细胞靶向的药物活性物质或标记物递送体系制造技术

本发明专利技术涉及一种经分离的细胞靶向递送体系，其包含CD45

Cell-targeted delivery system of drug-active substances or markers

The invention relates to a separated cell targeted delivery system comprising CD45.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞靶向的药物活性物质或标记物递送体系本专利技术涉及一种经分离的细胞靶向递送体系，其包含CD45+白细胞，在所述细胞中包含一种或多于一种铁结合蛋白和药物活性物质和/或标记物的复合物，本专利技术还涉及用于制备这种经分离的细胞靶向递送体系的方法，以及该体系用于预防、治疗、诊断、治疗诊断，尤其是用于预防性或治疗性疫苗接种、癌症治疗、特别是转移癌或炎症性疾病的用途。
技术介绍
目前的成像工具能够检测大的转移瘤(大于0.5至1cm大小)。然而，它们很少检测到转移性肿瘤细胞的早期扩散。小于0.5cm的人体转移瘤是无血管的，因此没有适当的血液和氧供应。这意味着通过血液循环递送造影剂以标记这些转移瘤并使其成像是不可能的。缺氧的存在是微转移瘤的常见特征，其中缺氧部分可高达90％，几乎没有或没有血液灌注(Li等人，2012，JournalofSolidTumours，2(2)：28-33)。因此，严重缺氧被认为是微转移瘤的一般特征。隐藏在大群正常细胞中的一种或多于一种微转移瘤的靶向带来了独特的挑战，因为几种生物屏障、不良血液供应阻碍了接近微转移瘤，并且小尺寸的微转移瘤和其分散至器官带来了其他障碍。出于相同的原因，微转移瘤经常难以治疗。尽管微转移瘤所来源的实体瘤对常规治疗通常良好地响应，但是经常在原发性肿瘤部位或在转移瘤部位再生长。这在临床肿瘤学中造成了严重问题(Muthana等人，2012，CancerRes；73(2)；490-495)。它与限制药物渗透的实体瘤的微环境特性相关，从而使肿瘤暴露于低于药物有效浓度的浓度(Hobbs等人，1998，ProcNatlAcadSciUSA：4607-4612)。这是由脉管系统不足引起的，所述脉管系统不足导致：团块中癌细胞的高异质性、低氧张力(缺氧)、低pH和低葡萄糖浓度(Kizaka-Kondoh等人，2003，CancerSci94(12)：1021-1028)。另外，在一些区域中快速的肿瘤细胞增殖可能超过新血管生长速率，从而促进缺氧区域的形成(Lewis和Murdoch，2005，AmJPathol167(3)：627-635)。导致肿瘤缺氧的这种异常血管结构及其由此受损的功能与患有实体瘤的患者中更恶性的表型和低的存活率相关，并且由于癌细胞中的药物吸收减少和缺氧诱导性改变而导致治疗失败(Sun等人，2012，ClinCancerRes18(3)：758-770；Sullivan等人，2008MolCancerTher7(7)：1961-1973；Kizaka-Kondoh等人，2003，CancerSci94(12)：1021-1028)。而且，化疗或放疗引起大面积肿瘤缺氧的额外形成，从而使肿瘤的治疗甚至更困难。抗癌治疗的效力受限于缺氧肿瘤细胞存在的事实已经导致了引入旨在克服这种问题的各种治疗方法。本专利技术人已经发现，CD45+白细胞，特别是活化的巨噬细胞、其前体单核细胞、淋巴细胞和粒细胞可以摄取与一种或多于一种铁结合蛋白在体外复合的药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物，并将这些复合物递送至细胞或细胞内，优选递送至体内的肿瘤细胞或肿瘤细胞内，或递送至其他经受应激(例如氧化应激)的细胞或其他经受应激(例如氧化应激)的细胞内。基于该发现，本专利技术人已经克服了现有技术的上述问题中的一个或多于一个。