一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，属于中药质量检测技术领域。所述方法包括以下步骤：S1：含量测定：通过对哈巴苷、哈巴俄苷的含量测定，以确定玄参是否符合《中国药典》的含量要求；S2：指纹图谱相似度评价：采用相似度分析对桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸的特征图谱鉴别，用于增加对玄参质量真假、优劣的鉴别，以及对玄参质量均一性、稳定性的评价；S3：综合评分：建立一个加权综合评价体系对玄参的质量进行全面评估。本发明专利技术通过增加肉桂酸的含量测定以及对玄参主要活性成分的特征图谱鉴别，并对其检测成分通过加权评分进行综合质量评价，有利于更准确地评定玄参的质量。

A Comprehensive Quality Evaluation Method Based on the Detection of Multi-active Components in Radix Scrophulariae

The invention discloses a comprehensive quality evaluation method based on the detection of multiple active ingredients of Radix Scrophulariae, which belongs to the technical field of quality detection of traditional Chinese medicine. The method includes the following steps: S1: content determination: determination of habaroside and habaroside to determine whether Radix Scrophulariae meets the requirements of Chinese Pharmacopoeia; S2: similarity evaluation of fingerprint: identification of characteristic Atlas of aucubin, habaroside, ferulic acid, angloside C, habaroside and cinnamic acid by similarity analysis, which can be used to increase the identification of the characteristic Atlas of aucubin, habaroside and cinnamic acid. Identification of the quality of Radix Scrophulariae, and evaluation of its quality uniformity and stability; S3: Comprehensive score: a weighted comprehensive evaluation system to evaluate the quality of Radix Scrophulariae comprehensively. By adding cinnamic acid content determination and identifying the characteristic Atlas of the main active ingredients of Radix Scrophulariae, and comprehensively evaluating the quality of the detected ingredients by weighted score, the method is conducive to evaluating the quality of Radix Scrophulariae more accurately.

