猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法及应用，包括如下步骤：（1）SVV/GD05株基因组全序列的扩增；（2）pSVV‑GD05病毒感染性克隆质粒的构建；（3）pSVV‑GD05‑iLOV重组质粒的构建；（4）亲本病毒（SVV‑GD05）与重组病毒（SVV‑GD05‑iLOV）拯救。本发明专利技术利用一株分离自中国猪群的SVV毒株，构建出以细菌质粒为骨架的病毒感染性克隆pSVV‑GD05，并能成功拯救出病毒。同时，将报告基因iLOV插入SVV感染性克隆病毒基因组中，成功拯救出能表达该报告基因的重组SVV病毒。本发明专利技术为深入开展SVV的基础和应用研究提供了有效的平台，具有重要的科学应用价值。

Preparation and application of full-length infectious clone of pig Seneca virus

The invention relates to the preparation method and application of full-length infectious clones of pig Seneca virus, including the following steps: (1) amplification of the complete genome sequence of SVV/GD05 strain; (2) construction of infectious clone plasmid of pSVV GD05 virus; (3) construction of recombinant plasmid of pSVV GD05 iLOV iLOV; (4) parent virus (SVV GD05) and recombinant virus (SVV GD05 GD05 iLOV) to save. The present invention constructs a viral infectious clone pSVV GD05 with bacterial plasmid as its skeleton by using a SVV strain isolated from Chinese pig herds, and can successfully rescue the virus. At the same time, the reporter gene iLOV was inserted into the genome of the infectious cloned virus of SVV, and the recombinant SVV virus expressing the reporter gene was successfully rescued. The invention provides an effective platform for further research on the basis and application of SVV, and has important scientific application value.

【技术实现步骤摘要】
猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法及应用
本专利技术涉及猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法及应用。
技术介绍
塞内卡病毒(SenecaValleyVirus,SVV)属于小RNA病毒科(Picornaviridae)塞内卡病毒属(Senecavirus)的唯一成员，其基因组为单股正链RNA，长度约为7.28kb。病毒基因组由5’端非编码区(0.66Kb)，开放阅读框(ORF，6.54Kb)，3’端非编码区(0.07Kb)和多聚腺苷酸(polyA)组成。ORF是由L基因、P1结构蛋白基因、P2和P3非结构蛋白基因组成,共同编码一条长的多聚蛋白。这条聚合蛋白遵循L-4-3-4模式，经蛋白酶剪切后能被加工成12个结构和非结构蛋白，分别是L，1A(VP4)，1B(VP2)，1C(VP3)，1D(VP1)，2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D。SVV-VP1基因序列分析显示，现有的SVV毒株可分为3个分支，分支1包括2002年分离的SVV-001株，分支2包括1988-1997年美国分离株，分支3包括巴西、加拿大、中国分离株和2001-2015年美国分离株。遗传进化树分析表明，近30年本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备用引物，其特征在于，包括如下引物：

【技术特征摘要】
1.猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备用引物，其特征在于，包括如下引物：，2.一种猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法，包括如下步骤：(1)SVV/GD05株基因组全序列的扩增；(2)pSVV-GD05重组质粒的构建；(3)pSVV-GD05-iLOV重组质粒的构建；(4)亲本病毒SVV-GD05与重组病毒SVV-GD05-iLOV拯救；步骤(1)、(2)和(3)中，使用权利要求1所述的猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备用引物。3.根据权利要求2所述的一种猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，提取SVV/GD05株的RNA，经过反转录得到cDNA；以cDNA为模板，分别用引物对通过PCR扩增得到B、C、E、F片段；以A、D的引物扩增分别得到A、D片段；分别用引物对CMV-F/967R、7381F/8213R通过overlap，得到AB、CD片段；然后将AB片段克隆至pEGFP-C3载体，得到pC3-GD05-AB；将CD片段插入pC3-GD05-AB，得到重组质粒pC3-GD05-ABCD；最后将E...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈振海，王敏敏，孙怀昌，张鑫宇，周晓慧，牟春晓，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32