因此，本专利技术的靶向递送体系尤其提供了一个或多于一个以下优点：(i)将一种或多于一种药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物特异性递送至吸引上述CD45+白细胞的组织，优选递送至患病细胞内，(ii)保护药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物免于在血液循环中失活或从身体中清除，(iii)将药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物递送至不良血管化或非血管化的疾病区域的细胞，优选递送至不良血管化或非血管化的疾病区域的细胞内，所述疾病区域例如为转移瘤、较大肿瘤的缺氧区域、风湿性病变、发炎的淋巴结、无血管伤口、皮肤，(iv)降低药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物的毒性，(v)递送具有不良药代动力学的药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物，(vi)降低由于药物靶向递送引起的药物副作用，(vii)由于靶向递送，较低剂量的药物具有较高的治疗效力；和/或(viii)由于施用与铁结合蛋白连接的药物，在药物施用部位具有较低的局部组织损伤风险，所述铁结合蛋白负载于CD45+白细胞内；和/或(ix)检测高度缺氧的小转移瘤的可能性；和/或(x)炎症性疾病的早期检测。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术涉及一种经分离的靶向递送体系，其包含CD45+单核细胞-巨噬细胞、CD45+淋巴细胞，特别是CD45+自然杀伤细胞(NK细胞)、任意这些细胞类型的前体，优选MDSC，和/或CD45+粒细胞(“CD45+白细胞”)，或其前体，优选MDSC，其包含所述细胞内的一种或多于一种铁结合蛋白和药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物的复合物。在第二方面，本专利技术涉及一种经分离的靶向递送标记物体系，其包含CD45+白细胞，优选能够被标记的CD45+白细胞，其包含一种或多于一种标记物，优选放射性标记物或其结合物和组合。在第三方面，本专利技术涉及制备权利要求1至25所述的经分离的靶向递送体系的方法，其包括以下步骤：a)提供纯化的铁结合蛋白；b)将药物活性物质、标记物或药物活性物质和标记物共价或非共价地连接至铁结合蛋白和/或将药物活性物质、标记物、或药物活性物质和标记物包封在铁结合蛋白中；c)提供CD45+白细胞；和d1)在步骤b)中产生的所述铁结合蛋白的存在下孵育CD45+白细胞，直到CD45+白细胞至少部分地负载步骤b)中产生的铁结合蛋白与药物活性物质、标记物、或药物活性物质和标记物的复合物；和/或d2)在所述标记物的存在下孵育CD45+白细胞，直至CD45+白细胞至少部分地被标记物标记。在第四方面，本专利技术涉及本专利技术第一方面或第二方面的经分离靶向递送体系或根据本专利技术第三方面的方法可以产生的经分离靶向递送体系作为药剂或诊断剂的用途。在第五方面，本专利技术涉及药物或诊断组合物，其包含本专利技术第一方面或第二方面的经分离的靶向递送体系或根据本专利技术第三方面的方法可以产生的经分离靶向递送体系和药学上可接受的载体和/或合适的赋形剂。在第六方面，本专利技术涉及本专利技术第一方面或第二方面的经分离靶向递送体系或根据本专利技术第三方面的方法可以产生的经分离靶向递送体系用于预防、治疗或诊断以下疾病的用途：以疾病组织中的缺氧区域和/或氧化应激区域为特征的疾病；肿瘤，优选实体瘤和/或其转移瘤，优选乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肺癌、结肠癌，或具有缺氧区域的肿瘤；炎症性疾病；发炎组织，优选发炎关节或关节炎的关节、发炎的肺、发炎的肠或其他发炎组织；淋巴结，优选发炎的淋巴结或在疾病期间，优选不仅在感染期间发展的其他非生理性淋巴结、癌症、或自身免疫性疾病；或缺血性区域，特别是皮肤伤口中或器官梗塞(心脏)或视网膜缺血后的缺血性区域，或用于预防性或治疗性疫苗接种的用途，特别是为了预防或治疗感染性疾病或癌症。该方面还包括针对生理或非生理淋巴结的抗原，以对个体接种疫苗或诱导免疫记忆。具体实施方式在以下详细描述本专利技术前，应当理解，本专利技术不限于本文描述的特定方法、方案和试剂，因为这些方法、方案本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经分离的靶向递送体系，其包含CD45

