检测血液中儿茶酚胺含量的液质分析方法技术

本发明专利技术检测血液中儿茶酚胺含量的液质分析方法是用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y1＝a*x1+b、y2＝c*x2+d和y3＝e*x3+f，在该待检测血液经过处理后，同样用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对待测的样品进行检测，得到待测血液y1、y2和y3值，将其代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液中儿茶酚胺三种物质的相对浓度x1、x2和x3，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该待检测血液中的儿茶酚胺三种物质浓度，本发明专利技术血浆经off‑line SPE处理后直接进样，使检测过程简便快速，检测灵敏度高，利于对患者体内儿茶酚胺含量进行测定。

Liquid quality analysis method for determination of catecholamine in blood

【技术实现步骤摘要】
检测血液中儿茶酚胺含量的液质分析方法
本专利技术涉及神经类物质的临床含量浓度监测
，尤其涉及一种检测血液中神经类物质儿茶酚胺含量的方法。
技术介绍
嗜铬细胞瘤是起源于肾上腺髓质，交感神经节，旁交感神经节可分泌过量儿茶酚胺(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺，具体化学结构如下图1、图2、图3所示)并可出现在肾上腺、膀胱、腹主动脉旁、腹膜后及心脏等的嗜铬组织的肿瘤。由于瘤组织可阵发性或持续性地分泌大量的儿茶酚胺，常出现阵发性或持续性高血压临床症状，并表现多样化，以心血管系统症状为主兼有其他代谢紊乱症群。嗜铬细胞瘤病情凶险，变化剧烈，如不及时治疗易引起心脑血管并发症而导致死亡。因此嗜铬细胞瘤的早期诊断，具有重要的临床意义。嗜铬细胞瘤早期诊断非常重要，但早期在影像学中较难定位，特别是肾上腺以外包括主动脉旁，膀胱内，直肠后，胸内等部位的瘤体更难发现，而这些部位的嗜铬细胞瘤多数为恶性。嗜铬细胞瘤体大小与儿茶酚胺的释放不成正比，巨大的肿瘤因儿茶酚胺在瘤体内转换速度较慢，降解较充分故释放到血液中的儿茶酚胺较少，在较小的瘤体内，情况则相反。由于肿瘤分泌大量的儿茶酚胺，其代谢产物邻苯二酚胺在周围组织，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测血液中儿茶酚胺含量的液质分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)、标准溶液的标定(a)、标准工作液的配制：精确称取去甲肾上腺素标准品3.2mg置于2mL容量瓶中，用含有0.01％‑2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到标准储备液A，其去甲肾上腺素的浓度为1324.5μg/mL，用含有0.01％‑2％甲酸稀释液从标准储备液A稀释得到标准中间液B，其去甲肾上腺素的浓度为6μg/mL；精确称取肾上腺素标准品2.80mg置于2mL容量瓶中，用含有0.01％‑2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到标准储备液C，其肾上腺素的浓度为1400μg/mL，用含有0.01％‑2％甲酸稀释液从标...

【技术特征摘要】
1.一种检测血液中儿茶酚胺含量的液质分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)、标准溶液的标定(a)、标准工作液的配制：精确称取去甲肾上腺素标准品3.2mg置于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到标准储备液A，其去甲肾上腺素的浓度为1324.5μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液A稀释得到标准中间液B，其去甲肾上腺素的浓度为6μg/mL；精确称取肾上腺素标准品2.80mg置于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到标准储备液C，其肾上腺素的浓度为1400μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液C稀释得到标准中间液D，其肾上腺素的浓度为1.5μg/mL；精确称取多巴胺标准品1.15mg置于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶解并定容至刻度，得到标准储备液E，其多巴胺的浓度为928.9μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液E稀释得到标准中间液F，其多巴胺的浓度为300ng/mL；将标准中间液B、D和F以1:1:1的体积比混合后，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行稀释，在含有940-60000pg/mL去甲肾上腺素、240-15000pg/mL肾上腺素和50-3000pg/mL多巴胺的浓度范围内配制出各浓度的标准工作液，并在-80℃条件下保存；(b)、标准内标液的配制精确称取去甲肾上腺素同位素内标标准品1.529mg于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到内标储备液G，其去甲肾上腺素同位素的浓度为650μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液G稀释得到标准中间液H，其去甲肾上腺素同位素内标的浓度为1.35μg/mL；精确称取肾上腺素同位素内标标准品1.4mg于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到内标储备液I，其肾上腺素同位素的浓度为700μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液I稀释得到标准中间液J，其肾上腺素同位素内标的浓度为300ng/mL；精确称取多巴胺同位素内标标准品5.78mg于2mL容量瓶中，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行溶解并定容至刻度，得到内标储备液K，其多巴胺同位素的浓度为2348.6μg/mL，用含有0.01％-2％甲酸稀释液从标准储备液K稀释得到标准中间液L，其多巴胺同位素内标的浓度为500ng/mL；将内标中间液H、J和L以2:1:1的体积比混合后，用含有0.01％-2％甲酸水溶液进行稀释，得到含有27ng/mL去甲肾上腺素同位素、含有3ng/mL肾上腺素同位素和含有5ng/mL多巴胺同位素浓度的标准内标液，并在-80℃条件下保存；(c)、用标准溶液标定，得到标准曲线方程：用移液枪分别移取至少三种不同浓度的标准工作液10μL，将上述至少三种不同浓度的标准工作液分别与10μL标准内标液和290μL替代基质混合，并置于1.5mL离心管中制成至少三种标准溶液，上述替代基质为含有4％的牛血清白蛋白，在上述标准溶液中分别加入300μL含有20-100mmol/L乙酸铵的缓冲液，然后在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min；用100-300μL含有0.5％-2％甲醇的水溶液对off-lineSPE固相萃取装置中的SPE柱进行活化处理，再将上述处理好的标准溶液分别全部转移至SPE柱，依次加入100-300μL含有1:1的乙腈与异丙醇和100-300μL含有5-40mmol/L乙酸铵水溶液的洗涤液进行洗涤，最后加入40-100μL含有0.5％-4％甲酸的洗脱液进行洗脱，分别取上述洗脱液100μL，用高效液相色谱三重四级杆串联质谱仪对上述洗脱液进行检测，分别得出上述至少三种标准溶液中的去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的色谱图及其对应的标准内标液中去甲肾上腺素同位素、肾上腺素同位素和多巴胺同位素的色谱图，以上述至少三个标准溶液的去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的峰面积和对应的标准内标液中的去甲肾上腺素同位素、肾上腺素同位素和多巴胺同位素的峰面积之比作为标准曲线图的纵坐标y1、y2和y3，以上述标准工作液中含有去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺的浓度与对应的标准内标液中的去甲肾上腺素同位素、肾上腺素同位素和多巴胺同位素的浓度之比作为标准曲线图的横坐标x1、x2和x3，将以上检测所得至少九组数据分别进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y1＝a*x1+b、y2＝c*x2+d和y3＝e*x3+f并且得出权重系数a、b、c、d、e和f；(二)、检测血液的离心取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，得到上清液即血浆，将上述血浆置于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春冉，翟瑞雪，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11