一种高纯度肝素钠的制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种高纯度肝素钠的制备工艺，具体包括以下步骤：S1、酶解盐解除蛋白：将10‑12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0‑60.0℃，S2、一次氧化，S3、沉淀，S4、二次氧化，S5、再次沉淀，S6、冷冻干燥，本发明专利技术涉及医药技术领域。该高纯度肝素钠的制备工艺，可实现通过采取酶解盐解一体式解离方式，在高温解离过程中，保护肝素不受破坏，运用不同浓度乙醇除去不同杂质，在氧化过程中，加入无水碳酸钠和无水硫酸钠，以特定比例配制，解决了现有肝素钠精制时因对肝素钠结构产生破坏而难以得到高纯度的肝素钠的问题，同时运用HPLC方法，对各步骤中去除的杂质进行检测，操作简单，产品收率高，更有效的控制成品质量。

Preparation of a High Purity Heparin Sodium

The invention discloses a preparation process of high purity heparin sodium, which includes the following steps: S1, enzymatic hydrolysis of salt to remove protein: heating purified water of 10 12 times the weight of crude heparin sodium to 50.0 60.0 C, S2, primary oxidation, S3, precipitation, S4, secondary oxidation, S5, secondary precipitation, S6, freeze-drying. The invention relates to the field of pharmaceutical technology. The preparation process of the high purity heparin sodium can be realized by adopting the enzymatic hydrolysis-salting dissociation method. During the high temperature dissociation process, the heparin can be protected from being destroyed. Different impurities can be removed by using different concentration of ethanol. In the oxidation process, anhydrous sodium carbonate and anhydrous sodium sulfate are added to prepare the heparin sodium in a specific proportion, which solves the problem that the structure of heparin sodium is destroyed during the refining of the existing heparin sodium. It is difficult to obtain high purity heparin sodium. At the same time, the impurities removed in each step are detected by using the method of HPLC. The operation is simple, the product yield is high, and the quality of the finished product can be controlled more effectively.

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度肝素钠的制备工艺
本专利技术涉及医药
，具体为一种高纯度肝素钠的制备工艺。
技术介绍
肝素广泛存在于哺乳动动的内脏和肠粘膜中，主要由D-葡糖胺，L-艾杜糖醛酸，M-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，作为一种天然抗凝血物质，在抗凝血、促进质蛋白酶释放和补体溶细胞体系等方面具有良好的活性，广泛用于流行性脑炎、败血症、血栓塞、急性心肌梗塞、动脉硬化等治疗，肝素易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，分子结构单元中含有5个硫酸基和2个羟基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子发生反应生成盐，由于肝素在动物体中主要以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在，故使得目前动物体中提取的粗品肝素钠中残留一定量的蛋白质，对肝素钠的活性产生一定影响。目前肝素的精制过程主要是对粗品肝素钠进行除蛋白、核酸等物质提纯和脱色，达到国家药典标准要求，国内外发表了许多除肝素中丝氨酸的方法，但是均需分离特定分子量的肝素片段，然后除去特定肝素片段的丝氨酸残基，无法达到工业化生产要求，而现有肝素提取纯化方法大多采取酸碱处理去除杂质蛋白、核酸等物质，采用高锰酸钾氧化和过氧化氢氧化去除色素类物质，但是高锰酸钾氧化法会产生二氧化锰吸附肝素的问题，使肝素活性损失大，导致肝素钠回收率低、色泽差，过氧化氢氧化法，因产品色泽较好，目前被广泛应用，但由于现有技术对氧化剂加入量及反应条件难以控制，往往在实际生产中会加入过量的氧化剂，而反应条件也不适宜，最终对肝素钠结构的破坏，使其收率低，活性低，难以得到较高纯度的精品肝素钠产品。