【技术实现步骤摘要】
一种卵巢癌肿瘤标记物的双模式免疫分析方法
本专利技术属于新型功能材料与生物传感检测
，具体涉及一种卵巢癌肿瘤标记物的双模式免疫分析方法。
技术介绍
光电化学（PEC）检测，是以光作为激发信号，以光电流作为检测信号，通过采用不同形式的能量作为激发信号和检测信号，使激发和检测信号互不干扰，因而背景信号较低，可获得较高的灵敏度。在光电化学传感器的构建过程中，光敏材料的选择对于信号的响应至关重要，目前所用的材料中，TiO2纳米材料因其独特的光催化活性、无毒性，优异的化学和物理稳定性，使其成为光催化和光电化学传感器的理想材料。TiO2介观晶体是晶体亚单元有序排列构成的，相比于传统的TiO2单晶，TiO2介观晶体具有更加优良的太阳能转换和催化性能，能显著提高PEC性能。本实验中使用了TiO2介观晶体中两种不同的晶相（锐钛矿TiO2介观晶体和金红石TiO2介观晶体）并堆叠组成一种混合相的TiO2介观晶体，与单晶相基底相比由于不同晶相间费米能级的差异在紫外光的激发下更容易产生持续的高强度光电流。此外，铜纳米簇具有超微粒径和局域表面共振效应，不仅能提高基底导电性，还能捕获Ti...
【技术保护点】
1.一种卵巢癌肿瘤标记物的双模式免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）氧化铟锡（ITO）电极的预处理：首先将ITO放入超声水浴中清洗，直至清洗干净，然后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）CNHs/Anatase/Rutile/Cu NCs/Ab修饰电极的制备：将0.6mL浓度为3mg/mL 的碳纳米角悬浮液于干净的氧化铟锡（ITO）电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，然后在上述电极表面依次修饰0.6mL浓度为3mg/mL的锐钛矿TiO2介观晶体和0.6mL浓度为3mg/mL的金红石TiO2介观晶体悬浊液，在红外灯下烘干冷却至室温，如此反复三次，即得到CNHs/An...
【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌肿瘤标记物的双模式免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）氧化铟锡（ITO）电极的预处理：首先将ITO放入超声水浴中清洗，直至清洗干净，然后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab修饰电极的制备：将0.6mL浓度为3mg/mL的碳纳米角悬浮液于干净的氧化铟锡（ITO）电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，然后在上述电极表面依次修饰0.6mL浓度为3mg/mL的锐钛矿TiO2介观晶体和0.6mL浓度为3mg/mL的金红石TiO2介观晶体悬浊液，在红外灯下烘干冷却至室温，如此反复三次，即得到CNHs/Anatase/Rutile修饰电极；将巯基苯硼酸溶液与铜纳米簇(CuNCs)溶液反应，得到复合溶液，然后将0.6mL的复合溶液滴涂到修饰过的电极表面，在烘箱里烘干冷却至室温；将修饰好的电极浸泡在含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合溶液中活化50min；最终，将所获得的修饰电极浸泡于18μg/mL的脂解激活脂蛋白受体抗体溶液，在4°C下孵育50min，随后使用pH=7.5浓度为0.3mol/L的PBS溶液去除多余的脂解激活脂蛋白受体抗体Ab，再将电极浸入浓度为1.0wt.%的BSA1h，封闭电极表面上非特异性活性位点，冲去表面残余液后，即得到CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab修饰电极；（3）CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab/Ag修饰电极的制备：将CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab修饰电极浸入不同浓度的脂解激活脂蛋白受体（LSR）标准溶液中于4°C下孵育50min，通过异性识别结合固定在电极表面的抗体；用pH=7.5浓度为0.3mol/L的PBS溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干，得到CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab/Ag修饰电极；（4）脂解激活脂蛋白受体的检测：采用三电极体系进行测定，以CNHs/Anatase/Rutile/CuNCs/Ab/Ag修饰电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，利用光电化学工作站进行检测，设置电压为0.1V，每隔10s进行开关灯，氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤；在pH=7.5浓度为0.3mol/L的PBS溶液中，通过光电化学工作站检测1×10-6ng/mL–10ng/mL之间的一系列不同浓度的脂解激活脂蛋白受体标准溶液，通过记录开关灯前后产生的不同电流信号，绘制工作曲线；待测样品溶液代替脂解激活脂蛋白受体标准溶液进行检测，检测的结果通过工作曲线查得；或者将反应后的电极作为光电阳极在pH=7.5浓度为0.3mol/L的PBS溶液中对0.6wt%的过氧化氢溶液进行光催化电解，电解后的溶液滴入还原态亚甲基蓝修饰的比色凝胶薄膜上，通过色度分析，记录色度变化，同样可以检测脂解激活脂蛋白受体浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的金红石型TiO2介观晶体材料由下述方法制备的：0.5g十二烷基苯磺酸钠（SDBS）溶解在25mL2.2mol/mLHNO3溶液中，搅拌15分钟；然后加入0.5mL异丙醇钛（IV），在80°C下搅拌48h；随后，所得产物经离心、用超纯水、乙醇洗涤4-5次后，在60°C下干燥过夜；上述产物在400°C空气中煅烧1h以去除残留的有机物，制得金红石型TiO2介观晶体。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的锐钛矿型TiO2介观晶体材料由下述方法制备的：首先将1.5mL纯度为97%的钛酸四异丙酯（Ti(OCH(CH3)2)4,、3mL重量百分比浓度为99.9%的醋酸(CH3COOH)和3mL重量百分比浓度为99.9%乙醇(C2H5OH)混合得到TiO2溶胶-凝胶前驱体；接着将上述混合物加入7.5mL含有0.45g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的乙醇溶液中搅拌1h得到浅黄色的溶胶-凝胶体，以2000rmp的转速旋涂到石英基片上在120°C下干燥30min;最后在500°C下煅烧1h去除残留的有机物即可得到锐钛矿型TiO2介观晶体。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铜纳米簇（CuNCs）材料由下述方法制备的：制备前所使用的容器需...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴宏，陈妍洁，张书培，衣欢，宋建榕，郑祥钦，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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