乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，属于基因检测技术领域，解决了现有技术不能在化疗前获知肿瘤对NAC的敏感性，预测其疗效的问题。基因检测试剂盒包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，其中，所述引物包括两组引物，第一组引物为扩增或检测mTOR基因第11249132位突变位点的特异性引物，第二组引物为扩增或检测扩增XRCC1基因第44055726和44055727位突变位点的特异性引物。本发明专利技术提供的基因检测试剂盒，能在化疗前获知肿瘤对NAC的敏感性，动态检测变化情况，大幅提高治疗有效率，指导后续综合治疗，减少不必要的毒副反应，并避免经济上的浪费。

【技术实现步骤摘要】
乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒
本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤，稳居女性肿瘤发病率之首。新辅助化疗(Neo-adjuvantchemotherapy，NAC)是指在施行手术或放疗前应用的全身性化疗，又称为术前化疗，目前NAC已广泛应用于临床，但国内、外并没有确切的精准指南，对不敏感的部分病人，这种治疗是否贻误了手术时机；甚至对一些病人是一种过度治疗，都还没有统一的观点。如果能在化疗前获知肿瘤对NAC的敏感性，预测其疗效，将会大幅提高有效率，指导后续综合治疗，减少不必要的毒副反应，并避免经济上的浪费。循环血中的肿瘤细胞及其释放的蛋白、基因片段等，作为循环肿瘤标志物可实时动态反应肿瘤负荷，同时携带大量肿瘤生物学行为相关信息，具有预后、预测价值。随着体液活检概念的普及，从传统癌标到循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells，CTC)，再到肿瘤细胞释放的DNA片段也称为循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)。ctDNA随携带的肿瘤相关信息与肿瘤组织具有良好的一致性，检测灵敏度极高，能够更早地对治疗效果和病程发展做出反应，且和预后、复发风险预测的相关性最强。对血浆ctDNA进行检测液发现，治疗前血浆中ctDNA水平与CT和PET等影像学检查所见的肿瘤体积显著相关，并优于影像学检查。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，通过检测携带肿瘤细胞生物学信的ctDNA找到特异性突变基因，动态监测变化情况，精准、个体化判定NAC疗效，进而制定我国乳腺癌NAC治疗的相关共识，规范乳腺癌的NAC治疗，为国际指南提供参考。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供的乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，其中，所述引物包括两组引物，第一组引物为扩增或检测mTOR基因第11249132位突变位点的特异性引物，第二组引物为扩增或检测扩增XRCC1基因第44055726和44055727位突变位点的特异性引物。在本专利技术中，mTOR基因，为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)，是PI3K/Akt下游的一种重要的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。它可通过激活核糖体激酶，来调节肿瘤细胞的增殖、存活和侵袭转移。乳腺癌患者中，常有PI3K/Akt/mTOR通路异常：包括原癌基因PIK3CA的激活、抑癌基因PTEN的失活，均可导致AKT基因的调节失控，最终通过激活mTOR引发细胞异常生长。XRCC1基因，为人类X射线交错互补修复基因1(X-rayrepaircomplementingdefectiverepairinChinesehamstercells1)，位于第19号染色体19q13.31位置，XRCC1基因全长32.3kb，共有17个外显子，mRNA全长2,087nt，编码634个氨基酸残基组成的蛋白。XRCC1编码的蛋白对因电离辐射和烷基化物引起的DNA单链断裂能起到有效的修复作用。XRCC1编码的蛋白与DNA连接酶III、聚合酶β、多聚ADP核糖转移酶交互作用，参与DNA的碱基切除修复(BaseExcisionRepair，BER)通路。研究证实，铅接触可诱发机体引起氧化应激导致DNA损伤，因此XRCC1作为重要的DNA损伤修复基因，XRCC1基因上部分位点的多态性，与癌症发生有密切的关系。