新型免疫刺激肽制造技术

本发明专利技术提供新型免疫刺激肽、肽构建体和组合物。而且，本发明专利技术提供使用该肽、肽构建体和组合物的治疗方法。

New immunostimulatory peptide

The present invention provides novel immunostimulatory peptides, peptide constructs and compositions. Furthermore, the present invention provides a therapeutic method using the peptide, the peptide constructor and the composition.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型免疫刺激肽
本专利技术涉及与免疫应答调节有关的治疗领域。具体地，本专利技术涉及发挥免疫刺激作用的肽以及肽的治疗性应用。
技术介绍
逆转录病毒是一类含有RNA基因组的病毒，其在感染时逆转录成DNA拷贝，再反过来整合到宿主细胞的基因组中。这种感染细胞的所有子代将均含有病毒基因组(称作原病毒)。所有逆转录病毒包括3个基因/编码序列：gag、pol和env。本专利技术主要涉及env基因，其表达产物，具体地，源自ENV蛋白质的肽。人内源性逆转录病毒(HERV)是永久固定在人基因组中的古老的逆转录病毒整合物。对于HERV的大多数病毒组分，已经证实了功能性蛋白质的存在，包括病毒蛋白酶和包膜表面蛋白质的存在。源自HERV的蛋白质已经进化成表现出显著的生理潜力，例如，源自HERV的包膜糖蛋白在胎盘组织中大量表达，并已提出其通过融合下面的细胞滋养层细胞层参与合胞体滋养层的分化。逆转录病毒感染通常可以导致显著的免疫抑制，如从HIV感染所知。另外，一些人内源性逆转录病毒表现出免疫抑制活性。更精确地，包括HERV的若干逆转录病毒的包膜蛋白质(env)显示出具有免疫抑制活性。在本申请人审查中的国际专利申请PCT/DK2016/050316(WO2017/054831)中，公开了若干种源自HERV-HEnv59(也称作是“Env59”)的肽。具体地，阐明这些肽具有免疫抑制性，测试了肽及其变体降低促炎性细胞因子例如IL-6从之前用LPS(脂多糖)刺激的细胞中分泌/表达的能力。专利技术目的本专利技术的实施方式的目的是提供可用于疾病治疗和预防的新型免疫刺激剂。本专利技术实施方式的进一步的目的是提供使用本专利技术的免疫刺激剂的方法和组合物。
技术实现思路
本专利技术人已经发现，PCT/DK2016/050316中考察的源自Env59的肽和肽构建体的子集出人意料地对LPS-刺激的PBMC(外周血单核细胞)和来自LPS-刺激的THP-1细胞(人急性单核细胞白血病细胞系的细胞)发挥免疫刺激作用。这一发现开启了提供能用作免疫佐剂、一般免疫刺激物、疫苗佐剂或用于包括效应器分子的免疫治疗方案或者在癌症免疫治疗方案中用作佐剂的新型免疫刺激剂的可能性。因此，在第一方面，本专利技术涉及一种肽，其包括氨基酸序列LQNRRGLGLSILLNEEC(SEQIDNO:1)的序列变体或者由其组成，其中与SEQIDNO:1相比，上述序列变体包括至少一处氨基酸变化，并且其中肽在以有效的浓度提供给用脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞或PBMC时，刺激细胞因子的分泌和/或表达。在又一方面，本专利技术提供一种肽构建体，其包括本专利技术的肽和至少一种另外的肽，其中肽和至少一种另外的肽经由肽构建体中肽的至少一种中的侧链彼此融合或共价连接，其中所述另外的肽选自：-与根据本专利技术的肽相同的肽，-与根据本专利技术的肽不同的肽，-本专利技术的肽的至少4个连续氨基酸残基的片段，和-序列(GP)n，其中n是正整数，优选地，选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在第三方面，本专利技术涉及一种缀合物分子，其包括本专利技术的肽或肽构建体，其中所述肽或肽构建体与异源性分子例如异源性肽或多肽、脂质或碳水化合物缀合。