桥粒芯糖蛋白2(DSG2)结合蛋白质及其用途制造技术

本发明专利技术涉及桥粒芯糖蛋白2(DSG2)结合蛋白质及其用途。具体而言，本发明专利技术提供了重组腺病毒组合物以及它们用于治疗与上皮组织有关的紊乱的方法。

Desmosome Core Glycoprotein 2 (DSG2) Binding Protein and Its Application

The present invention relates to desmosome core glycoprotein 2 (DSG2) binding protein and its use. Specifically, the present invention provides recombinant adenoviral compositions and methods for treating disorders associated with epithelial tissue.

【技术实现步骤摘要】
桥粒芯糖蛋白2(DSG2)结合蛋白质及其用途本申请是申请日为2013年09月24日的题为“桥粒芯糖蛋白2(DSG2)结合蛋白质及其用途”的中国专利申请号201380060698.X的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2012年9月25日提交的美国临时专利申请系列No.61/705,523的权益，该申请的全部内容以引用方式并入本文。政府权利的声明本专利技术是在美国国立卫生研究院(theNationalInstitutesofHealth)授予的R01CA080192和RO1HLA078836下由美国政府资助而作出的。在本专利技术中，美国政府具有某些权利。
技术介绍
人类腺病毒(Ad)已经分成6种类型(A至F)，目前包含51种血清型。大部分的Ad血清型使用了柯萨奇病毒蛋白受体(CAR)作为主要的附着受体(Bergelsonetal.,1997)。但是，B类Ad血清型不这样。最近，我们基于它们受体的使用，研究了新的一组B类Ad(Tuveetal.,2006)。1组(Ad16,21,35,50)几乎专门使用CD46作为受体；2组(Ad3,Ad7,14)共用一个或多个普通的未识别的受体，该受体并非为CD46并且其暂时命名为受体X；3组(Ad11)优选地与CD46相互作用，而且如果CD46被阻断，则还使用受体X。B类Ad是常见的人类病原体。自从2005年以来，观察到在大部分的美国军事训练场中同时出现多种B类血清型。其包含血清型Ad3,Ad7和Ad14(Metzgaretal.,2007)。在2007年，已经在美国和亚洲的多处发现一种新型的高度致病的毒株且可能更有毒的毒株Ad14(Ad14a)(Louieetal.,2008；Tateetal.,2009)。近来，根据Ad14a的受体的使用，我们证明Ad14a属于B类2组Ad(Wangetal.,2009)。总而言之，所有使用受体X的血清型(Ad3,Ad7,Ad14,Ad14a,和Ad11)在本文中均称为AdB-2/3。AdB-2/3作为基因转移载体与上皮起源的肿瘤(其代表了大部分的实体肿瘤)具有显著的相关性(YamamotoandCuriel,2010)。上皮细胞保持了多种细胞间连接和顶底极性。上皮细胞的重要特征在原位上皮癌和癌细胞系中是保守的(Turleyetal.,2008)。CAR和CD46通常陷于上皮癌细胞的紧密和粘附连接中，并且未接近使用这些附着受体的Ad(CoyneandBergelson,2005；Straussetal.,2009)。相反，AdB-2/3高效地感染上皮癌细胞，这是部分通过诱导可以想象的上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)的过程来实现的(Straussetal.,2009)。AdB-2/3的另一个与众不同的特征是它们能够在复制过程中产生亚病毒十二面体颗粒，其由Ad纤维和五邻体基体组成(Norrbyetal.,1967)。五邻体-十二面体(PtDd)不能由全长的五邻体基体蛋白质组装，但是必须在残基37和38之间通过蛋白质水解自发地进行N-末端截短(Fuschiottietal.,2006)。该切割位点在Ad3,Ad7,Ad11和Ad14中是保守的，但是在Ad2和Ad5中不存在。在Ad3的情况下，以大量过量的5.5×106PtDd/感染病毒的量形成PtDd(Fenderetal.,2005)，并且已经表明PtDd通过破坏细胞间连接而增强Ad3的感染性，由此有利于病毒的传播(Waltersetal.,2002)。
技术实现思路
