一种(5-oxo-D-Proline)-醋酸亮丙瑞林的制备方法技术

本发明专利技术提供一种制备(5‑oxo‑D‑Proline)]‑醋酸亮丙瑞林的方法，包括：(1)固相接肽：通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂，其中，接二肽到接九肽的步骤均包括去保护基；而后洗涤、中和、再洗涤、接肽和检测游离氨；(2)胺解：通过乙基胺从上述亮丙瑞林九肽树脂上解离粗品；(3)HPLC纯化：经HPLC制备柱纯化得到醋酸亮丙瑞林中间纯化品；(4)浓缩；(5)过滤、冻干。

【技术实现步骤摘要】
一种(5-oxo-D-Proline)-醋酸亮丙瑞林的制备方法
本专利技术涉及一种化学合成方法，具体涉及制备(5-oxo-D-Proline)-醋酸亮丙瑞林的制备方法。
技术介绍
目前醋酸亮丙瑞林原料药生产采用制备Boc-Pro--固相接肽-胺解-HPLC纯化-浓缩-过滤冻干工艺或采用制备FMoc-Pro--固相接肽-酸切割-乙胺化修饰-侧链全保护切割-HPLC纯化-浓缩-过滤冻干工艺。其中，固相接肽为通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂。在固相接肽过程中，由于发生消旋化等副反应，会产生多种副产物，虽然经过纯化去除副产物，但是依然会有部分残留在最终的成品原料药内。欧盟药典(日本和美国药典也均有描述)可知残留在原料药内已知的有关物质主要包括以下11种：[3-D-色氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[2-D-组氨酸，4-D-丝氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[7-D-亮氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[4-D-丝氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林、(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林、[8-[5-N-[imino(1H-pyrazol-lyl)-L-ornithine]]-醋酸亮丙瑞林、[6-L-亮氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[5-D-酪氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[4-dehydroalanine]-醋酸亮丙瑞林、[4-(0-acetyl-L-丝氨酸)]-醋酸亮丙瑞林。其中，(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林结构式如下：D-pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro·NHC2H5。上述每个有关物质除了在成品内的含量必须得到严格控制外，其理化性质、是否对患者产生不良反应以及毒理作用等，也要求尽可能清楚。要想对上述每个有关物质进行深入研究，必须得到足够量、结构正确且高纯度的有关物质就显得尤为重要。目前得到上述有关物质的途径主要为在对醋酸亮丙瑞林粗品进行纯化时，对微量的有关物质进行收集，此法所得有关物质量少且纯度较低。或者是收集到一定量后，再对其进行纯化得到，此法所得有关物质纯度较高，但是需要富集多批次的粗品才能得到一定量的有关物质，周期长，成本高。上述通过纯化目标肽，得到有关物质的方法受粗品纯度和纯化的分离度影响较大，当粗品内有关物质较少和纯化分离度较低时(例如：相对出峰时间为0.7至0.78的4种有关物质，纯化时被一起去除，相对出峰时间为0.9至1.09的3种有关物质与目标峰相似，难以分离)，难以得到结构明确的所需的有关物质。目前尚未有合成(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林的相关报道。
技术实现思路
本专利根据欧盟药典(日本和美国药典也均有描述)对相对出峰时间为0.94，英文字母为I【(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林】有关物质，提供另一种方法，即用合成法直接合成出粗品，然后再通过HPLC纯化-浓缩-过滤-真空冷冻干燥得到高纯度的目标产物。本专利提供了【(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林】有关物质的合成方法。本方法为Boc法固相合成方法，通过对反应温度，不同氨基酸使用不同的活化剂、脱BOC保护基试剂的应用，BOC-Pro-树脂中BOC-Pro的取代度的不断改进，不仅克服了Fmoc法生产周期长，成本高的缺点，本专利技术最大的优点是使副反应最小化，明显提高了BOC法粗品合成产率达到60％以上，同时大大提高了粗品质量，降低了生产成本。本专利的制备方法，具体为：1、固相接肽：通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂，其中，接二肽到接九肽的步骤均包括去保护基、洗涤、中和、再洗涤、接肽和检测游离氨；接肽中，接第四肽和第九肽为D氨基酸、其他为L氨基酸；其中，所述准备原料包括：将树脂以无水CH2Cl2洗涤，搅拌，抽干；所述的树脂取代当量数为0.4-0.7mmol/g2、胺解：通过乙基胺从上述亮丙瑞林九肽树脂上解离粗品3、HPLC纯化：经HPLC制备柱纯化得到醋酸亮丙瑞林中间纯化品；4、浓缩；5、过滤、冻干；并且步骤1中，接二肽到接九肽时，所述去保护基包括：将准备的原料加入浓度为9～10N的HCl/iPrOH溶液、CH2Cl2、硫基乙醇三者的混合液中，搅拌，抽干，其中HCl/iPrOH溶液、CH2Cl2、硫基乙醇三者的体积比为5∶4∶1。D-氨基酸采用高效的缩合剂HOAt和DlC，L-氨基酸采用HOBt和DCCI；接肽时，先将氨基酸单体的溶解液与高效缩合剂，在冰浴中进行预活化，滤除N-酰基脲等副产物再在-5℃至-22℃，进行缩合反应，减少副反应。步骤1中，2至9肽每次接肽反应完毕后，不再使用无水乙醇和甲醇洗涤，减少洗涤过程中因树脂收缩带来的不利影响。所得九肽树脂不再于50℃烘箱中干燥0.5小时以上，避免高温引起肽断裂。胺解时所用丙酮进行预冻至-20℃以下，避免高温沉淀引起肽链不可逆反应。本专利的制备方法，具体为以下步骤：1、接二肽：a)取一定量的树脂(取代当量数为0.55mmol/g)，洗涤、抽干；b)去保护基：加入HCl/iPrOH、CH2Cl2、巯基乙醇，搅拌，抽干；c)洗涤：CH2Cl2洗涤，抽干；DMF洗涤，抽干；d)中和：加入三乙胺/CH2Cl2(10/90)洗涤，抽干；洗涤：DMF洗涤，抽干；CH2Cl2洗涤至呈中性，抽干；e)接肽：Boc-Arg·HCl(·H2O)1HOBt1.0-1.15DCCI1.0-1.15f)氨基酸单体；HOBt和DCCI，分别用DMF溶解，先将氨基酸单体的溶解液与HOBt的溶解液混合，冰浴搅拌反应30-60分钟，然后再加入DCCI溶解液，继续搅拌反应，过滤，所得清液倒入树脂中，密塞瓶口，-5℃至-22℃反应；抽干溶剂，以CH2Cl2洗涤、DMF洗涤、CH2Cl2洗涤，抽干。2、接三肽：去保护基、洗涤、中和：方法同接二肽项下。接肽：Boc-Leu(·H2O)1HOBt1.15(1.0-1.15)DCCI1.15(1.0-1.15)方法同接二肽项下，3、接四肽去保护基、洗涤、中和：方法同接二肽项下。接肽：Boc-D-Leu1HOAt1.15(1.0-1.15)DIC1.15(1.0-1.15)方法同接二肽项下，4、接五肽：保护基、洗涤、中和：方法同接二肽项下。接肽：Boc-Tyr1HOBt1.15(1.0-1.15)DCCI1.15(1.0-1.15)方法同接二肽项下，5、接六肽：保护基、洗涤、中和：方法同接二肽项下。方法同接二肽项下。6、接七肽：保护基、洗涤、中和：方法同接二肽项下。接肽：Boc-Trp1HOBt1.15(1.0-1.15)DCCI1.15(1.0-1.15)方法同接二肽项下。2.7、接八肽去保护基：HCl/iPrOH、CH2Cl2、巯基乙醇，搅拌，抽干。洗涤、中和：方法同接二肽项下。方法同接二肽项下。2.8、接九肽去保护基：方法同接八肽项下。洗涤、中和：方法同接二肽项下。接肽：p-D-Glu1HOAt1.15(1.0-1.15)DIC1.15(1.0-1.15)方法同接二肽项下。洗涤：CH2Cl2洗涤1次、DMF洗涤2次、CH2Cl2洗涤2次，抽干本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备(5‑oxo‑D‑Proline)]‑醋酸亮丙瑞林的方法：(1)固相接肽：通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂，其中，接二肽到接九肽的步骤均包括去保护基；而后洗涤、中和、再洗涤、接肽和检测游离氨；其中，所述准备原料包括：将

【技术特征摘要】
1.一种制备(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林的方法：(1)固相接肽：通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂，其中，接二肽到接九肽的步骤均包括去保护基；而后洗涤、中和、再洗涤、接肽和检测游离氨；其中，所述准备原料包括：将树脂以无水CH2Cl2洗涤，搅拌，抽干；所述的树脂取代当量数为0.4-0.7mmol/g；(2)胺解：通过乙基胺从上述亮丙瑞林九肽树脂上解离粗品；(3)HPLC纯化：经HPLC制备柱纯化得到醋酸亮丙瑞林中间纯化品；(4)浓缩；(5)过滤、冻干。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的树脂取代当量数为0.55-0.7mmol/g。3.根据权利要求1所述的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王林鹏，张道桂，单连民，万龙岩，江晓漫，
申请(专利权)人：上海丽珠制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31