circ_2157及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断试剂制造技术

本发明专利技术属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种环状RNA circ_2157及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和相应的制剂。本发明专利技术收集多例鼻咽癌组织和正常炎性鼻咽上皮组织，利用qRT‑PCR技术检测了circ_2157的表达情况。结果显示，与12例正常炎性鼻咽上皮组织相比，circ_2157在29例鼻咽癌组织中明显高表达，在鼻咽癌组中circ_2157表达水平大约是正常炎性鼻咽上皮的5倍，两组数据的差异具有统计学意义(P＝0.0279)。因此，circRNA circ_2157在鼻咽癌组织中高表达，circ_2157对鼻咽癌的发生发展可能具有重要的生物学功能，可以作为鼻咽癌诊断分子标记物。

Circ_2157 and its application in preparation of diagnostic agents for nasopharyngeal carcinoma and diagnostic reagents

The invention belongs to the technical field of tumor molecular biology, in particular to a cyclic RNA circ_2157 and its application in the preparation of nasopharyngeal cancer diagnostic preparations and corresponding preparations. The present invention collects many nasopharyngeal carcinoma tissues and normal inflammatory nasopharyngeal epithelial tissues, and detects the expression of circ_2157 by qRT_PCR technology. The results showed that compared with 12 normal inflammatory nasopharyngeal epithelial tissues, circ_2157 was highly expressed in 29 nasopharyngeal carcinoma tissues. The expression level of circ_2157 in nasopharyngeal carcinoma group was about five times higher than that in normal inflammatory nasopharyngeal epithelial tissues. The difference between the two groups was statistically significant (P=0.0279). Therefore, circRNA and circ_2157 are highly expressed in nasopharyngeal carcinoma. circ_2157 may play an important biological role in the occurrence and development of nasopharyngeal carcinoma and can be used as a molecular marker for the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

【技术实现步骤摘要】
circ_2157及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断试剂
本专利技术属于肿瘤分子生物学
，具体涉及一种环状RNAcirc_2157及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和相应的制剂。
技术介绍
目前环状RNA(CircularRNA)是个研究热点，circRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNA(precursormessengerRNA,pre-mRNA)反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exoncircularization)和内含子环化(introncircularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-drivencircularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-drivencircularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体(splicedonor)攻击5’端剪接受体(splicereceptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circularintronicRNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后HsuMT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。在1996年，circRNA在人类细胞中被发现，随着RNA-seq新一代测序技术的发展，近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。筛选和验证更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该
的国际竞争力。鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)属于头颈部肿瘤，起源于鼻咽部上皮组织。一般在鼻咽部的后外侧隐窝(罗森缪勒窝，FossaofRosenmüller)处发病，此处的鼻咽癌细胞易侵袭邻近的组织和器官。由于鼻咽癌的发生发展是由积累的家族遗传和体细胞遗传突变及表观遗传学突变导致的多阶段复杂基因调控过程，涉及到原癌基因和抑癌基因的激活和沉默、及ncRNA参与的表观遗传学调控等等。所以鼻咽癌发生发展的具体分子机制尚不明确，而且由于肿瘤异质性和个体差异性，传统的放疗联合化疗的疗效不显著。因此通过circRNA探究其与鼻咽癌发生发展机制，进一步为鼻咽癌的诊断，以及控制鼻咽癌增殖、侵袭和转移将是研究的热点。我们在5-8F细胞的RNA-seq中检测到长度667bp的circ_2157，通过试验发现该环状RNA与鼻咽癌的发生发展存在关联，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。
技术实现思路
本专利技术从5-8F细胞的RNA-seq中发现了大小667bp的circ_2157，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。本专利技术的第一个目的是提供一种新的环状RNAcirc_2157，序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术的第二个目的是提供一种检测所述的环状RNAcirc_2157的试剂在制备诊断或预后鼻咽癌工具上的应用。进一步的，所述的检测环状RNAcirc_2157的试剂为PCR试剂。进一步的，所述的检测环状RNAcirc_2157的试剂为PCR实时定量检测试剂。进一步的，所述的PCR试剂中的引物为：上游引物：5’-GTCGGAGCTTTATTGGGCC-3’；下游引物：5’-ATAGCCTTTCCACCGAACCA-3’。进一步的，所述的PCR试剂中的β-actin内参引物为：上游引物：5’-TCACCAACTGGGACGACATG-3’；下游引物：5’-GTCACCGGAGTCCATCACGAT-3’。本专利技术的第三个目的是提供一种诊断鼻咽癌的制剂，包含检测所述的环状RNAcirc_2157的试剂。进一步的，所述的检测环状RNAcirc_2157的试剂为PCR检测试剂。进一步的，所述的PCR检测试剂中的引物为：上游引物：5’-GTCGGAGCTTTATTGGGCC-3’；下游引物：5’-ATAGCCTTTCCACCGAACCA-3’。进一步的，所述的PCR检测试剂中的β-actin内参引物为：上游引物：5’-TCACCAACTGGGACGACATG-3’下游引物：5’-GTCACCGGAGTCCATCACGAT-3’。本专利技术收集多例鼻咽癌组织和正常炎性鼻咽上皮组织，利用qRT-PCR技术检测了circ_2157的表达情况。结果显示，与12例正常炎性鼻咽上皮组织相比，circ_2157在29例鼻咽癌组织中明显高表达，在鼻咽癌组中circ_2157表达水平大约是正常炎性鼻咽上皮的5倍，两组数据的差异具有统计学意义(P＝0.0279)。因此，circRNAcirc_2157在鼻咽癌组织中高表达，circ_2157对鼻咽癌的发生发展可能具有重要的生物学功能，可以作为鼻咽癌诊断分子标记物。附图说明图1为qRT-RCR检测鼻咽癌组织和非肿瘤鼻炎上皮组织中circ_2157的表达水平；circ_2157的表达水平分析以β-actin作为参照将非肿瘤鼻咽上皮组织标准化为1，N为非肿瘤鼻咽上皮组织，样本数为12；T为鼻咽癌组织，样本数为29，n为样本数量，均采用t检验，P<0.05具有统计学意义。图2为过表达载体图谱。图3为qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系中circ_2157过表达效果；qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circ_2157过表达效果以β-actin作为参照将pcDNA3.1(+)组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。图4为qRT-PCR技术检测鼻咽癌细胞系中circ_2157siRNA的沉默效率；qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circ_2157siRNA的沉默效率；circ_2157表达水平分析以β-actin作为参照，将NCsiRNA组标准化为1，ns代表没有意义，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。图5为体外过表达circ_2157对鼻咽癌细胞增殖的影响；a-c.qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circ_2157过表达效率；d-f.对上述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环状RNA circ_2157，序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种环状RNAcirc_2157，序列如SEQIDNO.1所示。2.检测权利要求1所述的环状RNAcirc_2157的试剂在制备诊断鼻咽癌工具上的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的环状RNAcirc_2157的试剂为PCR试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的环状RNAcirc_2157的试剂为PCR实时定量检测试剂。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的PCR试剂中的引物为：上游引物：5’-GTCGGAGCTTTATTGGGCC-3’；下游引物：5’-ATAGCCTTTCCACCGAACCA-3’。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的PCR试剂中的β-actin内参引物为：上游引物：5’-TCACCAACTGGGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊炜，曾朝阳，郭灿，王忆安，李桂源，李小玲，王裕民，莫勇真，周艳宏，李征，龚朝建，张姗姗，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43