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.22 EP PCT/EP2016/064484;2016.06.22 EP PCT/1.一种经分离的靶向递送体系，其包含CD45+单核细胞、CD45+单核细胞-巨噬细胞、CD45+淋巴细胞和/或CD45+粒细胞(通常称为“CD45+白细胞”)，在所述细胞中包含一种或多于一种铁结合蛋白与药物活性物质、标记物、或药物活性物质和标记物的复合物。2.一种经分离的靶向递送体系，其包含CD45+白细胞，所述CD45+白细胞包含一种或多于一种标记物，特别是放射性标记物或其结合物和组合。3.根据权利要求1或2所述的经分离的靶向递送体系，其中所述CD45+白细胞能够由CD34+造血前体细胞产生。4.根据权利要求3所述的经分离的靶向递送体系，其中(i)所述单核细胞是CD11b+单核细胞，优选地选自CD11b+CD14+单核细胞、CD11b+CD16+单核细胞、CD11b+CD14+CD16+单核细胞、CD11b+CD14+MHCII+单核细胞、CD11b+CD14+CD115+单核细胞、CD11b+CD114+单核细胞、CD11b+CD116+单核细胞、CD11b+CCR1+单核细胞、CD11b+CCR2+单核细胞、CD11b+CX3CR+单核细胞、CD11b+CXR4+单核细胞、CD11b+CXR6+单核细胞和CD11b+CD14+CD33+单核细胞，但不是其分化受以下转录因子控制的树突细胞：IFN-调节因子8(IRF8)、核因子白介素(IL)-3-调节的蛋白质(NFIL3)、碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样-3(BATF3)或转录因子Re1B(NF-KB亚基)-RELB、Spi-1-原型-致癌基因(PU/1)、无毛重组结合蛋白抑制剂(RBPJ)、IFN-调节因子4(IRF4)或转录因子E2-2(也称为TCF4)；(ii)所述分化的单核细胞选自巨噬细胞、活化的巨噬细胞，优选CD11b+巨噬细胞，更优选CD11b+CD16+巨噬细胞、CD11b+CD32+巨噬细胞、CD11b+CD64+巨噬细胞、CD11b+CD68+巨噬细胞，优选CD11b+CD86+M1巨噬细胞，其优选地产生iNOS和/或分泌白介素12(IL-12)，或优选CD11b+CCR2+M2巨噬细胞、CD11b+CD204+M2巨噬细胞、CD11b+CD206+M2巨噬细胞、CD11b+CD204+CD206+M2巨噬细胞、CD11b+主要组织相容性复合物II+(MHCII+)(低表达或高表达)M2巨噬细胞、CD11b+CD200R+M2巨噬细胞、CD11b+CD163+M2巨噬细胞或活化的巨噬细胞，其产生精氨酸酶和/或分泌白介素10(IL-10)；优选分化的单核细胞-巨噬细胞不是Lox1+、CXCR7+和NRF2+泡沫细胞；(iii)表达至少一种趋化因子受体或至少一种生长因子受体的单核细胞-巨噬细胞或活化的单核细胞-巨噬细胞，所述趋化因子受体优选地选自CCR1、CCR2+、CXCR4+和CXCR6+，所述生长因子受体优选地选自巨噬细胞集落刺激因子受体(CD115)、粒细胞集落刺激因子受体(CD114)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体(由CD116和CD131组成)；具有这些特征的单核细胞特别适合于治疗炎症性病症和癌症；(iv)所述淋巴细胞选自CD3+和CD4+或CD8+T淋巴细胞或CD19+、CD20+、CD21+、CD19+CD20+、CD19+CD21+、CD20+CD21+或CD19+CD20+CD21+B淋巴细胞；和天然杀伤(NK)细胞；或(v)所述粒细胞选自嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，所述嗜中性粒细胞优选为CD66b+嗜中性粒细胞，所述嗜酸性粒细胞优选为CD193+嗜酸性粒细胞。5.根据权利要求4所述的经分离的靶向递送体系，其中所述活化的巨噬细胞：(i)能够通过单核细胞或巨噬细胞与能够改变巨噬细胞上的表达标志物的因子的体外孵育产生，优选地(a)与至少一种M1诱导物的体外孵育产生，(b)与至少一种M2诱导物的体外孵育产生，(c)或与能够改变巨噬细胞分泌细胞因子、趋化因子和/或产生iNOS、精氨酸酶或其他免疫调节酶能力的因子的体外孵育产生，所述细胞因子优选为IL-10和IL-12；(ii)其特征在于抗原CD64、CD86、CD16、CD32中至少一种的表达，MHCII的高表达，和/或iNOS和/或IL-12的产生；(iii)能够通过单核细胞或巨噬细胞与能够诱导巨噬细胞吞噬能力的因子的体外孵育产生；(iv)其特征在于抗原CD204、CD206、CD200R中至少一种；CCR2、转铁蛋白受体(TfR)、CXC模序趋化因子受体4(CXCR4)、CD163，和/或T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域2(TIM-2)的表达，和/或显示MHCII的低表达；(v)具有吞噬能力；和/或(vi)能够分泌细胞因子或产生诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)(或其他促炎症性化合物)、精氨酸酶或其他抑制免疫力/抗炎化合物，所述细胞因子优选为IL-12或IL-10。