一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，包括56条扩增引物。本发明专利技术可提高基因多态性，用于法医学亲权鉴定及个人识别。

A multiplex amplification kit for simultaneous detection of 32 Y chromosome loci

The invention discloses a compound amplification kit for simultaneously detecting 32 chromosome loci, which is characterized by 56 amplification primers. The invention can improve gene polymorphism and be used for forensic paternity identification and personal identification.

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒
本专利技术属于法医DNA鉴定领域，尤其涉及一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒。
技术介绍
短串联重复序列(shorttandemrepeats，STR)，也称微卫星DNA(microsatelliteDNA)，是由2～6个碱基作为核心基序，串联重复形成的一类DNA序列，广泛分布于人类基因组中，具有多态性高、信息量大以及易于检测等优点。自上世纪90年代发现以来，现已广泛应用于法医DNA鉴定、物种鉴别和遗传病诊断等领域。Y染色体STR遗传标记是指存在于Y染色体特异区的短串联重复序列。在减数分裂时，Y染色体特异区不与X染色体进行重组交换，所以Y染色体STR遗传标记具有男性特有、父系单倍型遗传等特点。目前，在法医领域，Y染色体STR遗传标记主要应用于家系排查和辅助个体识别。而满足上述应用的前提，则需要YSTR试剂盒具有足够高的整体多态性。而增加YSTR试剂盒位点数，是提高YSTR试剂盒的整体多态性，增加累计非父排除率和个体识别能力的有效途径。但是在现有技术条件下，YSTR试剂盒位点数的增加，具有一定的局限性。因此，当前市场上，主流的YSTR建库试剂盒均是以公安部发布的20个核心YSTR基因座为基础，然后再从公安部发布的优选和备选基因座中，选择10到20个基因座进行优化组合。此外，随着市场上差异化需求的不断增长，用户对于试剂盒包含的基因座数量、兼容性等提出了更高的要求。
技术实现思路
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒。本专利技术中的基因座是具有高多态性的基因座，其在实际应用过程中，不仅可用于家系排查，也可用于对主流建库试剂盒的功能进行补充，以满足客户的差异化需求。本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒，其中，包括56条扩增引物，分别依次为：SEQIDNO:1～2、SEQIDNO:3～4、SEQIDNO:5～6、SEQIDNO:7～8、SEQIDNO:9～10、SEQIDNO:11～12、SEQIDNO:13～14、SEQIDNO:15～16、SEQIDNO:17～18、SEQIDNO:19～20、SEQIDNO:21～22、SEQIDNO:23～24、SEQIDNO:25～26、SEQIDNO:27～28、SEQIDNO:29～30、SEQIDNO:31～32、SEQIDNO:33～34、SEQIDNO:35～36、SEQIDNO:37～38、SEQIDNO:39～40、SEQIDNO:41～42、SEQIDNO:43～44、SEQIDNO:45～46、SEQIDNO:47～48、SEQIDNO:49～51、SEQIDNO:52～53、SEQIDNO:54～56。在一些实施例中，所述56条扩增引物对应的Y染色体基因座依次分别为：DYS531、DYS630、DYS622、DYS510、DYS533、DYF404S1a/b、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS388、DYS587、DYS522、DYS626、Yindel、DYS460、Y_GATA_A10、DYS520、DYS557、DYS527a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS385a/b、DYS552、DYS526a/b、DYS617和DYS713，其中，所述DYF404S1a/b、所述DYS527a/b、所述DYS385a/b和所述DYS526a/b为双等位基因基因座。在一些实施例中，所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度为0.027μM～0.82μM。在一些实施例中，所述Y染色体基因座所对应的引物对在扩增体系中的终浓度依次分别为DYS531：0.52μM、DYS630：0.08μM、DYS622：0.82μM、DYS522：0.02μM、DYS460：0.78μM、Y_GATA_A10：0.06μM、DYS520：0.8μM、DYS481：0.41μM、DYS444：0.76μM、DYS552：0.24μM、DYS526a/b：0.3μM、和DYS510：0.124μM、DYS533：0.021μM、DYF404S1a/b：0.144μM、DYS459a/b：0.7μM、DYS446：0.09μM、DYS443：0.027μM、DYS388：0.53μM、DYS557：0.071μM、DYS587：0.184μM、DYS626：0.41μM、DYS527a/b：0.051μM、DYS508：0.14μM、DYS385a/b：0.17μM、DYS617：0.15μM、DYS713：0.45μM和Yindel：0.5μM。在一些实施例中，所述每个基因座中的至少一条引物的5’端标记有荧光染料。在一些实施例中，所述荧光染料包括6-FAM、HEX、SUM、LYN、PUR、和/或SIZ。