用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10‑D1的分子标记及其应用。本发明专利技术提供了特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列5所示；引物1182a如序列8所示。本发明专利技术提供了特异引物组，除特异引物对中的两条引物，还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的一条或多条；引物122s如序列1所示；引物339s如序列2所示；引物380s如序列3所示；引物652s如序列4所示；引物409a如序列6所示；引物703a如序列7所示；引物1419a如序列9所示。本发明专利技术有助于小麦抗穗发芽分子育种。

Molecular Markers for Detecting Tamyb10-D1 Gene of Ear Germination Resistance in Wheat and Their Application

The present invention discloses a molecular marker for detecting wheat spike germination resistance gene Tamyb10_D1 and its application. The invention provides a pair of specific primers, consisting of primers 872s and 1182a; primers 872s are shown in sequence 5; and primers 1182a are shown in sequence 8. The invention provides a specific primer group, which includes one or more of the primers 122 s, 339s, 380s, 652s, 409a, 703a and 1419a in addition to two pairs of primers in the specific primer pair; 122s is shown in sequence 1; 339s is shown in sequence 2; 380s is shown in sequence 3; 652s is shown in sequence 4; 409a is shown in sequence 6; 03A is shown in Sequence 7; Primer 1419a is shown in Sequence 9. The present invention is helpful for molecular breeding of wheat resistance to spike germination.

【技术实现步骤摘要】
用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用
本专利技术属于生物
，具涉及用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用。
技术介绍
近年来随着极端气候的频繁发生，小麦穗发芽发生现象呈扩大递增趋势，是影响小麦安全稳产的重要因素之一。利用分子标记辅助育种技术可加速穗发芽抗性小麦品种育成进程，积极应对穗发芽灾害发生。Tamyb10-D1基因被定位于小麦3DL染色体，被证实与小麦穗发芽抗性相关。开发的适宜的分子标记，从而区分穗发芽抗性基因型Tamyb10-D1b和穗发芽感性基因型Tamyb10-D1a，具有重要的价值。当基因型为Tamyb10-D1b时，可获得目标条带，当基因型为Tamyb10-D1a纯合型时，为序列缺失，无扩增产物。Himi等设计Tamyb10-D1分子标记为上游引物Tamyb10-LP9和下游引物Tamyb10-RP3，该标记扩增效果较好，但扩增产物大，对DNA模版质量要求较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1的分子标记及其应用。本专利技术提供了特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。本专利技术还提供了特异引物组，包括引物872s和引物1182a；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。所述特异引物组还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的任意一条或多条；引物122s如序列表的序列1所示；引物339s如序列表的序列2所示；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物409a如序列表的序列6所示；引物703a如序列表的序列7所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本专利技术还保护特异引物组甲，由引物380s、引物652s、引物872s和引物1182a组成；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。本专利技术还保护特异引物组乙，由引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本专利技术还保护特异引物组丙，由引物652s、引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。本专利技术还保护所述特异引物的应用，为鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型。本专利技术还保护以上任一所述特异引物组的应用，为鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型。本专利技术还保护一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。所述特异性扩增产物显示为一条位于300-400bp区间的电泳带。本专利技术还保护一种鉴定待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型还是Tamyb10-D1a基因型的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用特异引物组进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1b基因型，如果没有得到特异性扩增产物，待测小麦的Tamyb10-D1基因的基因型为Tamyb10-D1a基因型。所述特异性扩增产物为至少一种特异性扩增产物。特异引物组为特异引物组甲时，所述特异性扩增产物为两种或三种；两种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于800-900bp区间内的电泳带；三种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带、一条位于500-600bp区间内的电泳带和一条位于800-900bp区间内的电泳带。特异引物组为特异引物组乙时，所述特异性扩增产物为两种，分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于500-600bp区间内的电泳带。特异引物组为特异引物组丙时，所述特异性扩增产物为两种或三种；两种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带和一条位于500-600bp区间内的电泳带；三种特异性扩增产物分别显示为一条位于300-400bp区间内的电泳带、一条位于500-600bp区间内的电泳带(两条带的叠加)和一条位于700-800bp区间内的电泳带。基因型为Tamyb10-D1b基因型即：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用LP9/RP3引物对进行扩增，具有扩增产物。基因型为Tamyb10-D1b基因型即：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用LP9/RP3引物对进行扩增，不具有扩增产物。LP9/RP3引物对由引物Tamyb10-LP9和引物Tamyb10-RP3组成；引物Tamyb10-LP9如序列表的序列10所示；引物Tamyb10-RP3如序列表的序列11所示。Tamyb10-D1b基因型即穗发芽抗性基因型。Tamyb10-D1a基因型即穗发芽感性基因型。以上任一所述待测小麦为Tamyb10-D1基因的基因型为纯合型的小麦。为了使Tamyb10-D1基因在小麦穗发芽抗性分子育种中得到高效和快速利用，本专利技术的专利技术人开发了Tamyb10-D1的多个分子标记，扩增片段多集中在300-1000bp范围，扩增效率较高，PCR产物容易检测，降低了对模板DNA的质量要求。而且通过采用多重PCR技术可提高Tamyb10-D1基因分子标记检测的准确性，适用于批量分子标记检测。本专利技术开发的分子标记可通过多重PCR高效准确检测小麦穗发芽抗性基因Tamyb10-D1b的基因型，同时含有引物652s或703a的多重PCR可区分普通小麦和粗山羊草的myb10-D1基因型，本专利技术有助于小麦抗穗发芽分子育种。附图说明图1为实施例2中的电泳图。图2为实施例2中的相对定量结果。图3为实施例3中的电泳图。图4为实施例4中的电泳图。图5为实施例4中的测序结果(部分)。图6为实施例5中的电泳图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。引物Tamyb10-LP9(用LP9表示)：5’-taggccaacaccttctaaacg-3’；引物Tamyb10-RP3(用RP3表示)：5’-aggcacaccagcttatttgg-3’。国内小麦本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。

【技术特征摘要】
1.特异引物对，由引物872s和引物1182a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。2.特异引物组，包括引物872s和引物1182a；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。3.如权利要求2所述的特异引物组，其特征在于：所述特异引物组还包括引物122s、引物339s、引物380s、引物652s、引物409a、引物703a和引物1419a中的任意一条或多条；引物122s如序列表的序列1所示；引物339s如序列表的序列2所示；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物409a如序列表的序列6所示；引物703a如序列表的序列7所示；引物1419a如序列表的序列9所示。4.特异引物组，由引物380s、引物652s、引物872s和引物1182a组成；引物380s如序列表的序列3所示；引物652s如序列表的序列4所示；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示。5.特异引物组，由引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物872s如序列表的序列5所示；引物1182a如序列表的序列8所示；引物1419a如序列表的序列9所示。6.所述特异引物组，由引物652s、引物872s、引物1182a和引物1419a组成；引物652s如序列表的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泠，高春保，王翠，朱展望，佟汉文，刘易科，邹娟，张宇庆，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院粮食作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42