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种高纯度肝素钠的制备工艺，解决了现有肝素钠精制时因对肝素钠结构产生破坏而难以得到高纯度的肝素钠，易对肝素钠结构造成破坏，使其收率低，活性低的问题。(二)技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种高纯度肝素钠的制备工艺，具体包括以下步骤：S1、酶解盐解除蛋白：将10-12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0-60.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％-5.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解至少1小时，溶解完毕后，将料液温度降至35.0-45.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0-45.0℃，用氢氧化钠溶液调节pH值至7-9，保温酶解反应3.0-5.0小时，加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的亚硫酸氢钠，升温至50.0-70.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0-90.0℃，保温反应30-60分钟，加入无水碳酸钠，保温搅拌反应30-60分钟后过滤，用HPLC法对过滤去除杂质进行检测分析；S2、一次氧化：调节滤液温度至25.0-40.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10-11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化12-18h；S3、沉淀：氧化完毕后，过滤料液，按料液体积：乙醇体积1:1.0-1：1.2加入已升温至40.0-50.0℃的乙醇，控制料液乙醇浓度40±2％，温度为35.0-40.0℃，保温静置沉淀4±1h，抽去上清液，将上清中杂质复沉，用HPLC法对复沉杂质进行检测分析；S4、二次氧化：向氧化沉淀罐Ⅱ中加入肝素钠粗品重量6.9-7.3倍的纯化水，调节料液温度至25.0-30.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10-11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，搅拌溶解，再按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化12-18h；S5、再次沉淀：氧化完毕后，过滤料液，按料液体积:乙醇体积＝1:1.1-1：1.3加入已升温至40.0-50.0℃的乙醇，控制料液乙醇浓度46±2％，温度为35.0-40.0℃，保温静置沉淀4±1h，抽去上清液，将上清中杂质复沉，用HPLC法对复沉杂质进行检测分析；S6、冷冻干燥：用肝素钠粗品3倍量的纯化水使沉淀物充分溶解，用4mol/L盐酸将pH值调到6.0±0.5，过滤，冷冻干燥，即可得到高纯度肝素钠。优选的，所述步骤S1中胰蛋白酶的比例为粗品重量与效价比的1.2-1.8倍。优选的，所述步骤S1中无水氯化钙浓度为2.0％-3.0％。优选的，所述步骤S1中无水碳酸钠浓度为2.0％-3.0％。优选的，所述步骤S2和步骤S4中过氧化氢的原浓度均为30％。本专利技术提供的肝素钠的制备方法，融合酶解氧化为一体，在粗品肝素钠中加入蛋白酶将其中含有的蛋白进行酶解，过滤去除蛋白，再通过一次氧化沉淀，去除硫酸皮肤素和硫酸软骨素，通过二次氧化沉淀去除硫酸乙酰肝素，在氧化过程中，加入保护剂-无水碳酸钠和无水硫酸钠，多次氧化，避免肝素结构受到破坏，同时将结合在肝素上所有得杂质分离去除，最后对得到的肝素钠溶液，冷冻干燥，得到纯品，此方法保持了肝素结构完整性，所得肝素钠纯度高，杂质少，在此专利技术中，我们研究了在酶解和氧化过程中，保护剂对产品质量的影响，确定了保护剂的重要性，研究实例如下：研究实例1：将10倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解1小时，降温至35.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0℃，滴加4mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH值至7，保温酶解反应3.0小时；升温至50.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0℃，保温反应30分钟，加入溶液体积2.0％无水碳酸钠，保温搅拌反应30分钟后过滤，沉淀，沉淀物脱水干燥，记样品1。研究实例2：将10倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解1小时，降温至35.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0℃，滴加4mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH值至7，保温酶解反应3.0小时，加入溶液体积0.3％浓度的无水碳酸钠和0.3％亚硫酸氢钠，升温至50.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0℃，保温反应30分钟，加入溶液体积2.0％无水碳酸钠，保温搅拌反应30分钟后过滤，沉淀，沉淀物脱水干燥，记样品2。研究实例3：将10倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解1小时，降温至35.