在一些实施例中，所述每个Y染色体基因座对应的扩增引物的长度为90-480bp。一种根据上述所述的试剂盒的应用，其中，所述试剂盒用于亲权鉴定、个体识别。与现有技术相比，本专利技术提供的一种同时检测32个Y染色体基因座的复合扩增试剂盒，达到的技术效果是：本专利技术通过提供市场上未被广泛使用的新Y染色体基因座位点，如DYF404S1a/b、DYS626、DYS508、DYS713、DYS617、DYS526a/b等，与市场上主流建库试剂盒，如PathFinder、YfilerPlatinum、DNATyperTMY36、AGCUFSY37联用，可检测多达60个YSTR基因座，以提高YSTR试剂盒的整体多态性，和增加累计非父排除率和个体的识别能力，满足用户对Y染色体基因座的数量和高多态性的要求。附图说明图1是根据本申请一些实施例所示的基因座的排布示意图；图2是根据本申请一些实施例所示的等位基因Ladder分型图；图3是根据本申请一些实施例所示的标准DNA9948的分型图；图4是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对棉签提取样本的分型图；图5是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对FTA血卡样本的分型图；图6是根据本申请一些实施例所示的试剂盒对唾液卡样本的分型图。以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使技术方案更易于理解、掌握。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行说明，但本专利技术并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得，下面实施例并非用以限制本专利技术的专利范围，凡未脱离本专利技术所为的等效实施或变更，均应包含于本专利保护范围中。实施例132个Y染色体基因座的筛选在一些实施例中，Y染色体基因座可以基于现有文献等记载进行获取，并对其进行筛选。在一些实施例中，可以基于获取的Y染色体基因座的多态性进行调查，筛选出高多态性基因座。其中，高多态性基因座可以包括低突变的高多态性基因座，或高突变的高多态性基因座等。在一些实施例中，低突变的高多态性基因座可以指突变率低于1％，多态性高于0.6的基因座为低突变的高多态性基因座(如表1)；高突变的高多态性的基因座可以指突变率高于1％，多态性高于0.6的基因座为高突变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，包括56条扩增引物，分别依次为：SEQ ID NO:1～2、SEQ ID NO:3～4、SEQ ID NO:5～6、SEQ ID NO:7～8、SEQ ID NO:9～10、SEQ ID NO:11～12、SEQ ID NO:13～14、SEQ ID NO:15～16、SEQ ID NO:17～18、SEQ ID NO:19～20、SEQ ID NO:21～22、SEQ ID NO:23～24、SEQ ID NO:25～26、SEQ ID NO:27～28、SEQ ID NO:29～30、SEQ ID NO:31～32、SEQ ID NO:33～34、SEQ ID NO:35～36、SEQ ID NO:37～38、SEQ ID NO:39～40、SEQ ID NO:41～42、SEQ ID NO:43～44、SEQ ID NO:45～46、SEQ ID NO:47～48、SEQ ID NO:49～51、SEQ ID NO:52～53、SEQ ID NO:54～56。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测32个染色体基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，包括56条扩增引物，分别依次为：SEQIDNO:1～2、SEQIDNO:3～4、SEQIDNO:5～6、SEQIDNO:7～8、SEQIDNO:9～10、SEQIDNO:11～12、SEQIDNO:13～14、SEQIDNO:15～16、SEQIDNO:17～18、SEQIDNO:19～20、SEQIDNO:21～22、SEQIDNO:23～24、SEQIDNO:25～26、SEQIDNO:27～28、SEQIDNO:29～30、SEQIDNO:31～32、SEQIDNO:33～34、SEQIDNO:35～36、SEQIDNO:37～38、SEQIDNO:39～40、SEQIDNO:41～42、SEQIDNO:43～44、SEQIDNO:45～46、SEQIDNO:47～48、SEQIDNO:49～51、SEQIDNO:52～53、SEQIDNO:54～56。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述56条扩增引物对应的Y染色体基因座依次分别为：DYS531、DYS630、DYS622、DYS510、DYS533、DYF404S1a/b、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS388、DYS587、DYS522、DYS626、Yindel、DYS460、Y_GATA_A10、DYS520、DYS557、DYS527a/b、DYS481、DYS508、DYS444、DYS385a/b、DYS552、DYS526a/b、DYS617和DYS713，其中，所述DYF404S1a/b、所述DYS527a/b、所述DYS385a/b和所述DYS526a/b为双等位基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭卓明，王霖，何伟英，洪强，何小用，梅兴林，郭育林，夏子芳，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡市公安局刑事科学技术研究所，无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32