检测环指蛋白32表达水平的试剂的应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及检测RNF32表达水平的试剂的应用和试剂盒。更具体地，涉及检测RNF32表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的试剂盒。临床样本检测结果显示，结直肠癌中RNF32表达较癌旁组织显著升高(P

Application and Kit of Reagent for Detecting the Expression Level of Cyclic Finger Protein 32

The invention belongs to the field of biotechnology, and relates to the application of reagents and kits for detecting the expression level of RNF32. More specifically, the application of reagents for detecting RNF32 expression levels in the preparation of preparations for assistant diagnosis and/or prognostic judgement of patients with colorectal cancer and a kit for assistant diagnosis and/or prognostic judgement of patients with colorectal cancer. The results of clinical samples showed that the expression of RNF32 in colorectal cancer was significantly higher than that in adjacent tissues (P

【技术实现步骤摘要】
检测环指蛋白32表达水平的试剂的应用和试剂盒
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及检测环指蛋白32(RNF32)表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的试剂盒。
技术介绍
最新的统计数据显示，癌症死亡占我国居民全部死因的23.91％，俨然已成为人类健康路上最凶猛的拦路虎之一。2019年1月末，国家癌症中心在《中华肿瘤杂志》发布了最新完成的中国恶性肿瘤流行情况报告，分析了2015年我国最新癌症情况(全国肿瘤登记中心的数据通常滞后3年，故本次报告发布数据为2015年登记资料)。据报告估计，2015年全国癌症发病约392.9万例，发病率为285.83/10万，全年死亡约233.8万人，死亡率为170.05/10万。这也意味着平均每分钟有7.5人被诊断为癌症，有4.4人因癌症死亡。近10多年来，我国癌症发病、死亡数持续上升，癌症发病率每年平均增长约3.9％，死亡率每年平均增长2.5％。结直肠癌是目前最常见的消化道肿瘤之一。最新恶性肿瘤流行病学数据发现，结直肠癌发病率在男性和女性中分别排名第4位及第3位，死亡率为第5位及第4位，城镇居民发病率更高。而在全球范围内，结直肠癌与肺癌发病率并列第一，严重威胁人类健康。结直肠癌的发病有年轻化趋势，且由于缺乏早期诊断与高效的筛查方法，大多数患者确诊时已发展至晚期或局部晚期，预后较差。随着各种医疗技术的不断发展以及化疗药物、靶向药物的研制，对结直肠癌患者的临床治疗效果有了较大的改善，但从远期生存率来看，大多数患者的生存率并没有得到提高。随着多组学高通量数据的快速增加，一些分子生物学标志物被发现在结直肠癌中表达异常并与预后相关，这使得更准确、有效地诊疗结直肠癌成为可能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的结直肠癌预后标志物RNF32，由此进一步提供检测RNF32表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的试剂盒。环指蛋白32(RingFingerProtein32,RNF32)，又名FKSG33、HSD15和LMBR2，定位于7q36.3，包含18个外显子，GeneID:140545，其编码蛋白质定位于内体、细胞核和细胞质。目前，有关RNF32基因在结直肠癌发生发展中的作用未见报道。本专利技术的专利技术人通过癌症和肿瘤基因图谱(CancerGenomeAtlas，TCGA)高通量数据挖掘发现RNF32高表达不利于结直肠癌患者预后，并通过收集临床结直肠癌患者样本和随访信息，进一步验证RNF32表达差异对结直肠癌患者的预后作用。为了实现上述目的，本专利技术的第一方面提供检测环指蛋白32(RNF32)表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用。进一步地，所述检测RNF32表达水平包括检测RNF32的基因表达水平和/或检测RNF32的蛋白表达水平。更具体地，所述检测RNF32表达水平的方法包括：通过RT-qPCR方法检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32的表达量；通过分子探针技术检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32mRNA表达量；通过免疫组化或Western-Blot检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32蛋白表达量。更具体地，所述检测RNF32表达水平的试剂为靶向RNF32编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向RNF32的抗体。根据本专利技术，优选地，所述检测RNF32表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示核苷酸序列的实时荧光定量PCR特异性引物。5’-CCACCACCTCCACTGTCATC-3’，SEQIDNO：1；5’-CATGGGAGCATGAAAGCAGC-3’，SEQIDNO：2。本专利技术的第二方面提供一种用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的试剂盒，该试剂盒包括：检测RNF32表达水平的试剂。进一步地，所述检测RNF32表达水平的试剂为靶向RNF32编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向RNF32的抗体。具体地，所述检测RNF32表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示核苷酸序列的实时荧光定量PCR特异性引物。根据本专利技术，所述试剂盒还可以含有其他常规的用于实时荧光定量的试剂，优选地，所述试剂盒还包括以下组分中的至少一种：Trizol、异丙醇、氯仿、无水乙醇、无RNA酶水、随机引物、5×M-MLV缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、M-MLV逆转录酶、具有SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示核苷酸序列的ACTB实时荧光定量PCR特异性引物。5’-CAATGAGCTGCGTGTGGCT-3’，SEQIDNO：3；5’-GGATAGCACAGCCTGGATAGCAA-3’，SEQIDNO：4。临床样本检测结果显示，结直肠癌中RNF32表达较癌旁组织显著升高(P<0.001)；且RNF32高表达不利于结直肠癌患者总体生存(P＝0.0205)。因此，检测该基因表达变化的试剂可用于结直肠癌预后或者诊断、治疗。本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。附图说明通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。图1示出了TCGA高通量数据分析结直肠癌中RNF32的表达。结直肠癌组织中RNF32表达显著高于正常组织(P<0.001)。图2A-2C示出了TCGA高通量数据分析RNF32高表达对结直肠癌患者生存的影响。结直肠癌患者中RNF32高表达比例为12％(图2A)；RNF32高表达不利于结直肠癌患者总体生存(P<0.001)(图2B)；RNF32高表达不利于患者无病生存(P＝0.0011)(图2C)。图2B和2C中，上方线为非高表达，下方线为高表达。图3示出了结直肠癌组织中RNF32的表达。结直肠癌组织中RNF32表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。图4示出了结直肠癌组织中RNF32高表达对结直肠癌患者生存的影响。RNF32高表达不利于结直肠癌患者总体生存(P＝0.0205)。其中，上方线为低表达组，下方线为高表达组。具体实施方式下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体条件者，皆按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例用于说明TCGA高通量数据分析结直肠癌中RNF32的表达变化。1.TCGA高通量数据分析过程：登录TCGA门户网站UALCAN(http://ualcan.path.uab.edu/index.html)首页，点击“Analysis”，输入基因名称“RNF32”，选择TCGAdataset“Colonadenocarcinoma”，检索，点击“Expression”，记录结果。利用GraphPad12.0软件作图，统计方法为T检验，P＜0.05为差异有统计学意义。2.结果：结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测环指蛋白32(RNF32)表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测环指蛋白32(RNF32)表达水平的试剂在制备用于结直肠癌辅助诊断和/或结直肠癌患者预后判断的制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测RNF32表达水平包括检测RNF32的基因表达水平和/或检测RNF32的蛋白表达水平。3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测RNF32表达水平的方法包括：通过RT-qPCR方法检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32的表达量；通过分子探针技术检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32mRNA表达量；通过免疫组化或Western-Blot检测结直肠癌和癌旁组织中RNF32蛋白表达量。4.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测RNF32表达水平的试剂为靶向RNF32编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向RNF32的抗体。5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述检测RNF32表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡明，陈刚，韩宇鹏，
申请(专利权)人：佳木斯大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23