检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序制造方法及图纸

本发明专利技术涉及检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序。提供了用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，该方法包括利用包含已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率，鉴定测试目标核酸的检出准确度能力。

Detection Accuracy Identification Method, Detection Accuracy Identification Device and Detection Accuracy Identification Procedure

The invention relates to a detection accuracy identification method, a detection accuracy identification device and a detection accuracy identification procedure. A method for identifying the detection accuracy of the target nucleic acid is provided. The method includes identifying the detection accuracy of the target nucleic acid by using the reference material containing the known number of nucleic acid molecules and the probability based on the detection of the known number of nucleic acid molecules.

【技术实现步骤摘要】
检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序专利
本公开涉及检出准确度(detectionaccuracy)鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和检出准确度鉴定程序。专利技术背景近年来，分析技术的灵敏度增加已能够实现测量目标以分子数量为单位的测量，并且已需要检出痕量核酸的基因检出技术对食品、环境审核、和医疗保健的工业应用。具体地，对病原体或未经批准的遗传修饰食品的检出通常是为了确认在样品中是不存在的，并且需要高水平的检出准确度。例如，基于利用分子生物学研究领域中常用的以聚合酶链反应(PCR)为代表的核酸扩增的核酸检出方法的技术特点，核酸检出方法据称即使在仅有一个核酸分子的情况下理论上也能够扩增核酸。在通过定量分析检出这种痕量基因时，需要利用标准试剂，并且已提出通过限制稀释方法和基于所得稀释溶液的实时PCR结果选择包括预期分子数量的稀释溶液来稀释具有特定碱基序列的DNA片段的方法(例如，参见日本未审查专利申请公开号2014-33658)。甚至在仅判定检出有无的定性分析中，检出下限(LOD：检出极限)的计算对于测试有效性的确认也很重要。已报道了计算一般测试的LOD的方法(例如，参见ChroniclesofYoungScientistsVol.2，|Issue|Jan-Mar2011[在线]，＜https：//cysonline.org，2015年6月1日，星期一)。然而，核酸检出方法或装置的LOD是某些拷贝的水平。由于难以生成稳定的标准物质(其中拷贝数是某些拷贝的水平)，难以测量出正确的LOD。关于这点，已提出了这样的方法：通过基因重组技术在细胞中引入特定拷贝数的DNA片段，培养细胞，和分离培养的细胞，以生成包含预期拷贝数的DNA片段的标准试剂(例如，参见日本未审查专利申请公开号2015-195735)。然而，还没有提出利用此方法计算LOD的方法。进一步，还考虑到样品自身的差异，报道了重复特定浓度下的测试和计算该特定浓度的检出概率(POD)的方法(参见JournalofAOACInternational，Volume94，Issue1，pp.335-347)。本公开的一个目的是提供能够高度准确地鉴定检出少量核酸分子的检出准确度能力(LOD：检出极限)的检出准确度鉴定方法。
技术实现思路
本公开的检出准确度鉴定方法是用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，并且包括检出准确度能力(detectionaccuracyability)鉴定步骤：利用包含已知数量的核酸分子(aknownnumberofnucleicacidmolecule)的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率，鉴定测试目标核酸的检出准确度能力。本公开可提供能够高度准确地鉴定检出少量核酸分子的检出准确度能力(LOD：检出极限)的检出准确度鉴定方法。