在一个方面中，本专利技术提供了分离的多肽，其包含SEQIDNO:1-11的任意一项所述的氨基酸序列。在另一个方面中，本专利技术提供了重组AdB-2/3纤维多肽，其包含：(a)一个或多个AdB-2/3纤维多肽杆结构域或其功能等价物；(b)与一个或多个AdB-2/3纤维多肽杆结构域可操作地连接的并且位于该AdB-2/3纤维多肽杆结构域的C-末端的AdB-2/3纤维多肽球结构域，其中所述的AdB-2/3纤维多肽球结构域包含任意一个SEQIDNO:1-11的多肽；以及(c)与一个或多个AdB-2/3纤维多肽杆结构域可操作地连接的并且位于该AdB-2/3纤维多肽杆结构域的N-末端的一个或多个非AdB-2/3衍生的二聚化结构域。在一个实施方案中，AdB-2/3纤维多肽不包含AdB-2/3纤维多肽尾部结构域。在另一个实施方案中，每个球结构域均选自Ad3纤维多肽球结构域,Ad7纤维多肽球结构域,Ad11纤维多肽球结构域,Ad14纤维多肽球结构域,Ad14a纤维多肽球结构域,它们的组合以及它们的功能等价物。在另一个实施方案中，每个球结构域均包含SEQIDNO:112-18的任意一项的氨基酸序列或它们的组合。在另一个实施方案中，二聚化结构域包含选自SEQIDNO:24和SEQIDNO:25中的氨基酸序列。在另一个实施方案中，重组AdB-2/3纤维多肽包含或由SEQIDN0:28-34的任意一项的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，AdB-2/3纤维多肽是多聚化的，例如二聚化的。在另一个实施方案中，AdB-2/3纤维多肽进一步包含与重组的AdB-2/3纤维多肽缀合的一种或多种化合物，例如治疗剂、诊断剂和成像剂。在另一个方面中，本专利技术提供了分离的核酸，其编码本专利技术的分离的肽或重组AdB-2/3纤维多肽，本专利技术提供了包含分离的核酸的重组表达载体，以及包含重组表达载体的宿主细胞。在另一个实施方案中，本专利技术提供了药物组合物，其包含：(a)本专利技术的任意一个实施方案或实施方案的组合的AdB-2/3纤维多聚体；以及药物可接受的载体。在另一个方面中，本专利技术提供了用于增强治疗性治疗或诊断与上皮组织有关的紊乱，和/或将上皮组织成像的方法，其包含向有需要的受试对象给予：(a)足以治疗所述的紊乱的量的一种或多种治疗剂、足以诊断所述的紊乱的量的诊断剂，和/或足以将上皮组织成像的量的成像剂；以及(b)足以增强一种或多种治疗剂、诊断剂和/或成像剂的效力的量的、本专利技术的任意一个实施方案或实施方案的组合的AdB-2/3纤维多聚体或药物组合物。与上皮组织有关的此类示例性紊乱包含实体肿瘤,肠易激综合征,炎性肠病,Crohn病,溃疡性结肠炎,便秘,胃食管反流病,Barrett食管炎,慢性阻塞性肺病,哮喘,支气管炎,肺气肿,囊肿性纤维化,间质性肺病,肺炎,原发性肺动脉高压,肺栓塞,肺结节病,肺结核,胰腺炎,胰管紊乱,胆管梗阻,胆囊炎,胆总管结石病,脑功能障碍,银屑病,皮炎,血管球性肾炎,肝炎,糖尿病,甲状腺疾病,蜂窝组织炎,感染,肾盂肾炎,和胆结石。在另一个方面中，本专利技术提供了用于治疗与上皮组织有关的紊乱的方法，其包含向有需要的受试对象给予足以治疗所述的紊乱的量的、本专利技术的任意一个实施方案或实施方案的组合的AdB-2/3纤维多聚体或药物组合物。在示例性的实施方案中，此类紊乱可以为病毒感染或适体重量。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于改善化合物向上皮组织的传递的方法，其包含将上皮组织与一种或多种待传递至上皮组织的化合物、以及足以增强一种或多种化合物传递至上皮组织的量的、本专利技术的任意一个实施方案或实施方案的组合的AdB-2/3纤维多聚体或药物组合物相接触。在示例性的实施方案中，一种或多种化合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的肽，其包含氨基酸序列：TLWTG(V/P)(N/K)P(‑‑‑‑/T)(E/R)ANC(Q/I)(M/I)(M/E)(Y/A/N/D)(S/G)(S/K)(E/Q)(S/N)(N/P)D(C/S)KL(I/T)L(I/T)LVK(T/N)G(A/G)(L/I)V(T/N)(A/G)(F/Y)V(Y/T)(V/L)(I/M)G(V/A)S(N/D)(N/D/Y)(F/V)N(M/T)L(T/F)(T/K)(Y/H/N)(R/K)N(I/V)(N/S)(F/I)(T/N)(A/V)EL(F/Y)FD(S/A)(A/T)G(N/H)(L/I)L(T/P)(S/R/D)(L/S)SSLKT(P/D)L(N/E)

