一种沉默IV型胶原表达的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了能沉默IV型胶原表达的siRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明专利技术利用RNA干扰的策略沉默肝癌细胞自身IV型胶原的表达，可以抑制肿瘤相关巨噬细胞来源的CCL18促进肝癌浸润迁移的作用，进而实现抗肿瘤的目的。

Silencing siRNA expression of collagen IV and its application

The invention discloses the application of siRNA capable of silencing the expression of type IV collagen in the preparation of antineoplastic drugs. The invention silences the expression of type IV collagen of hepatocellular carcinoma cells by RNA interference strategy, and can inhibit the effect of CCL18 from tumor-related macrophages on promoting the invasion and migration of hepatocellular carcinoma, thereby realizing the purpose of anti-tumor.

【技术实现步骤摘要】
一种沉默IV型胶原表达的siRNA及其应用
本专利技术涉及RNA沉默
，尤其是一种沉默IV型胶原表达的siRNA及其应用。
技术介绍
肿瘤的远处转移是通过血循环或淋巴循环实现的，以前的研究认为肿瘤细胞是以单个细胞的形式通过血循环或淋巴循环迁移，近期研究认为肿瘤细胞是以一个细胞团的形式迁移，迁移的细胞团包含肿瘤细胞、成纤维细胞、免疫细胞和细胞外基质(ECM)，实质上就是肿瘤细胞是带着其赖以生存的“土壤“迁移，可以最大限度避免失巢性凋亡。在迁移的细胞团中，肿瘤细胞自身分泌的细胞外基质起关键的作用。肿瘤微环境中，肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源的CCL18(是一种趋化因子)与肝癌细胞上的功能性受体PITPNM3结合，促进肝癌细胞表达分泌细胞外基质第IV型胶原，IV型胶原分泌到肿瘤微环境中，即与肝癌细胞表面的整合素受体结合，促进肝癌细胞粘附、浸润、迁移，抵抗失巢性凋亡。与细胞外基质(ECM)密切相关的肿瘤浸润迁移严重影响患者预后，肿瘤细胞浸润迁移包含局部浸润和远处转移两个环节。肿瘤局部浸润实质上是肿瘤细胞在重塑的细胞外基质上以阿米巴运动的方式爬行，在此过程中细胞外基质重塑起关键的作用，因为重塑ECM的支撑是肿瘤细胞脱离原发灶、抵抗失巢性凋亡、迁移到原发灶外的必要条件。多个研究认为，肿瘤微环境中存在多种基质细胞，其中肿瘤相关成纤维细胞大量分泌细胞外基质蛋白(ECM)，发挥细胞外基质重塑的作用，促进肿瘤的浸润迁移。近期研究认为肿瘤细胞也会表达分泌ECM，发挥ECM重塑的作用。关于肿瘤微环境中ECM对肿瘤浸润迁移作用的研究，大多集中在对成纤维细胞产生ECM的研究，近年关注到肿瘤自身分泌的ECM对肿瘤转移的作用，但没有关于微环境对肿瘤自身分泌的ECM调控作用的报导，没有肿瘤自身分泌ECM对肿瘤浸润迁移作用的系统研究，更没有针对肿瘤微环境或肿瘤细胞本身抑制肿瘤自身ECM表达从而抑制肿瘤浸润迁移的策略；肿瘤微环境与肿瘤自身分泌ECM的关系、调控肿瘤细胞分泌ECM的机制、肿瘤细胞自身分泌ECM在肿瘤迁移中发挥的具体作用没有研究报导；如何调控肿瘤微环境，抑制细胞外基质重塑，达到抑制肿瘤迁移的作用，还没有研究报导。
技术实现思路
基于上述问题，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能沉默IV型胶原表达的siRNA，其能抑制IV型胶原的表达、抑制癌细胞粘附于细胞外基质、抑制癌细胞的浸润和迁移。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案包括如下两个方面：在第一个方面，本专利技术提供了能沉默IV型胶原表达的siRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。优选地，所述siRNA为靶向CCL18的受体PITPNM3的siRNA、靶向信号分子Snail的siRNA和靶向CoL4α1基因的siRNA中的至少一种。优选地，所述靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；或者，所述靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。应当说明的是，靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列包括但不限于SEQIDNO.3～6所示的碱基序列，还包括与SEQIDNO.3～6所示的碱基序列1个多个碱基不同的siRNA，只要siRNA能靶向结合CoL4α1基因进而使得CoL4α1基因的表达水平降低，抑制CCL18对癌细胞的浸润和迁移促进作用即可，这样的siRNA均落在本专利技术的保护范围内。