附图说明图1A是示例通过对已知数量(1至4个)的核酸分子进行核酸扩增和检出和计算检出概率(％)而获得的检出结果实例的图；图1B是基于图1A的结果对每种分子数量的核酸检出概率作图的直方图；图2是对样品中每种核酸分子数量的泊松(Poisson)分布的实例作图的直方图；图3是对表示未检出样品中的核酸的未检出概率的检出准确度能力的实例作图的曲线；图4是对表示未检出样品中的核酸的未检出概率的检出准确度能力的实例作图的曲线；图5是示例检出准确度鉴定装置的硬件配置的实例的框图；图6是示例检出准确度鉴定装置的功能配置的实例的图；图7是示例按照检出准确度鉴定程序执行的过程的实例的流程图；图8是示例充当本公开使用的标准物质的测试装置的实例的透视图；图9是示例测试装置的实例的侧视图；图10是示例测试装置中将充以核酸的孔的位置的实例的图；图11是示例测试装置中将充以核酸的孔的位置的另一实例的图；图12是对发生DNA复制的细胞的频率和荧光强度之间的关系的实例作图的图形；图13A是示例电磁阀型排出头(discharginghead)的实例的示例图；图13B是示例压电型排出头的实例的示例图；图13C是示例图13B示例的压电型排出头的变型实例的示例图；图14A是示例对施加至压电元件的电压的实例作图的示例图形；图14B是对施加至压电元件的电压的另一实例作图的示例图形；图15A是示例液滴状态实例的示例图；图15B是示例液滴状态实例的示例图；图15C是示例液滴状态实例的示例图；图16是示例被配置以使液滴相继降落于孔中的分配装置的实例的示意图；图17是示例液滴形成装置的实例的示例图；图18是示例图17的液滴形成装置的控制单元的硬件区块的图；图19是示例图17的液滴形成装置的控制单元的功能区块的图；图20是示例液滴形成装置的操作实例的流程图；图21是示例液滴形成装置的变型实例的示例图；图22是示例液滴形成装置的另一变型实例的示例图；图23A是示例飞行液滴中包含两个荧光粒子的情况的图；图23B是示例飞行液滴中包含两个荧光粒子的情况的图；图24是对粒子不彼此重叠时的亮度Li和实际测量的亮度Le之间的关系的实例作图的图形；图25是示例液滴形成装置的另一变型实例的示例图；图26是示例液滴形成装置的另一实例的示例图；图27是示例计数已通过微流路的细胞的方法的实例的示例图；图28是示例拍摄排出头喷嘴部附近部分的图像的方法的实例的示例图；和图29是对概率P(＞2)和平均细胞数量之间的关系作图的图形。具体实施方式(检出准确度鉴定方法、检出准确度鉴定装置、和存储检出准确度鉴定程序)本公开的检出准确度鉴定方法是鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，包括利用包含已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率鉴定测试目标核酸的检出准确度能力的检出准确度能力鉴定步骤，优选包括检出概率信息获得步骤和概率分布获得步骤，并且按需进一步包括其它步骤。本公开的检出准确度鉴定装置是被配置以鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定装置，包括被配置以利用包含已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率鉴定测试目标核酸的检出准确度能力的检出准确度能力鉴定单元，优选包括检出概率信息获得单元和概率分布获得单元，并且按需进一步包括其它单元。本公开的检出准确度鉴定程序是用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定程序，并且致使计算机执行包括以下的过程：利用包含已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出已知数量的核酸分子的概率鉴定测试目标核酸的检出准确度能力。通过例如本公开的检出准确度鉴定装置的控制单元进行控制与实施本公开的检出准确度鉴定方法的意思相同。因此，通过对本公开的检出准确度鉴定装置的描述还将详细描述检出准确度鉴定方法的细节。进一步，本公开的检出准确度鉴定程序通过利用例如计算机作为硬件资源实现了本公开的检出准确度鉴定装置。因此，通过对本公开的检出准确度鉴定装置的描述还将详细描述本公开的检出准确度鉴定程序的细节。本公开的检出准确度鉴定方法、本公开的检出准确度鉴定装置、和本公开的检出准确度鉴定程序基于以下发现。在包含少量核酸分子的样品的核酸检出中，得知检出灵敏度(具体地，系统的检出极限)对于测试准确度的管控具有重要影响。根据相关技术文件，根据泊松分布，取决于提取样品中包含的核酸量，从包含少量核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，所述检出准确度鉴定方法包括利用包括已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出所述已知数量的核酸分子的概率，鉴定所述测试目标核酸的检出准确度能力。

【技术特征摘要】
2017.11.07 JP 2017-2148161.用于鉴定检出测试目标核酸的检出准确度的检出准确度鉴定方法，所述检出准确度鉴定方法包括利用包括已知数量的核酸分子的标准物质和基于检出所述已知数量的核酸分子的概率，鉴定所述测试目标核酸的检出准确度能力。2.根据权利要求1所述的检出准确度鉴定方法，其中所述鉴定包括基于检出所述已知数量的核酸分子的所述概率和概率分布，鉴定所述测试目标核酸的检出准确度能力。3.根据权利要求2所述的检出准确度鉴定方法，其中所述概率分布是泊松分布。4.根据权利要求1至3中任一项所述的检出准确度鉴定方法，其中所述已知数量的核酸分子是10个以下。5.根据权利要求1至4中任一项所述的检出准确度鉴定方法，其中所述已知数量的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：濑尾学，和泉贤，川岛优大，
申请(专利权)人：株式会社理光，
类型：发明
国别省市：日本,JP