与葡萄糖氧化酶配伍的微生态制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术专利申请公开了一种筛选能与葡萄糖氧化酶配伍的益生菌的方法，利用筛选到的益生菌制备成为微生态制剂，所述微生态制剂可以与葡萄糖氧化酶复配为饲料添加剂。将所述饲料添加剂用于仔猪饲喂时能够降低断奶仔猪的腹泻率，还可以促进仔猪的生长，所述饲料添加剂作为环境友好的绿色添加剂可用于替代氧化锌，减少对环境的污染。

Microecological preparation compatible with glucose oxidase and its preparation method and Application

The patent application of the invention discloses a method for screening probiotics compatible with glucose oxidase. The probiotics selected are used to prepare microecological agents, which can be compounded with glucose oxidase as feed additives. The feed additive can reduce the diarrhea rate of weaned piglets and promote the growth of piglets when used in feeding piglets. The feed additive can be used as an environmentally friendly green additive to replace zinc oxide and reduce environmental pollution.

【技术实现步骤摘要】
与葡萄糖氧化酶配伍的微生态制剂及其制备方法和应用
：本专利技术涉及饲料添加剂领域，尤其涉及一种能够与葡萄糖氧化酶配伍的微生态制剂及其在防控仔猪腹泻中的应用。
技术介绍
：随着规模化、集约化养猪模式的推进，仔猪腹泻成为养殖业经济收益的决定性因素，也是制约养猪业发展的一个瓶颈。仔猪腹泻是一种常见的多发疾病，可导致生长停滞，甚至生长倒退，严重者引起死亡。引起仔猪腹泻的因素很多，如病源微生物感染的病理因素、摄入高蛋白饲料的营养因素、断奶应激、饲养管理等，其中断奶应激是仔猪养殖中不得不面对的情况，是仔猪腹泻防治工作的重中之重。断奶仔猪因抵抗力差，肠道发育不完善，内源性消化酶分泌量不足，常导致断奶后腹泻率上升、生长性能下降、死亡率上升等问题。目前生产上主要采用在饲料中添加高剂量氧化锌来预防断奶应激对仔猪造成的影响，氧化锌的过量添加虽对腹泻有较好的收敛效果，但长期添加也会造成仔猪消化道的损伤，对仔猪造成负面影响，也会对生态环境和食品安全造成危害。另外，未利用的大量氧化锌随粪便排到环境中，造成环境污染。目前生产上主要是做好断奶前后保健、增加日粮适口性、添加功能性饲料添加剂、改善饲养管理和饲养环境等因素来缓解断奶应激引起的腹泻，市面上具有替代氧化锌功能的产品也主要集中于不同形式的锌产品，终是无法脱离金属污染层面。葡萄糖氧化酶作为一种需氧脱氢酶，在体内可催化β-D-葡萄糖的氧化过程，消耗氧气，生成葡萄糖酸和过氧化氢，葡萄糖酸可调节仔猪胃肠道pH值，营造肠道的厌氧环境，为有益菌如乳酸杆菌和双歧杆菌的繁殖提供有利条件，抑制大肠杆菌等有害菌的生长，为动物肠道提供良好的微生态环境，预防、缓解腹泻发生，改善机体整体健康水平，从而改善动物生产性能。葡萄糖氧化酶作为一种绿色添加剂，使用安全性高，无药物残留问题，成为饲料中高剂量氧化锌的理想替代品。微生态制剂作为含有一种或多种菌系的微生物制品，能激发自身有益菌种繁殖增长，可以使肠道菌群保持平衡，起到防治畜禽消化道菌群失调的作用；另外，微生态制剂进入畜禽体内后，迅速繁殖，产生大量的抗菌物质(抗菌肽)，提高动物机体免疫功能，能抑制病原菌的生长繁殖；同时产生一定量的消化酶，加强对营养物质的消化，因此在避免乳仔猪早期断奶时因为消化不良而引起营养型腹泻方面也具有重要的应用价值。在作为饲料添加剂应用的微生态制剂制备过程中，有多种可供选择的益生菌，但不同种类的益生菌可以发挥的作用并不相同，并且在实际应用时也会与添加剂中其他的组分产生不同的拮抗作用。如何筛选合适种类的微生物，将对微生态制剂的作用效果以及与其他添加剂的配伍效果起到至关重要的作用。
技术实现思路
：本专利技术一方面涉及可以与葡萄糖氧化酶配伍的微生态制剂，所述微生态制剂中的微生物通过以下筛选方式筛选得到。所述筛选方法为：将待测试的微生物与葡萄糖氧化酶按一定比例共同培养一段时间，以不添加葡萄糖氧化酶的微生物培养液作为对照组；如果葡萄糖氧化酶的添加会抑制微生物的生长，表明该微生物不能与葡萄糖氧化酶进行配伍；反之，如果葡萄糖氧化酶的添加不会抑制微生物的生长，表明该微生物可以与葡萄糖氧化酶进行配伍。本文所述“抑制微生物的生长”为培养一定时间后，葡萄糖氧化酶添加组的微生物生物量小于对照组微生物生物量的90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、25％、20％、15％、10％或5％；所述生物量可以通过细胞计数的方式进行测量，也可通过测量菌体重量，如菌体干重或菌体湿重，优选干重，也可以通过在一定波长的OD值来测量，优选OD600nm。