一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法技术

本发明专利技术提供一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，包括以下步骤：步骤1，配制供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液；配制展开剂和显色剂；展开剂包括乙酸乙酯、甲醇和乙酸，乙酸乙酯、甲醇和乙酸的体积比为(1～7):(2～5):(7～15)；步骤2，薄层层析：以聚酰胺薄膜作为薄层板，将供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液均点样至薄层板上，将点好样品的薄层板放入展开剂饱和的展开缸中进行展开；然后将薄层板取出，晾干；步骤3，检视，分别在紫外和日光下检视绿原酸、黄芩苷。该方法能够对复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸进行专属性薄层鉴别。

A TLC Identification Method for Baicalin and Chlorogenic Acid in Compound Honeysuckle Granules

The invention provides a TLC identification method for baicalin and chlorogenic acid in compound honeysuckle granules, which includes the following steps: step 1, preparation of sample solution, negative reference solution, baicalin reference solution and chlorogenic acid reference solution; preparation of developer and chromogenic agent; developer includes ethyl acetate, methanol and acetic acid, volume ratio of ethyl acetate, methanol and acetic acid. (1-7): (2-5): (7-15); Step 2: Thin layer chromatography: with polyamide film as thin layer plate, the sample solution, negative reference solution, baicalin reference solution and chlorogenic acid reference solution were all dotted onto the thin layer plate, and then the thin layer plate was put into the expansion cylinder saturated with the developer to unfold; then the thin layer plate was taken out and dried; Step 3, inspection, fractionation. Do not examine chlorogenic acid and baicalin under ultraviolet and sunlight. This method can be used to identify baicalin and chlorogenic acid in compound honeysuckle granules by TLC.