6.根据权利要求5所述的靶向递送体系，其中：(i)M1诱导物选自LPS、INF-γ以及病毒感染和细菌感染；或(ii)M2诱导物选自IL-4、IL-10、IL-13、抗原和抗体的免疫复合物、IgG、热活化的γ球蛋白、糖皮质激素、TGF-β、IL-1R、CCL-2、IL-6、M-CSF、PPARγ激动剂、白细胞抑制因子、腺苷、蠕虫和真菌感染。7.根据权利要求4所述的经分离的靶向递送体系，其中所述单核细胞-巨噬细胞：(i)能够由CD34+造血前体细胞产生；(ii)能够通过单核细胞/单核细胞-巨噬细胞与至少一种诱导物的体外孵育产生，所述诱导物优选M1或M2诱导物，更优选至少一种M2诱导物；(iii)其特征在于以下抗原中的至少一种的表达：TfR+、CD163+、TIM-2+、CD14+、CD16+、CD33+、和/或CD115+；(iv)其特征在于以下抗原中的至少一种的表达：TfR+、CD163+、TIM-2+、CXCR4+、CD14+和/或CD16+；和/或(v)具有吞噬能力。8.根据权利要求7所述的靶向递送体系，其中：(i)M1诱导物选自LPS、INF-γ或病毒感染或细菌感染；(ii)M2诱导物选自IL-4、IL-10、IL-13、抗原和抗体的免疫复合物、IgG、热活化的γ球蛋白、糖皮质激素、TGF-β、IL-1R、CCL-2、IL-6、M-CSF、PPARγ激动剂、白细胞抑制因子、癌症条件培养基、癌细胞、腺苷和蠕虫或真菌感染。9.根据权利要求4所述的经分离的靶向递送体系，其中所述淋巴细胞：(i)能够由血液、脾脏或骨髓获得，或能够由CD34+前体细胞产生；(ii)是免疫活性淋巴细胞；(iii)表达抗原特异性T细胞受体；和/或(iv)其特征在于以下抗原中的至少一种的表达：(a)CD3+和CD4+或CD8+或(b)：CD19+、CD20+、CD21+、CD19+CD20+、CD19+CD21+、CD20+CD21+，或CD19+CD20+CD21+抗原，并优选地能够产生免疫球蛋白。10.根据权利要求4所述的经分离的靶向递送体系，其中所述粒细胞：(i)能够由血液、脾脏或骨髓获得，或能够由CD34+前体细胞产生；(ii)其特征在于CD66b+和/或CD193+中的至少一种的表达；(iii)是分叶核白细胞，其特征在于其细胞质中存在颗粒；和/或(iv)其特征在于以下至少一种的表达：TfR+，CD163+，TIM-2+和/或CXCR4+。11.根据权利要求4所述的经分离的靶向递送体系，其中NK细胞：(i)能够由血液、脾脏或骨髓获得，或能够由CD34+前体细胞产生；和/或(ii)其特征在于缺少CD3表达和以下至少一种的表达：CD56+和/或CD94+、CD158a+CD158f+CD314+CD335+。12.根据权利要求1至11中任一项所述的经分离的靶向递送体系，其中所述铁结合蛋白选自铁蛋白，优选重(H)型铁蛋白、轻(L)铁蛋白和/或线粒体铁蛋白；血红蛋白，优选血红蛋白A、血红蛋白AS、血红蛋白SC、血红蛋白C、血红蛋白D、血红蛋白E、血红蛋白F、血红蛋白H；血红蛋白-触珠蛋白复合物；血色素结合蛋白；转铁蛋白；和乳铁蛋白。13.根据权利要求1至12中任一项所述的经分离的靶向递送体系，其中所述药物活性物质选自蛋白质、核酸、分子量小于1.5kD的非蛋白质非核酸化合物，优选抗癌药物，特别是抑制细胞生长的药物、细胞毒性药物及其前药；抗动脉硬化药物；和消炎药物；和...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛格达莱娜·克鲁尔，艾琳·本尼，保拉·贝奥科，托马什·里亚盖尔，阿尔贝托·博菲，亚历山德拉·舒尔茨，索非娅·普利希，卡塔日娜·托内茨卡，卡塔日娜·乌乐维奇，巴特勒梅伊科·塔恰克，卢卡什·基拉加，
申请(专利权)人：塞尔丽思股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH