一种烟碱标准物质的制备方法及其制备的烟碱标准物质技术

本发明专利技术提供一种烟碱标准物质的制备方法及其制备的烟碱标准物质。该方法主采用凝胶过滤色谱来制备所述烟碱标准物质。另外，本发明专利技术还提供一种由本发明专利技术的方法制备的烟碱标准物质，该标准物质的不确定度更低，可用于检测烟草及烟草制品中的烟碱含量，保证检测结果的准确性和可比性。最后，利用制备得到的烟碱标准物质研制出的标准物质体系，将为烟草制品安全检测和监督管理提供重要的技术支撑。

The preparation method of a nicotine reference material and the nicotine reference material prepared by the method

【技术实现步骤摘要】
一种烟碱标准物质的制备方法及其制备的烟碱标准物质
本专利技术涉及烟草化学检验
，更具体地，本专利技术涉及一种烟碱标准物质的制备方法及其制备的烟碱标准物质。
技术介绍
烟碱是烟草及烟草制品的致瘾性成分，属于烟碱乙酰胆碱受体的典型受体激动剂。烟碱是烟草及烟草制品、卷烟烟气和电子烟液中需要检测的重要化学成分。烟碱含量的高低是影响烟叶和卷烟质量的一个重要指标，极大地影响卷烟抽吸的劲头。采用连续流动分析法测定烟草及烟草制品中的总植物碱时需要使用烟碱标准物质。因此，亟需研制烟碱标准物质，以满足分析需求。由于绝大多数定量分析方法都是基于直接或间接与已知值比较而进行的，因此提供具有已知组成和性质的参考样品(即标准物质)供准确校正对于定量分析来说是非常必要的，这些标准物质在一种或多种性质方面具有高度一致的值。与常规的实验室试剂不同，在同一标准物质样品内部各部分之间以及同批次标准物质的不同样品之间应具有高度一致性，从而使得这些标准物质能够用于在分析过程中校准分析仪器以及分析方法等。标准物质通常要求高纯度，其组成与化学式高度一致并且化学稳定。由于对标准物质的这种严格要求，标准物质的制备一般需要在高度受控的条件下制造，以达到这种高纯度，并尽可能避免所含杂质对后续测定的影响。因此，标准物质的制备比常规分析化学试剂往往要复杂得多，经常需要多种高精度的分离纯化操作步骤(如HPLC等)，同时也造成其高的制造成本。尽管现有技术中已经有烟碱标准物质供应，但并未公开这些烟碱标准物质的制备方法。可以想象，与大多数标准物质一样，这些烟碱标准物质也都是通过复杂和高成本的多步骤高精度分离纯化方法而制得的。因此，仍需要一种简单经济的方法来制备烟碱标准物质。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人意外地发现，利用烟叶作为起始原料，经过溶剂萃取后通过凝胶过滤色谱分离能够得到足以用作标准物质的烟碱溶液产品。基于此，本申请提供一种烟碱标准物质的制备方法。因此，本专利技术的目的是提供一种烟碱标准物质的制备方法；本专利技术的另一目的是提供一种由本专利技术的烟碱标准物质的制备方法制备的烟碱标准物质。本专利技术的又一目的是提供一种上述烟碱标准物质分析待测样品中烟碱含量的用途。实现本专利技术目的的技术方案如下：一方面，本专利技术提供一种烟碱标准物质的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)称取烟叶样品，加入5％的氢氧化钠溶液中水浴搅拌，超声萃取、过滤并收集滤液，浓缩得烟碱溶液；2)称取氨基改性交联葡聚糖凝胶填料，加入色谱级甲醇溶胀，待凝胶充分溶胀后进行装柱，并用去离子水和色谱级甲醇交替清洗凝胶填料，重复3次，得色谱柱；3)将步骤1)制备的烟碱溶液施加至步骤2)填装的色谱柱，以体积比为1:1-1:4的乙醇和异丙醇作为流动相进行洗脱，控制色谱柱的温度为35℃，调节流动相的流速为2-4ml/min，每个流分接液50ml，将所接流分均进行密封避光保存；4)将步骤3)得到的第三流分经真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到纯度为99.7％以上的烟碱标准物质。其中，在步骤1)中，优选地，所述烟叶可以是烤烟或白肋烟；优选地，所述烟叶样品与5％氢氧化钠溶液的重量体积比为1:10-1:30，更优选地为1:25；优选地，所述超声萃取进行2-6h，更优选进行4h；在步骤2)中，优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料是由选自N，N-二甲基甲酰胺、4-肼基-4-氧代丁酸、己二酸二酰肼和马来酰亚胺改性的交联葡聚糖凝胶；更优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料是由4-肼基-4-氧代丁酸或己二酸二酰肼改性的交联葡聚糖凝胶填料；进一步优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料是由己二酸二酰肼改性的交联葡聚糖凝胶填料。优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料的交联度为G-25；优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料的凝胶粒度为20-50μm；优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料通过如下方法制备：向反应器中加入45％(质量比)的改性剂(比如N,N-二甲基甲酰胺、4-肼基-4-氧代丁酸、己二酸二酰肼和马来酰亚胺)，加入50％(质量比)交联葡聚糖凝胶，升温至60±2℃恒温、搅拌、回流反应60min，滴加5％(质量比)的1，6-己二异氰酸酯，搅拌均匀于60±2℃恒温反应8h。反应完毕后用乙醇洗涤，取出后放真空干燥箱中干燥，得到氨基改性交联葡聚糖凝胶填料。在本专利技术的一些实施方案中，采用上述方法制备的氨基改性交联葡聚糖凝胶对烟碱具有很好的纯化效果，反复使用次数多，既成本低又绿色环保。在步骤3)中，优选地，所述乙醇和异丙醇的体积比为1:2；优选地，流动相的流速为3.5ml/min；另一方面，本专利技术还提供一种由上述方法制备的烟碱标准物质。优选地，所述烟碱标准物质的纯度≥99.7％；又一方面，本专利技术提供一种上述烟碱标准物质分析待测样品中烟碱含量的用途。与现有技术相比，本专利技术还具有以下有益技术效果：从烟叶提取的烟碱粗品中含有多种与烟碱结构非常相似的杂质，它们的化学性质与烟碱本身也非常相似。因此，通过常规的分离纯化方法很难将这些杂质与烟碱分离开。本专利技术的专利技术人为制备烟碱标准物质进行了大量实验研究，在此过程中，专利技术人意外地发现，用烟叶提取的烟碱粗品作为原料通过本专利技术特定的凝胶过滤色谱可以获得可用作标准物质的烟碱产品。经过HPLC检测，这种烟碱产品的纯度大于99.7％。本申请的专利技术人通过对萃取条件的筛选，使烟碱的提取产率显著得到了提高。另外，在本文所述的分离方法中采用了本专利技术特定氨基改性的葡聚糖凝胶填料制备的色谱柱，其不仅能够将烟碱与其它分子量差异较大的杂质分离开，同时还能将与烟碱结构相近的杂质分子分离，从而得到纯度显著提高的烟碱标准物质。最后，本专利技术通将分离后的流分进行冷冻干燥处理，得到了纯度进一步提高的烟碱标准物质。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。除非特别指出，以下实施例按照本领域技术人员已知的常规方法进行，所用试剂使用本领域在相应分析和制备中常用级别的试剂。除非特别指出，本文中所述百分含量为质量百分比。仪器和试剂：质谱仪：安捷伦7890-5975C(Agilent，USA)，EI离子源。核磁共振谱仪：Inova-500核磁共振仪，使用TMS为内标。红外色谱仪：布鲁克Tensor27。HPLC：Agilent1260Series高效液相色谱仪，配有四元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)，AgilentChemStation化学工作站。甲醇购于Fisher公司，色谱级；水为去离子水；醋酸铵为分析纯，购自北京化工厂。实施例1氨基改性交联葡聚糖凝胶填料的制备1.1向反应器中加入45％的N,N-二甲基甲酰胺，然后加入50％交联葡聚糖凝胶，升温至60±2℃恒温、搅拌、回流反应60min，滴加5％的1，6-己二异氰酸酯，搅拌均匀，于60±2℃恒温反应8h。反应完毕后用乙醇洗涤，取出后放真空干燥箱中干燥，得到氨基改性交联葡聚糖凝胶填料。1.2采用上述制备方法，用4-肼基-4-氧代丁酸代替N,N-二甲基甲酰胺制备氨基改性交联葡聚糖凝胶填料。1.3采用上述制备方法，用己二酸二酰肼代替N,N-二甲基甲酰胺制备氨基改性交联葡聚糖凝胶填料。1.4采用上述制备方法，用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟碱标准物质的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)称取烟叶样品，加入5％的氢氧化钠溶液中水浴搅拌，超声萃取、过滤并收集滤液，浓缩得烟碱溶液；2)称取氨基改性交联葡聚糖凝胶填料，加入色谱级甲醇溶胀，待凝胶充分溶胀后进行装柱，并用去离子水和色谱级甲醇交替清洗凝胶填料，重复3次，得色谱柱；3)将步骤1)制备的烟碱溶液施加至步骤2)填装的色谱柱，以体积比为1:1‑1:4的乙醇和异丙醇作为流动相进行洗脱，控制色谱柱的温度为35℃，调节流动相的流速为2‑4ml/min，每个流分接液50ml，将第三流分接收并进行密封避光保存；4)将步骤3)得到的第三流分经真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到纯度为99.7％以上的烟碱标准物质。

【技术特征摘要】
1.一种烟碱标准物质的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)称取烟叶样品，加入5％的氢氧化钠溶液中水浴搅拌，超声萃取、过滤并收集滤液，浓缩得烟碱溶液；2)称取氨基改性交联葡聚糖凝胶填料，加入色谱级甲醇溶胀，待凝胶充分溶胀后进行装柱，并用去离子水和色谱级甲醇交替清洗凝胶填料，重复3次，得色谱柱；3)将步骤1)制备的烟碱溶液施加至步骤2)填装的色谱柱，以体积比为1:1-1:4的乙醇和异丙醇作为流动相进行洗脱，控制色谱柱的温度为35℃，调节流动相的流速为2-4ml/min，每个流分接液50ml，将第三流分接收并进行密封避光保存；4)将步骤3)得到的第三流分经真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到纯度为99.7％以上的烟碱标准物质。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，所述烟叶可以是烤烟或白肋烟；优选地，所述烟叶样品与5％氢氧化钠溶液的重量体积比为1:10-1:30，更优选地为1:25；优选地，所述超声萃取进行2-6h，更优选进行4h。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤2)中，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料是由选自N，N-二甲基甲酰胺、4-肼基-4-氧代丁酸、己二酸二酰肼和马来酰亚胺改性的交联葡聚糖凝胶；优选地，所述氨基改性交联葡聚糖凝胶填料是由4-肼基-4-氧代丁酸或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪非，庞永强，胡清源，侯宏卫，罗彦波，姜兴益，朱风鹏，李翔宇，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：河南,41