在第四方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包括本专利技术的肽、肽构建体或缀合物，其中所述组合物还包括药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在涉及治疗和/或预防的又一方面，本专利技术涉及用于各种医学用途的本专利技术的肽、肽构建体、缀合物分子和药物组合物。这些方面还包括使用本专利技术的肽、肽构建体、缀合物分子和药物组合物的治疗和预防方法。再又一方面涉及编码肽、肽构建体、缀合物分子(相关的情形中)的核酸，以及包括这些核酸的组合物，和核酸本身以类似于本专利技术使用肽、肽构建体和缀合物分子的用途和方法的方式用于治疗和预防的用途。最后，本专利技术一方面还涉及靶向免疫原的抗体的制备方法，其中本专利技术的各种药剂用于提高针对免疫原的免疫应答。附图说明图1：肽构建体诱导的对于IL-6蛋白质分泌的表达/分泌水平的免疫调节功能。SG#23(图1A)，SG#24(图1B)，SG#27(图1C)，SG#28(图1D)，SG#4(图1E)和SG#22(图1F)。图2：用各种组合物免疫的小鼠中抗-卵清蛋白IgG1的水平pg/ml。图3：肽构建体诱导的对于TNF-α蛋白质分泌的表达/分泌水平的免疫调节功能。SG#4(图3A)，SG#22(图3B)，SG#23(图3C)，SG#24(图3D)，和SG#28(图3E)。图4：肽构建体诱导的对于IL-1β蛋白质分泌的表达/分泌水平的免疫调节功能。SG#4(图4A)，SG#22(图4B)，SG#23(图4C)，SG#24(图4D)，和SG#28(图4E)。具体实施方式定义在本文中通过序列编号指代以下特定的肽/肽构建体：#)来自Env59的野生型参考序列*)制备成SEQIDNO的肽的二聚体的肽，参见下文**)制备成SEQIDNO的肽的二聚体的肽，和C-末端酰胺化的肽，参见下文##)本专利技术某些肽的通式如本文所用，表述“二聚体”通常涉及2个本专利技术的肽之间的端对端融合肽，或者涉及任何形式的共价连接的两个肽的二聚体，其中连接涉及2个肽中的至少一个中的侧链。因此，二聚体可以是“同二聚体”，其由两个相同的本专利技术的肽组成，如SEQIDNO:2的二聚体和SEQIDNO:3的二聚体的情形；这些二聚体根据本专利技术优选地经由二硫键桥接(即，由两个单体的半胱氨酸形成的胱氨酸基团)二聚化，如对于本专利技术以下优选二聚体所示：SG#4：SG#8：SG#23：SG#24：SG#27：SG#28：另外，二聚体可以是异二聚体，即，如上所述的二聚构建体，但由两个不同的本专利技术的肽组成，上述肽端对端融合，或者经由涉及异二聚体的肽中至少一个中的侧链的接头(linker)连接。当单体含有Cys残基时，二聚体、三聚体和多聚体的共价连接通常经由二硫键桥接，但根据本专利技术可提供另外可选者：例如，接头通常选自甘氨酸接头、赖氨酸接头、甘氨酸-赖氨酸接头、半胱氨酸-赖氨酸接头(通常以一个肽中的源自(2-氧代-乙基)的半胱氨酸和另一肽中的赖氨酸之间的酰胺键的形式建立)、Arg接头和双马来酰亚胺接头，但可以使用本领域已知的用于肽链共价偶联的任何接头。在不存在半胱氨酸时，由此通常本专利技术的肽意在用作免疫刺激单体，或者另外可选地用作经由半胱氨酸巯基以外的其它官能团连接的二聚体、三聚体和多聚体。二聚体以外的其它多聚体均为本专利技术的实施方式，这些多聚体可以是三聚体或其它多聚体，例如均三聚体或均多聚体，但也可以是异三聚体或异多聚体。在本专利技术的上下文中，“肽”是通过氨基酸残基连接的肽链组成的分子。在本专利技术的上下文中，“肽构建体”是包括两个或多个本专利技术的肽的分子或复合物。这些可以端对端连接(即融合)，但优选地，肽构建体经由例如二硫键接头的接头偶联，具体参见下文。在本专利技术的上下文中，“缀合物分子”是还与另一异源性分子偶联的本专利技术的肽或肽构建体。关于这些其它分子的细节参见下文。在本专利技术的肽构建体的上下文中，当使用术语“未修饰”时，在本文中是指所讨论的肽是单体的，并仅由通过肽键连接的天然氨基酸残基构成；换言之，未修饰的肽(例如SG#13和SG#22)不包括任何N-末端或C-末端修饰，并且其不与其它的肽或化学实体连接。