一种美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法技术

本发明专利技术提供一种美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法，本发明专利技术公开了一种美沙拉秦灌肠液有关物质的分析方法。本方法采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用了适当的有机相、缓冲溶液和水为流动相，采用梯度洗脱，有效地解决了美沙拉秦与杂质及杂质之间的分离问题。本方法专属性强，重复性好，能保证美沙拉秦中工艺和降解杂的可控性。

A method for determination of related substances in mesalazine enema

The invention provides a method for determining related substances in mesalazine enema solution, and discloses an analytical method for related substances in mesalazine enema solution. This method uses high performance liquid chromatography, octadecyl silane bonded silica gel as column filler, ultraviolet detector, appropriate organic phase, buffer solution and water as mobile phase, gradient elution, and effectively solves the separation problem between mesalazine and impurities and impurities. The method has strong specificity and good repeatability, and can ensure the controllability of the process and degradation impurities in mesalazine.

【技术实现步骤摘要】
一种美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法
本专利技术涉及测定药物有关物质的
，特别涉及一种美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法。
技术介绍
溃疡性结肠炎是一个全世界都有的疾病，近年来，溃疡性结肠炎的发病率在我国有增高趋势，临床上多采用柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗，虽然有一定疗效，但其副作用发生率较高，且对磺胺过敏者不能应用。美沙拉秦最早由德国霍克大药厂研制成功并投放市场，与SASP相比，其主要化学结构在于保留了5-氨基水杨酸有效成份，去除了磺胺吡啶基团，因此克服了SASP的缺点，是治疗溃疡性结肠炎的一种新药，已在西方国家广泛应用。目前由于人们生活环境恶化和生活习惯等诸多因素影响，溃疡性结肠炎发病率在逐年增加，在美沙拉秦问世前，没有更好的药物用于治疗溃疡性结肠炎，美沙拉秦问世后，以其良好的疗效和不良反应少等优势，在临床上不断推广。美沙拉秦的主要药理作用在于直接抑制结肠过氧化物酶，抑制炎症介质，包括前列腺素、白三烯等的合成和释放；抑制血小板活化因子的活性；清除自由基，降低肠道黏膜的损伤及刺激，且避免了SASP的副作用，适用于SASP、糖皮质激素无效或不耐受的患者。从缓解症状、结肠镜下改变，其有效率明显高于SASP。另外，还可明显降低患者血清中TNF-а和IL-8水平，这可能是其治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一。美沙拉秦的抗炎作用机制尚不完全清楚。体外研究显示美沙拉秦对肠黏膜前列腺素的含量有一定影响，具有清除活性氧自由基的功能，对脂氧合酶可能起到一定的抑制作用。直肠给予美沙拉秦灌肠液后，美沙拉秦主要局部作用于肠黏膜和粘膜下层组织。有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。有关物质与药品质量、安全性及疗效密切相关，有关物质的存在可能会降低药物的疗效，甚至引起毒副作用，因此，必须通过适当的检测分析方法控制药物中有关物质的种类和含量，确保药品质量。目前USP、BP标准和进口质量标注中收载美沙拉秦有关物质的检测方法，通过对其检测方法的研究发现：①USP标准采用等度洗脱，无法将混合杂质中的各杂质完全分开；②BP标准中主峰及杂质峰位置处梯度峰干扰较明显，杂质A和C单独采用另一色谱条件，且检测杂质A和C的色谱条件中流动相中加入了高氯酸，容易损伤色谱柱；③进口质量标准中存在杂质检测不全的现象，且部分杂质分离度不高，无法实现准确检测。本专利技术可以在同一色谱条件下对多美沙拉秦有关物质进行检测，且能有效分离各杂质，对其质量控制具有重要意义。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种专属性好、分离度好、能将可能的降解杂质和工艺杂质与主成分有效分开，且灵敏度高，可应用于美沙拉秦灌肠液的质量控制。本专利技术人针对美沙拉秦合成工艺以及降解情况，鉴定了11个杂质。本专利技术人经过梯度洗脱程序等条件进行筛选，兼顾11个有关物质分离的需要，最终建立了适当的有关物质分析方法，使主成分与各有关物质之间、各有关物质之间均能达到基线分离，达到了上述专利技术的目的。本专利技术实施例首先提供一种美沙拉秦有关物质的测定方法，所述方法采用高效液相色谱法进行测定，所述高效液相色谱法的色谱条件包括：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾4.35g，加水溶解至1000ml，用磷酸调pH至7.2)-TBAH溶液(取10％四丁基氢氧化铵水溶液80ml，加水稀释至200ml，用硫酸溶液(1→2)调pH至7.5)-甲醇-水(250：50：100：600)为流动相A，以磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾4.35g，加水溶解至1000ml，用磷酸调pH至7.2)-TBAH溶液(取10％四丁基氢氧化铵水溶液80ml，加水稀释至200ml，用硫酸溶液(1→2)调pH至7.5)-甲醇-水(250：50：500：200)为流动相B；梯度洗脱程序为：柱温为40℃；检测波长为230nm；流速为1.0mL/min。