This application discloses a detection method and reagent for a genetically modified maize strain DAS40278 9. The method for detection of this application includes adding specific primers and probes of exogenous gene and HMG gene of maize strain DAS40278 9 simultaneously in the PCR reaction system, adding mineral oil, mixing them into micro-droplets, double ddPCR in micro-droplets, reading amplified signals of each micro-droplet after reaction, and calculating the number of copies of exogenous gene and HMG of the strain; among them, exogenous gene and HMG base of the strain; The probes were labeled with FAM and HEX respectively. In this application, we designed a pair of endogenous gene HMG and strain-specific primer probes to quantify the copies of the two genes in maize genome by two-channel method, and calculated the absolute content of the transgenic maize strain DAS40278 9, which is of great significance for the research of maize genetically modified ingredients and the accurate quantitative detection of the genetically modified ingredients of import and export maize products.
【技术实现步骤摘要】
转基因玉米品系DAS40278-9检测方法和试剂
本申请涉及转基因玉米检测领域,特别是涉及一种转基因玉米品系DAS40278-9检测方法和试剂。
技术介绍
随着生物技术产业的迅速发展,全球转基因作物的研发速度和种植面积持续增加。推进转基因技术已经成为了着眼于未来的发展战略和解决粮食短缺、确保国家粮食安全的必然选择。但是转基因生物安全问题也随之成为世界关注的热点。目前世界各国出于经济、卫生、环保等各种目的纷纷对转基因生物及其产品加强管理和检测。包括中国在内的50个左右国家和地区相继颁布并实行了“转基因标识制度”,对转基因生物及其加工产品进行标识和管理。近年来,随着各国有关GMO(GeneticallyModifiedorganism)标签法的建立和不断完善,对食品中的GMO含量下限已有所规定。很多国家不但要求对转基因食品进行定性检测,还需要对食品中的GMO含量进行定量检测,以便标识。其标识的阈值一般在0.9%–5%之间(EuropeanCommission,2003;Notification,2000)。建立转基因产品的检测技术标准尤其是精准定量检测技术是实施转基因产品标识的技术前提。因此,转基因成分的精准定量技术将随着全世界标识制度的完善和发展日趋重要。现阶段应用最广的定量检测方法是实时荧光PCR(qPCR),但稳定性、准确性差,所以需要更加精准的检测方法进行替代。数字PCR(dPCR)是在荧光PCR基础上发展起来的基因定量技术,用于核酸的绝对拷贝数检测。dPCR通过将常规的荧光PCR反应体系等量均分为相互隔离的大数量微反应体系,通常等量均分为10000个 ...
【技术保护点】
1.一种转基因玉米品系DAS40278‑9的检测方法,其特征在于:包括以下步骤,PCR扩增体系配制步骤,包括将品系DAS40278‑9特异引物组、品系DAS40278‑9特异探针、HMG基因特异引物组、HMG基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中,制成双重PCR反应体系;微滴生成步骤,包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油,混匀后,将其转移到微滴生成仪上,震荡生成微滴;PCR反应和微滴分析步骤,包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应,PCR反应结束后,采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号;定量检测步骤,根据读取的扩增信号,采用软件分析品系DAS40278‑9的特异扩增拷贝数占内源参考基因HMG基因特异扩增拷贝数的百分比,以此表示转基因玉米品系DAS40278‑9的含量;所述品系DAS40278‑9特异引物组的正向引物为Seq ID No.1所示序列,品系DAS40278‑9特异引物组的反向引物为Seq ID No.2所示序列,所述品系DAS40278‑9特异探针为Seq ID No.3所示序列,所述HMG基因特异引物组的正向引物为Seq ID No.4所示序列,HMG基因 ...
【技术特征摘要】
1.一种转基因玉米品系DAS40278-9的检测方法,其特征在于:包括以下步骤,PCR扩增体系配制步骤,包括将品系DAS40278-9特异引物组、品系DAS40278-9特异探针、HMG基因特异引物组、HMG基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中,制成双重PCR反应体系;微滴生成步骤,包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油,混匀后,将其转移到微滴生成仪上,震荡生成微滴;PCR反应和微滴分析步骤,包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应,PCR反应结束后,采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号;定量检测步骤,根据读取的扩增信号,采用软件分析品系DAS40278-9的特异扩增拷贝数占内源参考基因HMG基因特异扩增拷贝数的百分比,以此表示转基因玉米品系DAS40278-9的含量;所述品系DAS40278-9特异引物组的正向引物为SeqIDNo.1所示序列,品系DAS40278-9特异引物组的反向引物为SeqIDNo.2所示序列,所述品系DAS40278-9特异探针为SeqIDNo.3所示序列,所述HMG基因特异引物组的正向引物为SeqIDNo.4所示序列,HMG基因特异引物组的反向引物为SeqIDNo.5所示序列,所述HMG基因特异探针为SeqIDNo.6所示序列;SeqIDNo.1:5’-CACGAACCATTGAGTTACAATC-3’SeqIDNo.2:5’-TGGTTCATTGTATTCTGGCTTTG-3’SeqIDNo.3:5’-CGTAGCTAACCTTCATTGTATTCCG-3’SeqIDNo.4:5’-TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA-3’SeqIDNo.5:5’-GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT-3’SeqIDNo.6:5’-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-3’其中,SeqIDNo...
【专利技术属性】
技术研发人员:潘广,凌杏园,章桂明,刘新娇,向才玉,卢小雨,李芳荣,杨帆,
申请(专利权)人:深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心,
类型:发明
国别省市:广东,44
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