用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA及质粒DNA和体外转录方法技术

本发明专利技术涉及基因工程中的基因编辑技术领域，具体涉及一种用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA及质粒DNA和体外转录方法。该cas9转录模板DNA具有如SEQ ID NO：1所示的碱基序列。本发明专利技术围绕CRISPR/Cas9技术在模式动物果蝇中的应用，提供了一种优化的Cas9的表达载体，显著地提高了基因编辑效率，也为其在其他领域的应用奠定了基础。

Cas9 transcription template DNA, plasmid DNA and in vitro transcription method for Drosophila CRISPR gene

The invention relates to the field of gene editing technology in genetic engineering, in particular to cas9 transcription template DNA and plasmid DNA for Drosophila CRISPR transgene and in vitro transcription method. The cas9 transcription template DNA has a base sequence as shown in SEQ ID NO:1. The invention provides an optimized Cas9 expression vector around the application of CRISPR/Cas9 technology in model animal Drosophila melanogaster, which significantly improves the efficiency of gene editing and lays a foundation for its application in other fields.

【技术实现步骤摘要】
用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA及质粒DNA和体外转录方法
本专利技术涉及基因工程中的基因编辑
，更具体地，涉及一种用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA及质粒DNA与应用和体外转录方法。
技术介绍
传统的转基因技术主要是利用转座的原理，将外源DNA片段随机地整合到生物基因组上，很难做到精确地修改(即基因编辑)。继转基因技术之后出现了ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9技术，都基于核酸内切酶精确地靶向基因组DNA的原理，均能实现对基因组的精确修饰，成为目前主流的三大基因编辑技术。相对于ZFN和TALEN技术，CRISPR/Cas9技术的操作更简单、成本更低廉、效率更高，成为目前基因编辑的首选。CRISPR/Cas9基因编辑技术，是由细菌中行使免疫功能的CRISPR/Cas9系统改造而来。主要通过一段引导RNA(singleguideRNA，sgRNA)，将Cas9核酸内切酶引导到目标片段，并进行切割，再利用生物体自身的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)修复机制实现对基因组的修饰和编辑，包括小片段插入删除(indel)、较大片段DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA，其特征在于，该cas9转录模板DNA具有如SEQ ID NO：1所示的碱基序列。

【技术特征摘要】
1.一种用于果蝇CRISPR转基因的cas9转录模板DNA，其特征在于，该cas9转录模板DNA具有如SEQIDNO：1所示的碱基序列。2.一种用于果蝇CRISPR转基因的质粒DNA，其特征在于，该质粒DNA包括以下元件：cas9转录基因，所述cas9转录基因具有如SEQIDNO：1所示的碱基序列；第一40-nls入核信号，位于所述cas9转录基因起始密码子ATG之后，cas9转录基因之前；第二40-nls入核信号，位于所述cas9转录基因中止密码子之前，cas9转录基因之后；Kozak序列，所述Kozak序列位于所述起始密码子ATG之前；T7启动子；sv40-3UTR，所述sv40-3UTR位于所述终止密码子之后；限制性酶切位点，所述限制性酶切位点位于所述sv40-3UTR之后。3.根据权利要求2所述的用于果蝇CRISPR转基因的质粒DNA，其中，所述限制性酶切位点为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张力，李政，
申请(专利权)人：张力，李政，
类型：发明
国别省市：北京,11