取本品适量，精密称定，加0.01mol/L的盐酸溶解并稀释制成每1ml中约含美沙拉秦1.0mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，加0.01mol/L的盐酸定量稀释制成每1ml中含美沙拉秦1μg的溶液，作为对照溶液。分别精密称杂质对照品各适量，加0.01mol/L的盐酸溶解并定量稀释制成每1ml中约含各杂质1μg的混合溶液，作为杂质对照品溶液。分别精密称杂质对照品和美沙拉秦对照品各适量，加0.01mol/L的盐酸溶解并定量稀释制成每1ml中约含1μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。供试品溶液、对照溶液与杂质对照品溶液的进样量为10μl。附图说明图1为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法优化中洗脱程序1色谱图；图2为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法优化中洗脱程序2色谱图；图3为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法优化中洗脱程序3色谱图(本专利技术标准色谱图)；图4为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法优化中洗脱程序4色谱图；图5为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法优化中洗脱程序5色谱图；图6为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法对比中USP标准的色谱图；图7为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法对比中BP2017标准的色谱图；图8为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法的方法对比中进口注册标准的色谱图；图9为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法测定的系统适用性试验溶液的色谱图；图10为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法测定的专属性空白试验溶液的色谱图；图11为采用本专利技术的美沙拉秦灌肠液有关物质测定方法测定的专属性试验溶液的色谱图；需要特别说明的是：由于申请人使用的HPLC设备为网络版，该工作站不具有任何的图像编辑、导出功能，只能直接打印成纸质文件，附图因为工作站和打印设备的问题有倾斜，这并不影响本领域技术人员对色谱图的解读。具体实施方式为了测定美沙拉秦有关物质，本专利技术提供了一种美沙拉秦有关物质的测定方法。在该技术方案中，通过优化高效液相色谱条件，使得美沙拉秦与相邻杂质及各杂质间较好分离。以下结合附图具体说明本专利技术的技术方案。以下具体实施方式中，所使用的药品、试剂及仪器如：表1对照品信息编号代码名称批号含量来源1杂质A4-氨基苯酚L310R6799.65％百灵威2杂质C2-氨基苯酚LB30R3998.66％百灵威3杂质E4-氨基水杨酸LGA0O0898.78％百灵威4杂质F3-氨基水杨酸L610P4197.55％百灵威5杂质G2,5-二羟基苯甲酸LDA0Q3499.79％百灵威6杂质H水杨酸LRC0Q52100.74％百灵威7杂质J3,5-二氨基水杨酸WG01669615040800195.0％毕得医药8杂质L2-氯苯甲酸LA50Q2298.97％百灵威9杂质M2-氯-5-硝基苯甲酸L270O8899.96％百灵威10杂质N5-硝基水杨酸L370P2899.52％百灵威11杂质R3-硝基水杨酸NXZ6F99.4％TGI12——美沙拉秦100565-20070199.9％中检院表2样品信息表3仪器与设备信息名称型号厂家电子天平BP211DSartorioμs高效液相色谱仪Agilent1200Agilent本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种美沙拉秦有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，梯度洗脱； 其特征在于：其中所述的流动相比例为：以磷酸盐缓冲液‑TBAH溶液‑甲醇‑水的体积比为250：50：100：600，作为为流动相A，以磷酸盐缓冲液‑TBAH溶液‑甲醇‑水的体积比为250：50：500：200，作为流动相B。

【技术特征摘要】
1.一种美沙拉秦有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，梯度洗脱；其特征在于：其中所述的流动相比例为：以磷酸盐缓冲液-TBAH溶液-甲醇-水的体积比为250：50：100：600，作为为流动相A，以磷酸盐缓冲液-TBAH溶液-甲醇-水的体积比为250：50：500：200，作为流动相B。2.根据权利要求1所述的美沙拉秦有关物质的检测方法，其特征在于：其中，磷酸盐缓冲溶液为：取磷酸氢二钾4.35g，加水溶解至1000ml，用磷酸调pH至7.2，TBAH溶液为：取10%四丁基氢氧化铵水溶液80ml，加水稀释至200ml，用硫酸溶液（1→2），调pH至7.5。3.根据权利要求1所述的美沙拉秦有关物质的检测方法，其特征在于：其中所述梯度洗脱程序流动相A与流动相B的体积百分比为：0min时90:10；60min时15:85；65min时90:10；75min时90:10。4.根据权利要求1所述的美沙拉秦有关物质的检测方法，其特征在于：采用紫外检测器，检测波长为220nm~240nm，优...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘萍，江燕，李朝阳，
申请(专利权)人：重庆健能医药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50