作为优选的，所述第一组引物的上游引物序列如SEQIDNO：1所示，所述第一组引物的下游引物序列如SEQIDNO：2所示。作为优选的，所述第二组引物的上游引物序列如SEQIDNO：3所示，所述第二组引物的下游引物序列如SEQIDNO：4所示。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：目前我国乃至全球尚缺乏敏感、特异的指标，来预测肿瘤对NAC治疗的反应性，本专利技术提供的乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，应用定量ctDNA检测新技术检测初治乳腺癌病人的血液及肿瘤标本，找到特异性突变基因，能在化疗前获知肿瘤对NAC的敏感性，动态检测变化情况，精准、个体化判定NAC疗效，大幅提高治疗有效率，指导后续综合治疗，减少不必要的毒副反应，并避免经济上的浪费，为患者减轻负担。同时通过该试剂盒也建立了一种乳腺癌NAC疗效预测模型，推动定量ctDNA检测新技术的产业化。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面将结合实施例对本专利技术作进一步的详细介绍。实施例1本专利技术提供的乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，其中，所述引物包括两组引物，第一组引物为扩增或检测mTOR基因第11249132位突变位点的特异性引物，第二组引物为扩增或检测扩增XRCC1基因第44055726和44055727位突变位点的特异性引物。第一组引物的上游引物序列如SEQIDNO：1所示，所述第一组引物的下游引物序列如SEQIDNO：2所示。详见下表1。表1第一组引物序列信息引物序列号序列(5'->3')模板链长度起始终止TmGC％SEQIDNO：1AGGATAAGGAGCAGGGTTGGPlus20440556884405570758.7855.00SEQIDNO：2CTCAGATCACACCTAACTGGCAMinus22440558844405586359.7750.00目标基因名称：XRCC1目标基因位置：19q13.31碱基变化：TG>-碱基位置：chr19:44055726基因序列：>NC_000019.9:c44055900-44055600Homosapienschromosome19,GRCh37.p13PrimaryAssemblySEQIDNO：5TCGTTCCCCTTTGCCCCTCAGATCACACCTAACTGGCATCTTCACTTCTGCCCCCCACCAGCTGTGCCTTTGCCAACACCCCCAAGTACAGCCAGGTCCTAGGCCTGGGAGGCCGCATCGTGCGTAAGGAGTGGGTGCTGGACTGTCACCGCATGCGTCGGCGGCTGCCCTCCCAGAGGTAAGGCCTCACACGCCAACCCTGCTCCTTATCCTGTGCTGGGCAATGCCAGGAATCTGGAGGGGAGTCAGACTGGGGCCTGCCAGCGGAGAACACAGGTGGTCCCAGCCCAGAGCCAGCAGA注：突变基因的位置在44055726和44055727，表现为TG(AC)的缺失，序列中已标注下划线。第二组引物的上游引物序列如SEQIDNO：3所示，所述第二组引物的下游引物序列如SEQIDNO：4所示。详见表2。表2第二组引物序列信息引物序列号序列(5'->3')模板链长度起始终止TmGC％SEQIDNO：3TCTTTCGCCTACCTTACGCTCPlus21112490411124906159.8752.38SEQIDNO：4TTGTGTGTTTCCAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，其特征在于，所述引物包括两组引物，第一组引物为扩增或检测mTOR基因第11249132位突变位点的特异性引物，第二组引物为扩增或检测扩增XRCC1基因第44055726和44055727位突变位点的特异性引物。

【技术特征摘要】
1.乳腺癌新辅助化疗效果预测基因试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，其特征在于，所述引物包括两组引物，第一组引物为扩增或检测mTOR基因第11249132位突变位点的特异性引物，第二组引物为扩增或检测扩增XRCC1基因第44055726和44055727位突变位点的特异性引物。2.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏本杰，张茜茜，王连水，李博，左红斌，
申请(专利权)人：吉林省银丰生物工程技术有限公司，银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22