本专利技术具体实施方式本专利技术第本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽，其包括氨基酸序列LQNRRGLGLSILLNEEC(SEQ ID NO:1)的序列变体或者由其组成，其中与SEQ ID NO:1相比，所述序列变体包括至少一处氨基酸变化，并且其中所述肽在以有效的浓度提供给用脂多糖(LPS)刺激的THP‑1细胞或PBMC时，刺激细胞因子的分泌和/或表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.23 DK PA201670634;2016.09.30 DK PCT/DK20161.一种肽，其包括氨基酸序列LQNRRGLGLSILLNEEC(SEQIDNO:1)的序列变体或者由其组成，其中与SEQIDNO:1相比，所述序列变体包括至少一处氨基酸变化，并且其中所述肽在以有效的浓度提供给用脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞或PBMC时，刺激细胞因子的分泌和/或表达。2.根据权利要求1所述的肽，其中C-末端羧基是修饰的，优选通过酰胺化修饰。3.根据权利要求1或2所述的肽，其中在中性pH下，与具有氨基酸序列SEQIDNO:1的肽的净电荷相比，所述肽的净电荷增加。4.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其中所述氨基酸变化独立地选自置换、缺失和插入。5.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其中所述序列变体在SEQIDNO:1的15-17位包括1、2或3处氨基酸变化。6.根据权利要求5所述的肽，其中所述氨基酸变化是残基15-17中的一个或多个的缺失，比如残基15和16中的一个或两个的缺失或者残基17的缺失。7.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其中所述序列变体在SEQIDNO:1的4位包括氨基酸变化。8.根据权利要求7所述的肽，其中4位的所述氨基酸变化是置换。9.根据权利要求8所述的肽，其中4位的所述氨基酸变化是用氨基酸残基置换，所述氨基酸残基选自使所述肽在中性pH下的电荷与SEQIDNO:1相比增加的氨基酸。10.根据权利要求9所述的肽，其中SEQIDNO:1中的4位用赖氨酸残基置换。11.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其中所述序列变体在SEQIDNO:1的5位包括氨基酸变化。12.根据权利要求11所述的肽，其中5位的所述氨基酸变化是置换。13.根据权利要求12所述的肽，其中5位的所述氨基酸变化是用氨基酸残基置换，所述氨基酸残基选自使所述肽在中性pH下的电荷与SEQIDNO:1相比增加的氨基酸。14.根据权利要求13所述的肽，其中SEQIDNO:1中的5位用赖氨酸残基置换。15.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其具有式IZ1Z2Z3X1X2Z4Z5GLSILLNX3X4X5(I)(SEQIDNO:8)其中Z1是L，或者不存在，Z2是Q，或者不存在，Z3是N，或者不存在，Z4是G，或者不存在，Z5是L，或者不存在，X1是R或K，或者不存在，X2是R或K，或者不存在，X3是E，或者不存在，X4是E，或者不存在，并且X5是C，或者不存在，其条件是，式I不具有氨基酸序列SEQIDNO:1。16.根据权利要求15所述的肽，其中-如果存在Z1，则Z2-Z5、X1和X2均存在；-如果存在Z2，则Z3-Z5、X1和X2均存在；-如果存在Z3，则Z4和Z5、X1和X2均存在；-如果存在Z4，则Z5、X1和X2均存在；-如果存在X1，则X2存在。17.根据权利要求16所述的肽，其中-Z1不存在，或者-Z2不存在，或者-Z3不存在，或者-Z4不存在，或者-Z5不存在，或者-X1不存在，或者-X2不存在。18.根据权利要求16或17所述的肽，其中-存在Z1，或者-存在Z2，或者-存在Z3，或者-存在Z4，或者-存在Z5，或者-存在X1，或者-存在X2。