合成钴（II）啉酸a，c-二酰胺的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种合成CBAD的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用。具体地，本发明专利技术以大肠杆菌为出发菌株，构建了包含尿卟啉原III基因模块并且内源的血红素合成基因的表达被下调的工程菌，所述工程菌可以提高HBA的前体尿卟啉原III的积累，并且可以降低血红素途径通量，从而进一步提高HBA产量。

Recombinant Escherichia coli for the synthesis of cobalt (II) linoleic acid a, c-diamide and its construction method and Application

The invention provides an E. coli recombinant bacteria for CBAD synthesis, a construction method and application thereof. Specifically, an engineering bacterium containing uroporphyrinogen III gene module and down-regulated expression of endogenous hemoglobin synthesis gene is constructed by using Escherichia coli as the starting strain. The engineering bacterium can increase the accumulation of uroporphyrinogen III, the precursor of HBA, and reduce the hemoglobin pathway flux, thereby further improving the production of HBA.

【技术实现步骤摘要】
合成钴(II)啉酸a，c-二酰胺的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及合成钴(II)啉酸a，c-二酰胺的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用。
技术介绍
钴(II)啉酸a，c-二酰胺(Cob(II)yrinicacida,c-diamide，CBAD)是合成维生素B12的前体。在大肠杆菌中表达腺苷钴胺素合成基因cobAIGJMFKLH、cobB、cobNST、cbiMNQO，可以得到钴(II)啉酸a，c-二酰胺。但是现有技术中钴(II)啉酸a，c-二酰胺的产量很低，必然导致维生素B12的产量低。LC-MS没有检测到Hydrogenobyrinicacid(HBA)，说明HBA的产量低可能是钴(II)啉酸a，c-二酰胺产量低的直接原因。δ-aminolevulinate(ALA)是合成维生素B12的前体，大肠杆菌自身可以通过C5途径合成ALA。利用大肠杆菌来合成ALA的研究比较多，多数都是通过构建异源的C4途径。表达光合细菌如Rhodobactersphaeroides、Rhodopseudomonaspalustris的ALA合成酶基因hemA、he本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产CBAD(钴(II)啉酸a，c‑二酰胺)或其前体的工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌，并且所述工程菌含有外源的基因模块(gene module)，所述的基因模块包括：(a)尿卟啉原III基因模块,所述尿卟啉原III基因模块表达用于生物合成尿卟啉原III的基因；较佳地，所述的用于生物合成尿卟啉原III的基因包括：hemA或hemO基因、hemB基因、hemC基因、和hemD基因；并且，所述工程菌的内源的血红素合成基因的表达被下调；较佳地，所述的血红素合成基因包括：hemE基因、hemF基因、hemG基因、和/或hemH基因。

【技术特征摘要】
1.一种用于生产CBAD(钴(II)啉酸a，c-二酰胺)或其前体的工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌，并且所述工程菌含有外源的基因模块(genemodule)，所述的基因模块包括：(a)尿卟啉原III基因模块,所述尿卟啉原III基因模块表达用于生物合成尿卟啉原III的基因；较佳地，所述的用于生物合成尿卟啉原III的基因包括：hemA或hemO基因、hemB基因、hemC基因、和hemD基因；并且，所述工程菌的内源的血红素合成基因的表达被下调；较佳地，所述的血红素合成基因包括：hemE基因、hemF基因、hemG基因、和/或hemH基因。2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌的内源基因endA被下调或缺失。3.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的尿卟啉原III基因模块整合在基因组上，较佳地整合于阿拉伯糖诱导的启动子PBAD位点。4.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的hemA基因、hemO基因、hemB基因、hemC基因和hemD基因各自独立地来源于：Rhodobactercapsulatus菌株、Sinorhizobiummeliloti菌株、Rhodopseudomonaspalustri菌株、Brucellamelitensis菌株、Rhodobactersphaeroides菌株、或Brucellamelitensis菌株；优选地，hemA基因来源于Sinorhizobiummeliloti菌株、或R.palustri菌株，hemO基因来源于R.palustri菌株；hemB基因、hemC基因和hemD基因来源于S.meliloti菌株。5.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的基因模块还包括：(b)HB...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大伟，房欢，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12