【技术实现步骤摘要】
一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法
本专利技术属于医药技术分析领域，具体涉及一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法。
技术介绍
复方金银花颗粒是由金银花、连翘和黄芩3味中药材经现代提取其有效成分，加入适宜的蔗糖精制而成的中药制剂。其功能主治为清热解毒和凉血消肿，主要用于风热感冒、咽炎、扁桃体炎、目痛、牙痛及痈肿疮疖。现为临床治疗风热感冒的常用药，其疗效不容置疑，但对于该产品的质量控制，现行国家标准的黄芩苷及绿原酸薄层鉴别方法专属性差，斑点不清晰，不能有效控制产品质量，从而影响产品的生产和质量保证。
技术实现思路
为了克服上述标准中的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，该方法能够实现对复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸进行专属性薄层鉴别，排除其他物质的干扰且分离度佳，重现性好。本专利技术是通过以下技术方案来实现：一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，包括以下步骤：步骤1，配制供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液；配制展开剂和显色剂；展开剂包括乙酸乙酯、甲醇和乙酸，乙酸乙酯、甲醇和乙酸的体积比为(1～7):(2～5):(7～15)；步骤2，薄层层析：以聚酰胺薄膜作为薄层板，将供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液均点样至薄层板上，将点好样品的薄层板放入展开剂饱和的展开缸中进行展开；然后将薄层板取出，晾干；步骤3，检视，分别在紫外和日光下检视绿原酸、黄芩苷。优选的，步骤1中，供试品溶液的配制方法为：将复方金银花颗粒研细，加入甲醇，超声，过滤，取滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，得到供试品溶液。优选的，步骤1中，黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液的配制方法为：取黄芩苷和绿原酸对照品，分别加入甲醇，超声溶解，定容，分别得到黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液。进一步的，超声时间为10～30分钟。优选的，步骤1中，显色剂为1％～2％的三氯化铁乙醇溶液。优选的，步骤2中，供试品溶液点样量为1～2μL。优选的，步骤3中，检视具体为：365nm紫外光下检视绿原酸，将晾干的薄层板均匀喷洒显色剂，放置，日光下检视黄芩苷。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：复方金银花颗粒中三味药材金银花、黄芩、连翘含有的主要成分咖啡酰奎尼酸类(绿原酸、新绿原酸、异绿原酸等)、黄酮类(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素等)、连翘酚、连翘苷等均含有羟基，可和聚酰胺薄膜中酰胺键的羰基形成氢键，因形成氢键能力不同吸附能力不同而分离。在层析过程中，展开剂可与被分离物质竞争性地与聚酰胺薄膜中酰胺键的羰基形成氢键，要选择展开剂使被分离物质在溶剂与聚酰胺表面之间分配系数有较大差异，经过吸附与解吸的展层过程，形成不同顺序分离。所以本专利技术通过采用极性较小的乙酸乙酯、极性较大的甲醇和乙酸按照一定体积比配制的展开剂，并以聚酰胺薄膜作为薄层板，能够实现对复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸进行专属性薄层鉴别，专属性强，可排除阴性干扰，斑点清晰、分离度高，重现性好。本专利技术采用的展开剂，直接配制使用，不用静置取上层溶液，简化了展开剂的配制步骤，同时节约了时间，提高了效率。进一步的，采用超声法配制样品，简化了实验步骤，缩短了样品制备时间。最后定量溶解，可精确控制点样量，点样量变小，易于操作。进一步的，在用聚酰胺薄膜薄层鉴别，黄芩苷在紫外下颜色与薄层板颜色相似度高，不容易清晰分辨，而本专利技术在喷显色剂后日光下检视黄芩苷清晰易辨。附图说明图1以体积比为8:1:1的乙酸乙酯、甲醇和甲酸的混合物为展开剂。图2以体积比为10:3:1:2的甲苯、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的混合物为展开剂。图3以体积比为4:3:10的乙酸乙酯、甲醇和乙酸的混合物为展开剂。图4为不同点样体积薄层层析效果。图5为最佳条件下薄层层析效果。图6为专属性考察薄层层析效果。图7薄层板为上海金穗生物科技有限公司的薄层层析效果。图8薄层板为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂薄层层析效果。图9为5℃展开结果。图10为30℃展开结果。图11为湿度32％条件下展开结果。图12为湿度72％条件下展开结果。图13为实施例1展开结果。图14为实施例2展开结果。图1、2、3中点样顺序如下：1、2、3均为供试品溶液，4为阴性对照品溶液，5为黄芩苷对照品溶液，6为绿原酸对照品溶液；图4中点样顺序如下：1、2、3、4是点样体积分别为0.5μL、1μL、2μL和3μL的供试品溶液，5为1μL阴性对照品溶液，6为1μL黄芩苷对照品溶液，7为1μL绿原酸对照品溶液；图5、6、7、8、9、10、11、12、13、14中点样顺序如下：1、2、3均为1μL的供试品溶液，4为1μL阴性对照品溶液，5为1μL黄芩苷对照品溶液，6为1μL绿原酸对照品溶液。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。本专利技术所述的复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，包括以下步骤：1、配制复方金银花颗粒黄芩苷和绿原酸薄层鉴别供试品溶液采用甲醇超声处理的方法，获得复方金银花颗粒黄芩苷和绿原酸薄层鉴别测定供试品溶液。2、配制复方金银花颗粒黄芩苷和绿原酸薄层鉴别阴性对照品溶液按照复方金银花颗粒处方制备黄芩和金银花阴性样品，再按照步骤1的方法制备获得阴性对照品溶液。3、配制复方金银花颗粒黄芩苷和绿原酸薄层鉴别对照品溶液采用甲醇超声处理的方法，获得黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液。4、薄层板三种薄层板，硅胶G薄层板、4％醋酸钠硅胶G板和聚酰胺薄膜(薄层层析)。5、展开剂的配制分别配制3种展开剂，展开剂1包括甲苯、乙酸乙酯、甲醇和甲酸，甲苯、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的体积比为10:3:1:2；展开剂2包括乙酸乙酯、甲醇和甲酸，乙酸乙酯、甲醇和甲酸的体积比为8:1:1；展开剂3包括乙酸乙酯、甲醇和乙酸，乙酸乙酯、甲醇和乙酸的体积比为4:3:10；并对3种展开系统进行比较。6、显色剂的配制称取三氯化铁2g于100mL容量瓶中，加95％的乙醇少量溶解后，继续定容至100mL，备用。通过实施例确定，三氯化铁浓度可以为1-2％，均可达到预定效果。7、复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸的薄层鉴别检测用定量毛细管分别量取步骤1、2、3制得的复方金银花颗供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液点于薄层板上，放入展开剂饱和的展开缸中展开至薄层板2/3处以上，取出，晾干，分别置于规定条件下检视。点样时，斑点为圆点状，距薄层板底边10～15mm，距两左右边缘15mm，圆点状直径2～3mm，点样量1～2μL。展开时，展开剂先饱和15～30分钟，薄层板浸入展开剂深度要求展开剂最初的前沿线距原点5mm。检视时，紫外365下检视绿原酸，将自然晾干的薄层板均匀喷洒上显色剂，放置后，于日光下检视。8、鉴别条件优化1)供试品处理方法选择分别考察了提取溶剂甲醇、75％甲醇、乙醇和60％乙醇，结果表明甲醇提取效果好，考察了不同的提取方法超声处理30分钟，加热回流30分钟，以提取效率高，方法简便的原则，选择超声处理。通过实施例确定，超声时间为10-30分钟均可达到预定效果。2)薄层板的选择分别将样品用定量毛细管点于硅胶G薄层板、4％醋酸钠硅胶G板本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，配制供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液；配制展开剂和显色剂；展开剂包括乙酸乙酯、甲醇和乙酸，乙酸乙酯、甲醇和乙酸的体积比为(1～7):(2～5):(7～15)；步骤2，薄层层析：以聚酰胺薄膜作为薄层板，将供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液均点样至薄层板上，将点好样品的薄层板放入展开剂饱和的展开缸中进行展开；然后将薄层板取出，晾干；步骤3，检视，分别在紫外和日光下检视绿原酸、黄芩苷。

【技术特征摘要】
1.一种复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，配制供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液；配制展开剂和显色剂；展开剂包括乙酸乙酯、甲醇和乙酸，乙酸乙酯、甲醇和乙酸的体积比为(1～7):(2～5):(7～15)；步骤2，薄层层析：以聚酰胺薄膜作为薄层板，将供试品溶液、阴性对照品溶液、黄芩苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液均点样至薄层板上，将点好样品的薄层板放入展开剂饱和的展开缸中进行展开；然后将薄层板取出，晾干；步骤3，检视，分别在紫外和日光下检视绿原酸、黄芩苷。2.根据权利要求1所述的复方金银花颗粒中黄芩苷和绿原酸薄层鉴别检测方法，其特征在于，步骤1中，供试品溶液的配制方法为：将复方金银花颗粒研细，加入甲醇，超声，过滤，取滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，得到供试品溶液。3.根据权利要求1所述的复方...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛美玲，刘福敏，陈美红，王川吏，郭维真，
申请(专利权)人：金花企业集团股份有限公司西安金花制药厂，
类型：发明
国别省市：陕西,61