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0℃，滴加4mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH值至7，保温酶解反应3.0小时，加入溶液体积0.3％浓度的无水碳酸钠和0.25％亚硫酸氢钠，升温至50.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0℃，保温反应30分钟，加入溶液体积2.0％无水碳酸钠，保温搅拌反应30分钟后过滤，沉淀，沉淀物脱水干燥，记样品3。通过对三批样品的检测结果，发现在酶解过程中，如果不加入任何保护剂，样品活性较低，在酶解过程中破坏了肝素结构，而加入溶液体积0.3％浓度的无水碳酸钠和0.3％亚硫酸氢钠的样品2活性低于样品3，最终确定了酶解过程中保护剂的种类与用量。研究实例4：将样品合并溶解，调节料液温度至25.0℃，用4mo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高纯度肝素钠的制备工艺，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、酶解盐解除蛋白：将10‑12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0‑60.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％‑5.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解至少1小时，溶解完毕后，将料液温度降至35.0‑45.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0‑45.0℃，用氢氧化钠溶液调节pH值至7‑9，保温酶解反应3.0‑5.0小时，加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的亚硫酸氢钠，升温至50.0‑70.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0‑90.0℃，保温反应30‑60分钟，加入无水碳酸钠，保温搅拌反应30‑60分钟后过滤，用HPLC法对过滤去除杂质进行检测分析；S2、一次氧化：调节滤液温度至25.0‑40.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10‑11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化12‑18h；S3、沉淀：氧化完毕后，过滤料液，按料液体积：乙醇体积1:1.0‑1：1.2加入已升温至40.0‑50.0℃的乙醇，控制料液乙醇浓度40±2％，温度为35.0‑40.0℃，保温静置沉淀4±1h，抽去上清液，将上清中杂质复沉，用HPLC法对复沉杂质进行检测分析；S4、二次氧化：向氧化沉淀罐Ⅱ中加入肝素钠粗品重量6.9‑7.3倍的纯化水，调节料液温度至25.0‑30.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10‑11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，搅拌溶解，再按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化12‑18h；S5、再次沉淀：氧化完毕后，过滤料液，按料液体积:乙醇体积＝1:1.1‑1：1.3加入已升温至40.0‑50.0℃的乙醇，控制料液乙醇浓度46±2％，温度为35.0‑40.0℃，保温静置沉淀4±1h，抽去上清液，将上清中杂质复沉，用HPLC法对复沉杂质进行检测分析；S6、冷冻干燥：用肝素钠粗品3倍量的纯化水使沉淀物充分溶解，用4mol/L盐酸将pH值调到6.0±0.5，过滤，冷冻干燥，即可得到高纯度肝素钠。...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度肝素钠的制备工艺，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、酶解盐解除蛋白：将10-12倍肝素钠粗品重量的纯化水升温至50.0-60.0℃，搅拌状态下加入纯化水体积2.0％-5.0％的肠衣盐，溶解后加入肝素钠粗品，继续搅拌溶解至少1小时，溶解完毕后，将料液温度降至35.0-45.0℃，加入溶解好的胰酶，搅拌均匀，控制温度35.0-45.0℃，用氢氧化钠溶液调节pH值至7-9，保温酶解反应3.0-5.0小时，加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的亚硫酸氢钠，升温至50.0-70.0℃，加入溶解好的无水氯化钙，升温至80.0-90.0℃，保温反应30-60分钟，加入无水碳酸钠，保温搅拌反应30-60分钟后过滤，用HPLC法对过滤去除杂质进行检测分析；S2、一次氧化：调节滤液温度至25.0-40.0℃，用4mol/L氢氧化钠溶液调节料液pH值至10-11，再加入料液体积0.3％的无水碳酸钠和0.25％的无水硫酸钠，按料液体积的2.0％加入氯化钠，加入料液体积2.0％的过氧化氢氧化12-18h；S3、沉淀：氧化完毕后，过滤料液，按料液体积：乙醇体积1:1.0-1：1.2加入已升温至40.0-50.0℃的乙醇，控制料液乙醇浓度40±2％，温度为35.0-40.0℃，保温静置沉淀4±1h，抽去上清液，将上清中杂质复沉，用HPLC法对复沉杂质进行检测分析；S4、二次氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：董凯，干浩，韩自江，黄珑，肖晶晶，汤恒义，袁清明，程侃，彭晨露，
申请(专利权)人：湖北亿诺瑞生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42