在一个实施方式中，本专利技术能与葡萄糖氧化酶配伍的微生物优选葡萄糖氧化酶的添加能够促进所述微生物的生长，所述促进微生物的生长为葡萄糖氧化酶添加组的微生物生物量超过对照组微生物的生物量，优选大于对照组微生物生物量的1.01倍、1.05倍、1.1倍、1.2倍、1.4倍、1.5倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍或3.5倍；所述生长量可以通过细胞计数的方式进行测量，也可通过测量菌体重量，如菌体干重或菌体湿重，优选湿重，也可以通过在一定波长的OD值来测量，优选OD600nm。在另一个实施方式中，葡萄糖氧化酶与微生物的混合比例为0.1-2000U：1亿个，优选1-1000U：1亿个，更优选1-500U：1亿个，更优选1U：1亿个、5U：1亿个、10U：1亿个、20U：1亿个、50U：1亿个、100U：1亿个、200U：1亿个、300U：1亿个、400U：1亿个、或500U：1亿个。本文所述的葡萄糖氧化酶与微生物的比例(U:亿个)是指葡萄糖氧化酶的酶活单位(U)与微生物的个数(亿个)的用量比例。葡萄糖氧化酶酶活单位(U)定义为在pH5.5、37℃的条件下，每分钟能把1.0μmol的β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H2O2的酶量为一个单位(U)。在葡萄糖氧化酶的作用下，将葡萄糖和氧气生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺，通过检测生产的氧化型邻联茴香胺计算葡萄糖氧化酶酶活。葡萄糖氧化酶与微生物的最适用量比例也可采用本专利技术的筛选方法选择得到，具体而言，采用不同的用量比例将葡萄糖氧化酶与微生物混合，共同培养一段时间后，观察不同用量比例的葡萄糖氧化酶是否会抑制微生物的生长，从而选择合适的用量比例。本专利技术所述的葡萄糖氧化酶与微生物共同培养一段时间，优选培养6-36小时，更优选12-24小时，更优选16-20小时，更优选18小时。本专利技术的微生物可以选自粪肠球菌、屎肠球菌、枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德式乳杆菌乳酸亚种、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌、动物双歧杆菌、黑曲霉、米曲霉、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纤维二糖乳杆菌、发酵乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、布氏乳杆菌、产丙酸丙酸杆菌、副干酪乳杆菌，或上述菌株的任意组合。本专利技术能够与葡萄糖氧化酶配伍的微生物包含但不限于粪肠球菌、屎肠球菌、丁酸梭菌中的一种或几种。其中，葡萄糖氧化酶与丁酸梭菌的用量比例可为任意比例，优选0.1-2000U：1亿个，更优选1-1000U：1亿个，更优选1U：1亿个、2U：1亿个、5U：1亿个、10U：1亿个、20U：1亿个、50U：1亿个、100U：1亿个、200U：1亿个、300U：1亿个、400U：1亿个、500U：1亿个、600U：1亿个、700U：1亿个、800U：1亿个、900U：1亿个、1000U：1亿个；葡萄糖氧化酶与屎肠球菌的用量比例为0.1-200U：1亿个，优选1-100U：1亿个，更优选1U：1亿个、2U：1亿个、3U：1亿个、4U：1亿个、5U：1亿个、6U：1亿个、7U：1亿个、8U：1亿个、9U：1亿个、10U：1亿个、20U：1亿个、30U：1亿个、40U：1亿个、50U：1亿个、60U：1亿个、70U：1亿个、80U：1亿个、90U：1亿个、100U：1亿个；葡萄糖氧化酶与粪肠球菌的用量比例为0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种筛选能够与葡萄糖氧化酶进行配伍的微生物的方法，所述方法包括以下步骤：将候选微生物与葡萄糖氧化酶按一定比例混合作为实验组，以不添加葡萄糖氧化酶的微生物作为对照组，将实验组和对照组在相同条件下进行培养，培养一段时间后测量微生物的生物量；如果葡萄糖氧化酶的添加会抑制微生物的生长，表明该微生物不能与葡萄糖氧化酶进行配伍；反之，如果葡萄糖氧化酶的添加不会抑制微生物的生长，表明该微生物能够与葡萄糖氧化酶进行配伍；所述抑制微生物的生长为实验组微生物生物量小于对照组微生物生物量的90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、25％、20％、15％、10％或5％；优选的，葡萄糖氧化酶与微生物混合比例为0.1‑2000U：1亿个，更优选1‑1000U：1亿个，更优选1‑500U：1亿个，更优选1U：1亿个、5U：1亿个、10U：1亿个、20U：1亿个、50U：1亿个、100U：1亿个、200U：1亿个、300U：1亿个、400U：1亿个、或500U：1亿个；优选的，培养一段时间为培养6‑36小时，更优选12‑24小时，更优选16‑20小时，更优选18小时；优选的，所述测量微生物的生物量通过测量一定波长的OD值来实现，或通过测量菌体重量来实现，或通过细胞计数的方式来实现；更优选的，所述OD值为OD600nm，所述菌体重量为菌体干重。...

