表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种丛生蛋白修饰的长循环纳米粒，包括丛生蛋白、抗肿瘤药物以及药物载体，药物载体将抗肿瘤药物包裹于内部，药物载体的表面连接丛生蛋白。本发明专利技术还提供了其制备方法：药物载体包载抗肿瘤药物后，通过物理吸附的方法将丛生蛋白修饰到纳米载体上，使得纳米载体具有良好的隐形作用，进而实现其长循环作用。纳米粒表面修饰丛生蛋白发挥隐形作用，可增加药物的循环时间，使得抗肿瘤药物能更多地进入肿瘤部位，从而引起肿瘤细胞的凋亡。

Long-cycle nanoparticles coated with clustered proteins and their preparation methods

The present invention relates to a long-circulating nanoparticle modified by cluster proteins, including cluster proteins, antineoplastic drugs and drug carriers. The drug carriers wrap antineoplastic drugs inside, and the surface of the drug carriers connects cluster proteins. The invention also provides a preparation method: after drug carrier carries anti-cancer drugs, cluster proteins are modified onto nanocarriers by physical adsorption method, so that nanocarriers have good invisibility and long cycle effect. The surface modification of cluster proteins by nanoparticles plays an invisible role, which can increase the circulation time of drugs and make antineoplastic drugs more likely to enter the tumor site, thus causing apoptosis of cancer cells.

【技术实现步骤摘要】
表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒及其制备方法
本专利技术涉及药物制剂领域，尤其涉及一种表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒及其制备方法。
技术介绍
普通药物递送载体容易被网状内皮系统(RES)吞噬，从而迅速从血液清除中，难以将药物递送进入肿瘤。将聚乙二醇(PEG)衍生物修饰于载体表面，亲水性PEG链在载体表面形成水化层，导致调理素和血清蛋白的吸附量降低，因此，RES的识别和摄取能力降低，导致血液循环延长，同时也明显提高了药物载体及药物的物理、化学和生物学稳定性。PEG化载体的临床研究已有多年历史，通常被认为在体内没有或有非常低的免疫原性。PEG嵌段共聚物胶束和PEG化脂质体以及相关产品的开发成为目前药物递送载体研究领域中的热点。但根据最新的文献报道，重复注射PEG化载体导致免疫反应的发生。该免疫反应使PEG化制剂的发展和临床应用面临严峻的挑战，可能造成药物治疗效率的下降，甚至引起临床的毒副作用。中国专利技术专利201710390020.8公开了一种CD44-shRNA/PEG-MZF-NPs/DDP纳米脂质体制备方法，该纳米脂质体是以PEG-MZF-NPs纳米磁粒为载体，负载DDP和质粒CD44-shRNA，具有对卵巢癌细胞有较好的增殖抑制和凋亡诱导作用。但是在重复注射PEG的情况下，DDP作为化疗药物，较高的细胞毒性，会对肝脏Kupffer细胞造成损伤，甚至导致菌血症，而且质粒CD44-shRNA作为免疫刺激因子，进一步加剧了免疫反应。为抑制的免疫反应的出现，已有多种方法被研究寻求PEG的代替材料。中国专利技术专利200910075784.3公开了一种外层经亲水聚合物修饰的脂质体药物的制备方法，其中包含了聚维酮(PVP)修饰的脂质体的制备方法，纳米粒PVP修饰而不是PEG化之后，不会诱导免疫反应。但是PVP修饰的脂质体在临床上的应用有限，因为PVP会引起储存性疾病，干扰凝血、血型检验和交叉配型。有文献报道，采用PHEA替代PEG，设计两亲性聚合PHEA-S-S-C16，以PHEA为主链，长链烷基为侧链，在水溶液中通过自组装法同时包载阿霉素形成纳米胶束，该还原敏感载药胶束可以在细胞内进行还原响应性释放，释放出的阿霉素能够快速进入细胞核，显示出更高的细胞毒性，具有较强的肿瘤细胞增殖抑制效果。但是小剂量的PHEA胶束仍能触发“加速血液清除”(ABC)，导致药物疗效降低，增加肝脏毒性。因此，寻找一种PEG的代替材料而且研发出一种新型的无免疫原性安全的长循环纳米粒仍是一个巨大的挑战。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒及其制备方法，本专利技术丛生蛋白修饰的长循环纳米粒，丛生蛋白作为内源性物质，毒性小且无免疫原性，修饰于载体表面后能提高载体在血液的循环时间，增加化药在肿瘤部位的蓄积，从而引起肿瘤细胞的凋亡。本专利技术的第一个目的是提供一种表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒的制备方法，包括以下步骤：(1)将药物载体与抗肿瘤药物溶于有机溶剂，得到油相溶液；所述药物载体为两亲性聚合物或脂质体；(2)将所述油相溶液缓慢加入处于搅拌状态下的纯水中，于20～28℃下搅拌并除去有机溶剂，得到纳米粒溶液；(3)将丛生蛋白溶液缓慢加入步骤(2)中得到纳米粒溶液中，然后在35～40℃下孵育1～24h，得到所述表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒。在本专利技术一具体实施例中，当药物载体为两亲性聚合物时，其制备方法包括以下步骤：(1)油相的制备：将两亲性聚合物与抗肿瘤药物在有机溶剂中混匀，得到油相溶液；(2)纳米粒溶液的制备：将油相溶液缓慢滴加到处于搅拌状态下的纯水的液面下，于室温下搅拌以除去有机溶剂，搅拌速度为400～1000rpm，搅拌时间为4～8h，得到纳米粒溶液；(3)纳米粒的修饰：将丛生蛋白溶液滴加入步骤(2)中得到纳米粒溶液中，然后在35～40℃下孵育1～24h，得到表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒。在本专利技术另一具体实施例中，当药物载体为脂质体时，其制备方法包括以下步骤：(1)油相的制备：将脂质体与抗肿瘤药物溶于有机溶剂，得到油相溶液；(2)含药PBS脂质体溶液的制备：将油相溶液中的有机溶剂去除，然后向其中加入PBS溶液，超声5～30min，过滤后得到含药PBS脂质体溶液；过滤所用的滤膜的孔径为0.22～0.45μm；(3)纳米粒的修饰：将丛生蛋白溶液滴加入步骤(2)中得到的含药PBS脂质体溶液中，然后在35～40℃下孵育1～24h，得到表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒。进一步地，在步骤(1)中，所述两亲性聚合物的分子量为10000～25000g/mol；所述两亲性聚合物为PCL-PEG共聚物、PLA-PEG共聚物和PLGA-PEG共聚物中的一种或几种。优选地，PCL-PEG共聚物中，PCL的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLA-PEG共聚物中，PLA的分子量为8000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol；PLGA-PEG共聚物中，PLGA的分子量为20000g/mol，PEG的分子量为2000g/mol。进一步地，在步骤(1)中，所述抗肿瘤药物为阿霉素、多西他赛和紫杉醇中的一种或几种。进一步地，在步骤(1)中，脂质体为大豆磷脂。进一步地，在步骤(1)中，所述有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷的一种或几种。进一步地，在步骤(1)中，所述抗肿瘤药物与药物载体的质量比为1:6～20。进一步地，在步骤(2)中，搅拌速率为400～1000rpm(优选为400～700rpm)，搅拌时间为4～8h。进一步地，在步骤(3)中，丛生蛋白溶液中的溶剂为纯水、生理盐水和PBS溶液的一种或几种。进一步地，步骤(3)中的丛生蛋白与步骤(1)中的抗肿瘤药物的质量比为1:10～100。进一步地，在步骤(3)中，丛生蛋白来源为人源、鼠源和猪源的一种或几种。本专利技术的制备方法中，在步骤(2)中，由于油相的两亲性聚合物中含有亲、疏水链段，将油相溶液加入纯水中后，两亲性聚合物的亲水端对外，内部聚集疏水链段，由于抗肿瘤药物也是疏水的，因此被包裹在两亲性聚合物内部，除掉有机溶剂后，可形成负载药物的两亲性聚合物胶束。而脂质体也可以包裹抗肿瘤药物，在PBS中，经滤膜的挤压作用后形成脂质体纳米粒。在步骤(3)中，药物载体包载抗肿瘤药物后，由于丛生蛋白的非特异性吸附于两亲性聚合物胶束或脂质体表面形成蛋白冠，可以有效减少血清蛋白的吸附量，使得纳米载体具有良好的隐形作用，进而降低RES的识别和摄取能力，延长血液循环。本专利技术的第二个目的是提供一种采用上述制备方法所制备的表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒，包括丛生蛋白、抗肿瘤药物以及药物载体，所述抗肿瘤药物包裹于所述药物载体内部，所述药物载体的表面连接有丛生蛋白；所述药物载体为两亲性聚合物或脂质体；长循环纳米粒的粒径70～100nm。进一步地，丛生蛋白、抗肿瘤药物以及药物载体的质量比为1:5～15:10～100。进一步地，药物载体与丛生蛋白的连接方式为物理吸附。本专利技术方法所制备的表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒其药物包封率为85％～92％，载药量为9.5～15％。借由上述方案，本专利技术至少具有以下优点：(1)将丛生蛋白修饰于药物载体表面后，借助于丛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将药物载体与抗肿瘤药物溶于有机溶剂，得到油相溶液；所述药物载体为两亲性聚合物或脂质体；(2)将所述油相溶液缓慢加入处于搅拌状态下的纯水中，于20～28℃下搅拌并除去有机溶剂，得到纳米粒溶液；(3)将丛生蛋白溶液缓慢加入步骤(2)中得到纳米粒溶液中，然后在35～40℃下孵育1～24h，得到所述表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒。

【技术特征摘要】
1.一种表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将药物载体与抗肿瘤药物溶于有机溶剂，得到油相溶液；所述药物载体为两亲性聚合物或脂质体；(2)将所述油相溶液缓慢加入处于搅拌状态下的纯水中，于20～28℃下搅拌并除去有机溶剂，得到纳米粒溶液；(3)将丛生蛋白溶液缓慢加入步骤(2)中得到纳米粒溶液中，然后在35～40℃下孵育1～24h，得到所述表面修饰有丛生蛋白的长循环纳米粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述两亲性聚合物的分子量为10000～25000g/mol；所述两亲性聚合物为PCL-PEG共聚物、PLA-PEG共聚物和PLGA-PEG共聚物中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述抗肿瘤药物为阿霉素、多西他赛和紫杉醇中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述有机溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹青日，黄豪雁，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32