【技术特征摘要】
2012.09.25 US 61/705,5231.一种分离的肽，其包含氨基酸序列：TLWTG(V/P)(N/K)P(----/T)(E/R)ANC(Q/I)(M/I)(M/E)(Y/A/N/D)(S/G)(S/K)(E/Q)(S/N)(N/P)D(C/S)KL(I/T)L(I/T)LVK(T/N)G(A/G)(L/I)V(T/N)(A/G)(F/Y)V(Y/T)(V/L)(I/M)G(V/A)S(N/D)(N/D/Y)(F/V)N(M/T)L(T/F)(T/K)(Y/H/N)(R/K)N(I/V)(N/S)(F/I)(T/N)(A/V)EL(F/Y)FD(S/A)(A/T)G(N/H)(L/I)L(T/P)(S/R/D)(L/S)SSLKT(P/D)L(N/E)X2X3(S/Y)(G/K)Q(N/T)(M/--)(A/--)(T/--)(G/--)A(I/L/D)X4(N/S)A(K/R)(S/G)FMPSTTAYPFX5(--/L)(N/P)(N/D/V)(N/A)(S/G)(R/T)(E/H)(N/K/--)X6NX7I(Y/F)G(T/Q)C(H/Y)YX8ASD(H/G/R)(T/A)(A/L)FP(I/L)(D/E)(I/V)(S/T)VMLN(Q/R/K)R(A/L)(I/L/P)(R/N/D)(A/D/N/S)(D/E/R)TSY(C/V)(I/M)(R/T)(I/V/F)(T/L)WS(W/L)X9(T/A)G(D/L/V)APE(G/V/--)(Q/--)T(S/T)(A/Q)(T/A)TL(V/I)TSPFTF(Y/S)YIREDD(SEQIDNO:1)；其中X2为H,L,或P；X3为K或E；X4为T,F,S,或L；X5为V,D,或者是缺乏的；X6为E,G,或者是缺乏的；X7为Y或F；X8为T,K,或E；以及X9为N或S；其中以下的至少一种是真实的：X2为P；X3为E；X4为S,或L；X5为D；X6为G)；X7为F；X8为E；或者X9为S。2.权利要求1所述的分离的肽，其包含氨基酸序列：TLWTG(V/P)(N/K)P(E/R)ANC(Q/I)(M/I)(M/E)(Y/A/N/D)(S/G)(S/K)(E/Q)(S/N)(N/P)D(C/S)KL(I/T)L(I/T)LVK(T/N)G(A/G)(L/I)V(T/N)(A/G)(F/Y)V(Y/T)(V/L)(I/M)G(V/A)S(N/D)(N/D/Y)(F/V)N(M/T)L(T/F)(T/K)(Y/H/N)(R/K)N(I/V)(N/S)(F/I)(T/N)(A/V)EL(F/Y)FD(S/A)(A/T)G(N/H)(L/I)L(T/P)(S/R/D)(L/S)SSLKT(P/D)L(N/E)X2X3(S/Y)(G/K)Q(N/T)A(I/L/D)X4(N/S)A(K/R)(S/G)FMPSTTAYPFX5(--/L)(N/P)(N/D/V)(N/A)(S/G)(R/T)(E/H)(N/K/--)X6NX7I(Y/F)G(T/Q)C(H/Y)YX8ASD(H/G/R)(T/A)(A/L)FP(I/L)(D/E)(I/V)(S/T)VMLN(Q/R/K)R(A/L)(I/L/P)(R/N/D)(A/D/N/S)(D/E/R)TSY(C/V)(I/M)(R/T)(I/V/F)(T/L)WS(W/L)X9(T/A)G(D/L/V)APET(S/T)(A/Q)(T/A)TL(V/I)TSPFTF(Y/S)YIREDD(SEQIDNO:2)。3.权利要求1或2所述的分离的肽，其包含氨基酸序列：TLWTG(V/P)(N/K)P(E/R)ANC(Q/I)(M/I)(M/E)(Y/A/N/D)(S/G)(S/K)(E/Q)(S/N)(N/P)D(C/S)KL(I/T)L(I/T)LVK(T/N)G(A/G)(L/I)V(T/N)(A/G)(F/Y)V(Y/T)(V/L)(I/M)G(V/A)S(N/D)(N/D/Y)(F/V)N(M/T)L(T/F)(T/K)(Y/H/N)(R/K)N(I/V)(N/S)(F/I)(T/N)(A/V)EL(F/Y)FD(S/A)(A/T)G(N/H)(L/I)L(T/P)(S/R/D)(L/S)SSLKT(P/D)L(N/E)X2X3(S/Y)(G/K)Q(N/T)A(I/L/D)X4(N/S)A(K/R)(S/G)FMPSTTAYPFX5L(N/P)(N/D/V)(N/A)(S/G)(R/T)(E/H)(N/K/)X6NX7I(Y/F)G(T/Q)C(H/Y)YX8ASD(H/G/R)(T/A)(A/L)FP(I/L)(D/E)(I/V)(S/T)VMLN(Q/R/K)R(A/L)(I/L/P)(R/N/D)(A/D/N/S)(D/E/R)TSY(C/V)(I/M)(R/T)(I/V/F)(T/L)WS(W/L)X9(T/A)G(D/L/V)APET(S/T)(A/Q)(T/A)TL(V/I)TSPFTF(Y/S)YIREDD(SEQIDNO:3)。4.权利要求1-3的任意一项所述的分离的肽，其包含氨基酸序列：TLWTGPKPEANCIIEYGKQNPDSKLTLILVKNGG(I/L)VNGYVTLMGASDYVNTLFKNKNVSINVELYFDATGHILPDSSSLKTDLEX2X3YKQTADX4SARGFMPSTTAYPFX5LPNAGTHNX6NX7IFGQCYYX8ASDGALFPLEVTVMLNKRLPDSRTSYVMTFLWSLX9AGLAPETTQATLITSPFTFSYIREDD(SEQIDNO:4)。5.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·利伯，汪宏杰，
申请(专利权)人：华盛顿大学商业化中心，
类型：发明
国别省市：美国,US