生素K1还可以用于多维食品的添加剂。目前常用的维生素K1的测定方法众多，各有优缺点，包括高效液相色谱法、免疫法、液相色谱串联质谱法等。液相色谱法检测时，前处理过程复杂，并且灵敏度低。免疫法检测时，前处理过程较简单，并且分析时间短但灵敏度低、专属性差。液相色谱串联质谱法测定维生素含量具有定量准确，重现性好、灵敏度高、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测血液中维生素K1含量的液质分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)、标准溶液的标定(a)、标准工作液的配制：精确称维生素K1标准品15.46mg置于10mL容量瓶中，用10mL纯甲醇溶解并定容至刻度，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为5％‑15％的甲醇溶液进行稀释，分别在含有0.5‑5000ng/mL维生素K1的浓度范围内配制出各浓度的标准工作液，并在‑80℃条件下保存；(b)、标准内标液的配制：精确称取维生素K1同位素内标标准品1.00mg于1mL容量瓶中，用1mL纯甲醇溶解并定容至刻度，得到内标储备液B，将内标储备液B用含水量为5％‑15％的甲醇溶液进行稀释，得到含...

【技术特征摘要】
1.一种检测血液中维生素K1含量的液质分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)、标准溶液的标定(a)、标准工作液的配制：精确称维生素K1标准品15.46mg置于10mL容量瓶中，用10mL纯甲醇溶解并定容至刻度，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为5％-15％的甲醇溶液进行稀释，分别在含有0.5-5000ng/mL维生素K1的浓度范围内配制出各浓度的标准工作液，并在-80℃条件下保存；(b)、标准内标液的配制：精确称取维生素K1同位素内标标准品1.00mg于1mL容量瓶中，用1mL纯甲醇溶解并定容至刻度，得到内标储备液B，将内标储备液B用含水量为5％-15％的甲醇溶液进行稀释，得到含有维生素K1同位素的浓度为10ng/mL的标准内标液，并在-80℃条件下保存；(c)、用标准溶液标定，得到标准曲线方程用移液枪分别移取至少三种不同浓度的10μL标准工作液，将上述至少三种不同浓度的标准工作液分别与10μL的标准内标液和80μL替代基质混合，上述替代基质为含有4％的牛血清白蛋白，并置于2.0mL离心管中制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，向上述离心管中加入200-400μL的甲醇，并在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀3-5min，再向上述离心管中加入400-800μL的正己烷，并在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀5-10min，然后在转速为12000-14000rpm下离心5-10min，得到上清液，分别移取400-550μL上述上清液置于另一个离心管中，在常温下用氮气吹10min-20min直至上述上清液全部被吹干后，向吹干的离心管中分别加入100μL复溶液，该复溶液是含有0.05％-2％的甲酸和含有5％-15％水的甲醇溶液，在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，再在转速为12000-14000rpm下离心5-10min得上清液，分别取上述上清液100μL，用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对上述上清液进行检测，分别得出上述至少三种标准溶液中的维生素K1色谱图和对应的维生素K1同位素色谱图，以上述至少三个标准溶液的维生素K1峰面积与对应的维生素K1同位素峰面积之比作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有维生素K1的浓度与标准内标液中含有维生素K1同位素浓度之比作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；(二)、检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，得到上清液即血清，将上述血清置于-80℃冷冻下保存至分析前备用；(三)、待测样品处理(d)、用移液枪移取步骤(c)的标准内标液10μL于1.5mL的离心管中，然后加入步骤(二)的100uL的血清于上述离心管中，在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min，然后向上述离心管中加入200-400μL甲醇，并在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀3-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春冉，佟洪梅，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11