优选地，所述肿瘤为肝癌。优选地，所述肿瘤为乳腺癌。在第二个方面，本专利技术提供了一种抗肿瘤的药物，所述药物中含有能沉默IV型胶原表达的siRNA。优选地，所述siRNA为靶向CCL18的受体PITPNM3的siRNA、靶向信号分子Snail的siRNA和靶向CoL4α1基因的siRNA中的至少一种。优选地，所述靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示，或者如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。优选地，所述靶向CCL18的受体PITPNM3的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示，或者如SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示。优选地，所述靶向信号分子Snail的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.11和SEQIDNO.12所示，或者如SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示。优选地，所述肿瘤为肝癌或乳腺癌。综上所述，本专利技术的有益效果为：本专利技术利用RNA干扰的策略沉默肝癌细胞自身IV型胶原的表达，可以抑制肿瘤相关巨噬细胞来源的CCL18促进肝癌浸润迁移的作用，进而实现抗肿瘤的目的。附图说明图1为肝癌细胞IV型胶原表达量检测结果图；其中，图1A为不同浓度CCL18刺激下肝癌细胞IV型胶原表达量对比结果图；图1B为靶向PITPNM3基因的siRNA对相同浓度CCL18刺激下肝癌细胞PITPNM3下游信号分子Snail表达的影响效果图；图1C为靶向PITPNM3基因的siRNA对相同浓度CCL18刺激下肝癌细胞IV型胶原表达的影响效果图；图1D为靶向Snail基因的siRNA对相同浓度CCL18刺激下肝癌细胞IV型胶原表达的影响效果图，其中mock表示只加转染试剂组，Un表示空白对照组，si-GFP、si-PI-1、si-PI-2、si-Sn1、si-Sn2分别为对应siRNA处理组；图2为CCL18浓度相同时，靶向CoL4α1基因的siRNA对肝癌细胞的粘附、浸润和迁移影响的结果图；其中，adherence表示粘附，invasion表示浸润，migration表示迁移，mock表示只加转染试剂组，Un表示CCL18处理组；图3为不同浓度的CCL18对肝癌细胞的粘附、浸润和迁移的影响的结果图；其中，adherence表示粘附，invasion表示浸润，migration表示迁移；图4为CCL18浓度相同时，靶向PITPNM3的siRNA对肝癌细胞的粘附、浸润和迁移的影响的结果图；其中，adherence表示粘附，invasion表示浸润，migration表示迁移，mock表示只加转染试剂组，Un表示CCL18处理组；图5为CCL18浓度相同时，靶向Snail的siRNA对肝癌细胞的粘附、浸润和迁移影响的结果图。其中，adherence表示粘附，invasion表示浸润，migration表示迁移，mock表示只加转染试剂组，Un表示CCL18处理组。具体实施方式现有技术方案主要靶向肿瘤细胞自身的特性进行治疗，而没有关注肿瘤微环境对肿瘤的作用。本专利技术关注肿瘤微环境对肝癌细胞产生的作用，通过调控肿瘤微环境中CCL18所引发的肝癌细胞对IV型胶原的表达，起到抑制肝癌浸润迁移的作用。本申请专利技术人的研究结果提示：肝癌细胞自身分泌的IV型胶原，以可溶的状态，迅速与自身的粘附分子整合素结合，引起整合素聚集、细胞的粘附功能增强，迅速给予自身支撑、防止失巢凋亡、实现浸润迁移，是肿瘤细胞适应迁移过程中的周围环境调节自身功能的一部分。肿瘤细胞分泌的胶原是细胞在迁移过程中自身提供的、即刻可以抓住的防止凋亡的“救命稻草”，只有通过肿瘤微环境中的CCL18对肿瘤细胞胶原的表达进行调控，才能实现肿瘤细胞自身的“托举”、实现肿瘤细胞与自身分泌的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.能沉默IV型胶原表达的siRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.能沉默IV型胶原表达的siRNA在制备抗肿瘤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述siRNA为靶向CCL18的受体PITPNM3的siRNA、靶向信号分子Snail的siRNA和靶向CoL4α1基因的siRNA中的至少一种。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述靶向CoL4α1基因的siRNA的碱基序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈静琦，张慧，曾波航，朱必胜，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：广东,44