【技术特征摘要】
1.一种筛选能够与葡萄糖氧化酶进行配伍的微生物的方法，所述方法包括以下步骤：将候选微生物与葡萄糖氧化酶按一定比例混合作为实验组，以不添加葡萄糖氧化酶的微生物作为对照组，将实验组和对照组在相同条件下进行培养，培养一段时间后测量微生物的生物量；如果葡萄糖氧化酶的添加会抑制微生物的生长，表明该微生物不能与葡萄糖氧化酶进行配伍；反之，如果葡萄糖氧化酶的添加不会抑制微生物的生长，表明该微生物能够与葡萄糖氧化酶进行配伍；所述抑制微生物的生长为实验组微生物生物量小于对照组微生物生物量的90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、25％、20％、15％、10％或5％；优选的，葡萄糖氧化酶与微生物混合比例为0.1-2000U：1亿个，更优选1-1000U：1亿个，更优选1-500U：1亿个，更优选1U：1亿个、5U：1亿个、10U：1亿个、20U：1亿个、50U：1亿个、100U：1亿个、200U：1亿个、300U：1亿个、400U：1亿个、或500U：1亿个；优选的，培养一段时间为培养6-36小时，更优选12-24小时，更优选16-20小时，更优选18小时；优选的，所述测量微生物的生物量通过测量一定波长的OD值来实现，或通过测量菌体重量来实现，或通过细胞计数的方式来实现；更优选的，所述OD值为OD600nm，所述菌体重量为菌体干重。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述候选微生物选自粪肠球菌、屎肠球菌、枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德式乳杆菌乳酸亚种、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌、动物双歧杆菌、黑曲霉、米曲霉、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纤维二糖乳杆菌、发酵乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、布氏乳杆菌、产丙酸丙酸杆菌、副干酪乳杆菌，或上述菌株的任意组合；所述能够与葡萄糖氧化酶配伍的微生物优选葡萄糖氧化酶的添加能够促进所述微生物的生长，所述促进微生物的生长为实验组微生物生物量超过对照组微生物的生物量，优选大于对照组微生物生物量的1.01倍、1.05倍、1.1倍、1.2倍、1.4倍、1.5倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍或3.5倍。3.一种与葡萄糖氧化酶复配的微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂包括丁酸梭菌、粪肠球菌和屎肠球菌；优选的，所述微生态制剂还包括通过权利要求1或2的方法筛选得到的能够与葡萄糖氧化酶进行配伍的其他种类的微生物。4.一种饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂包含权利要求3所述的微生态制剂；优选的，每g饲料添加剂中丁酸梭菌的用量为0.1-50亿个、屎肠球菌的用量为5-500亿个、粪肠球菌的用量为5-500亿个；更优选的，丁酸梭菌的用量为0.1-20亿个、屎肠球菌的用量为5-200亿个、粪肠球菌的用量为5-200亿个；更优选的，丁酸梭菌的用量为0.5-20亿个、屎肠球菌的用量为5-100亿个、粪肠球菌的用量为5-100亿个；更优选的，丁酸梭菌的用量为0.5-5亿个、屎肠球菌的用量为5-50亿个、粪肠球菌的用量为5-50亿个；更优选的，丁酸梭菌的用量为0.5-2亿个、屎肠球菌的用量为10-40亿个、粪肠球菌的用量为10-40亿个。5.根据权利要求4所述的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂还包括葡萄糖氧化酶；优选的，葡萄糖氧化酶与丁酸梭菌的用量比例可为任意比例，优选0.1-2000U：1亿个，更优选1-1000U：1亿个；优选的，葡萄糖氧化酶与屎肠球菌的用量比例为0.1-200U：1亿个，更优选1-100U：1亿个；优选的，葡萄糖氧化酶与粪肠球菌的用量比例为0.1-200U：1亿个，更优选1-10...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延杰，赵素珍，陈宁波，陈锋亮，宋迪，
申请(专利权)人：济南百斯杰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37