19.根据权利要求15-18中任一项所述的肽，其中-X3、X4和X5均存在，或者-仅存在X3和X4中的一个，并且存在X5，或者-仅存在X5，或者-X3-X5中无一存在。20.根据前述权利要求中任一项所述的肽，其具有SEQIDNO:2-7和9中任一个所示的氨基酸序列。21.一种肽构建体，其包括根据前述权利要求中任一项所述的肽和至少一种另外的肽，其中所述肽和所述至少一种另外的肽经由所述肽构建体中肽的至少一种中的侧链彼此融合或共价连接，其中所述另外的肽选自：-与根据前述权利要求中任一项所述的肽相同的肽，-与根据前述权利要求中任一项所述的肽不同的肽，-根据前述权利要求中任一项所述的肽的至少4个连续氨基酸残基的片段，和-序列(GP)n，其中n是>0的整数，优选地，选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。22.根据权利要求21所述的肽构建体，其为多聚体的形式，例如，根据权利要求1-20中任一项所述的肽的同二聚体或异二聚体。23.根据权利要求21或22所述的肽构建体，其中所述肽和所述至少一种另外的肽经由所述肽构建体中肽的至少一种中的侧链共价连接，其中所述连接选自二硫键桥接、甘氨酸接头、赖氨酸接头、甘氨酸-赖氨酸接头、半胱氨酸-赖氨酸接头、Arg接头和双马来酰亚胺接头。24.一种缀合物分子，其包括根据权利要求1-20中任一项所述的肽或者根据权利要求21-23中任一项所述的肽构建体，其中所述肽或肽构建体与异源性分子例如异源性肽或多肽、脂质或碳水化合物缀合。25.根据权利要求24所述的缀合物分子，其中所述异源性分子选自激素或其活性片段、细胞因子或其活性片段、免疫原性蛋白质或肽、免疫载体、免疫治疗药物、癌症化疗药物、趋化剂、抗体或其特异性结合片段、受体的配体、受体或其配体结合片段和TCR-结合肽。26.根据权利要求24或25所述的缀合物分子，其中所述肽或肽构建体经由N-或C-末端(多)肽融合、经由接头或者通过化学缀合方式与所述异源性肽或多肽缀合。27.根据权利要求26所述的缀合物分子，其中所述接头如权利要求23中所定义，和/或其中所述化学缀合是使用交联剂例如甲醛或戊二醛的缀合。28.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-20中任一项所述的肽、根据权利要求21-23中任一项所述的肽构建体或者根据权利要求24-27中任一项所述的缀合物分子，其中所述组合物还包括药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。29.根据权利要求28所述的药物组合物，其额外地包括选自免疫原、抗原、抗体、抗体片段、抗体类似物、单克隆抗体、化疗剂、免疫刺激化合物、激素和免疫检查点抑制剂的活性成分。30.根据权利要求1-20中任一项所述的肽、根据权利要求21-23中任一项所述的肽构建体、根据权利要求24-27中任一项所述的缀合物分子或者根据权利要求28-29中任一项所述的药物组合物，其用作药物的用途。31.用于根据权利要求30所述的用途的肽、肽构建体、缀合物分子或药物组合物，其中所述用途是用于在受试者中提高、刺激或引起针对免疫原的特异性适应性免疫应答的预防性或治疗性治疗方法，其中所述方法包括将预防性或治疗性活性量的所述肽、肽构建体、缀合物分子或药物组合物和所述免疫原联合施用于对所述预防性或治疗性治疗有需求的受试者。32.用于根据权利要求31所述的用途的肽、肽构建体、缀合物分子或药物组合物，其中所述肽、肽构建体、缀合物分子充当免疫佐剂，优选地充当疫苗中的免疫佐剂。33.用于根据权利要求30所述的用途的肽、肽构建体、缀合物分子或药物组合物，其中所述用途是受试者中癌症的化疗或免疫疗法治疗，其中方法包括将治疗性有效量的所述肽、肽构建体、缀合物分子或药物组合物与化疗剂和/或免疫治疗剂联合施用于对所述预...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·巴赫拉米，
申请(专利权)人：爱姆维恩公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK