The invention relates to an enzyme-linked immunoassay kit for detecting troponin I in bovine or sheep skeletal muscle, a preparation method and application thereof, belonging to the field of immunology technology and food safety analysis technology. The ELISA kit contains an enzyme plate coated with capturing antibody, a detection antibody labeled with horseradish peroxidase, a troponin I standard solution of bovine or sheep skeletal muscle, a substrate color solution, a termination solution and a concentrated detergent. The captured antibody is secreted by the hybridoma cell line 3A8 with the preservation number CCTCC NO: C2018217, and the detected antibody is secreted by the hybridoma cell line 3D3 with the preservation number CCTCC NO: C2018218. The ELISA kit has the advantages of high sensitivity, precision, accuracy, low cross-reaction rate, and is suitable for the detection of large quantities of samples.
【技术实现步骤摘要】
检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用，属于免疫学
和食品安全分析
技术介绍
在肉类食品中，由于价格、宗教、健康等原因，许多国家制定法规要求食品标签真实明确地标出肉类来源，禁止掺假行为，以保护消费者的利益，但是市场上混淆肉类品种的现象仍然非常普遍，掺假的方式包括掺兑、混入、抽取、假冒等手段，尤其以牛、羊肉制品的掺杂、掺假的行为最为常见，这些掺假行为极大地损害了消费者的利益。目前，国内外许多实验室都使用分子生物学技术手段检测肉制品中的源性成分，DNA检测方法手段多样，主要为核酸探针杂交、DNA指纹分析、PCR特异扩增、PCR-RFLP等。这些方法具有一定的灵敏度，但同时也存在着成本高、对检测对象要求高、工作量大、不能现场检测等缺点，尤其是对于熟肉制品检测有很大不确定性，因为这很大程度上依赖于熟肉制品的处理过程，生产过程的多样性导致了基因物质的不同降解水平。再者，该方法只能检测动物DNA的可能来源，必须时刻防止交叉污染，乳汁、血液、脂肪都有可能是DNA...
【技术保护点】
1.一种检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒，其特征在于，该酶联免疫试剂盒由包被有捕获抗体的酶标板、酶标记的检测抗体、牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液组成。
【技术特征摘要】
1.一种检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的酶联免疫试剂盒，其特征在于，该酶联免疫试剂盒由包被有捕获抗体的酶标板、酶标记的检测抗体、牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液组成。2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体由保藏编号为CCTCCNO:C2018217的杂交瘤细胞株3A8分泌得到，所述检测抗体由保藏编号为CCTCCNO:C2018218的杂交瘤细胞株3D3分泌得到；两株细胞株于2018年12月20日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏。3.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体和检测抗体为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源单克隆抗体，优选鼠源单克隆抗体；其由牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I提取免疫抗原免疫得到。4.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标记检测抗体采用碘酸钠法将标记酶与检测抗体偶联得到。5.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标记的检测抗体中标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液包括显色底物A和显色底物B，所述显色底物A为过氧化氢或过氧化脲，所述显色底物B为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1-2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为碱性磷酸酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1-2mol/L氢氧化钠。6.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I标准品溶液的浓度分别为4.875mg/L、9.75mg/L、19.5mg/L、39mg/L、78.125mg/L、156.25mg/L、312.5mg/L；所述浓缩洗涤液为含有1％吐温-20的0.2mol/LPH7.4的磷酸缓冲液。7.一种制备如权利要求1至6任一权利要求所述的酶联免疫试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备包被有捕获抗体的酶标板：(a)用包被缓冲液将捕捉抗体稀释成1:4000，100ul/孔加入到酶标板孔内；(b)4℃过夜或37℃孵育2h，倾去孔中液体，洗涤液洗涤4-5次，拍干；(c)加入封闭液缓冲液，200ul/孔，37℃孵育2h；(d)倾去孔中液体，拍干，室温在真空干燥箱中抽干5h，用铝箔袋真空塑封，即得包被有捕获抗体的酶标板；其中，所述包被缓冲液为pH9.6...
【专利技术属性】
技术研发人员：李春生，李玉静，刘静静，杜顺丰，张岩，张静，吴萌，曹秀梅，
申请(专利权)人：河北省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：河北,13
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