【技术实现步骤摘要】
一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法
本专利技术属于中药质量检测
，具体涉及一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法。
技术介绍
玄参为玄参科植物玄参ScraphularianingpoensisHemsl.的干燥根。冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，晒或烘至半干，堆放3～6天，反复数次至干燥。玄参是一种常用的中药材，始载于《神农本草经》，列为中品。《名医别录》云：“生何间川谷及冤句”。玄参别名：元参、乌元参、黑参、重台、鬼藏、正马、鹿肠、玄台、逐马、馥草、野脂麻、山当归、水萝卜。玄参的用药历史悠久，具有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效。用于热入营血，温毒发斑，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，骨蒸劳嗽，目赤，咽痛，白喉，瘰疬，痈肿疮毒。为历代《中国药典》所收载，其疗效确切、应用广泛。临床应用的玄参饮片是由玄参中药材加工而成，取玄参药材除去残留根茎和杂质，洗净，润透，切薄片，干燥；或微泡，蒸透，稍晾，切薄片，干燥，即得。经对玄参的研究发现，在玄参中含量较高的主要活性成分有：桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸等，经研究和查询相关文献发现玄参中各主要活性成分的药理作用与临床应用的关系为：(1)肉桂酸肉桂酸，又名β-苯丙烯酸、3-苯基-2-丙烯酸。具有轻泻、抗肿瘤、抗细菌及真菌、升白细胞、利胆的作用(国家医药管理局中草药情报中心站，1986；Liuetal，1995)。能够抑制多种诱变剂的SOS诱导活性，而且其甲酯结构具有较强的抗诱变潜力(Miyazawaetal,1998)。对人肺癌细胞有明显抑制作用。肉桂酸有抗血栓形成的作用，主要表现为具有延长凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及抑制凝血酶的作用(PizzoSV，1986)。功效性的甲氧基肉桂酸具有解热作用(周浓)。此外，肉桂酸还可用于合成治疗冠心病的重要药物乳酸可心定和心痛平，及合成氯苯氨丁酸和肉桂本哌嗪；还有抑制形成酪氨基酸酶及使黑色素合成量减少的作用，对紫外线有一定的隔绝作用，能使褐斑变浅，甚至消失，具有显著的抗氧化功效，对于减慢皱纹的出现有很好的疗效，是高级防晒霜中必不可少的成分之一。(2)哈巴苷玄参中哈巴苷含量较高，含量为0.289～5.997mg/g(周佳，2017)。哈巴苷能抗菌、解热、镇痛、解痉、抗心律不齐，增加心肌营养性血流量，提高耐缺氧能力等功效。(3)哈巴俄苷哈巴俄苷为玄参中含量较高的成分之一，含量为1.517～9.735mg/g(周佳，2017)。具有抗慢性炎症、降压、镇痛、解痉、抗乙肝病毒以及免疫促进作用(王东辉，2011)。对炎症介质的产生和体外诱导的血小板聚集都有不同程度的抑制作用。还可促进阴虚小鼠脾淋巴细胞增殖，诱导脾淋巴细胞产生IL-2，能降低阴虚小鼠血浆中cAMP的含量，并能调整cAMP/cGMP比值至正常对照组水平，使抑制的免疫功能得以恢复，推测哈巴俄苷为玄参产生滋阴作用的物质基础之一(谢丽华，2001)。(4)桃叶珊瑚苷桃叶珊瑚苷为玄参中含量较高的成分之一，属环烯醚萜类化合物，其相对分子质量为346，分子式为C15H22O9,桃叶珊瑚苷具有保肝护肝(促进干细胞再生，明显抑制乙型肝炎病毒DNA的复制，可作为治疗非酒精性脂肪肝的潜在药物)、解毒抗菌(其苷元及有效多聚体是一种抗菌素，对6种革兰阴性菌、阳性菌和致病真菌都有一定的抑制效果)、抗炎(与其7,8位双键及6-O取代基有关)、神经保护(可保护神经元细胞、调控神经元细胞的凋亡。缓解急性脑出血引起的神经元损伤，对糖尿病脑病神经元有保护作用)、抗肿瘤(诱导骨髓白血病K562细胞凋亡)、抗氧化及抗光老化作用、抗骨质疏松、保护心血管、促进伤口愈合等作用。药动学研究表明其口服生物利用度低，仅为19.3％，难以被肠道吸收，需酶解为桃叶珊瑚苷苷元而发挥疗效。到目前为止，在天然产物中分离得到的6-O取代桃叶珊瑚苷衍生物共有23个，其中20个来自于玄参属植物。(5)阿魏酸阿魏酸化学名为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，肉桂酸的衍生物之一，是植物界普遍存在的一种酚酸。对玄参中肉桂酸和其衍生物(阿魏酸等)对H2O2的清除能力进行研究，结果表明具有强抗氧化剂功效。药理实验表明，阿魏酸及其衍生物具有增加冠脉血流量、保护心肌缺血、抗血小板凝集和血栓、抗辐射(降低辐射引起机体活性氧的增多，抑制辐射引起的粘附损伤，对受辐射内皮细胞产生保护作用)、抗氧化(具有很好的抗氧化活性，不仅能清除自由基，而且能抑制和清除产生自由基的酶)、抗炎抗病毒(对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌均有一定的抑制效果)、抗肿瘤(促进血管平滑肌细胞彼此黏附，抑制癌细胞迁移。对抗结肠癌的研究较多)、抗突变、增加免疫力、抗抑郁等多种作用。阿魏酸还抑制皮肤黑色素的沉积，进而延缓衰老，改善皮肤细嫩度。还具有预防骨质流失，改善妇女更年期综合征功效，对老年人具有恢复和改善记忆的功能。阿魏酸盐和阿魏酸酯类含有酚羟基和苯烯结构，可清除自由基和拮抗内皮素功能，使其能双重保护血管内皮功能，可应用于心血管疾病的治疗。(6)安格洛苷C玄参中总苯丙素苷类的主要成分为安格洛苷C和麦角甾苷，两者重量比为90～95:10～5，两者含量之和占总苯丙素苷总重量的80％以上(专利CN1931868A，2007)。安格洛苷C在玄参中具有较高的含量(张雪梅，2011)，含量为0.898～3.568mg/g(周佳，2017)。研究表明具有抗氧化、消炎功效(Diazetal,2004)。一般认为环烯醚萜苷类物质是玄参的抗炎主要成分。但AHMED研究表明，苯丙素苷类抗氧化活性明显比环烯醚萜类强。玄参的抗炎、抗氧化作用可能主要与其苯丙素苷类中的成分安格洛苷C有关(曾华武，1999)。安格洛苷C具有抗血小板聚集及保肝作用，还能显著降低尿酸水平。安格洛苷C通过抑制导致心肌肥大、心室重构的有关刺激、介导因素，从而改善心肌肥大、心室肥厚的症状和心肌的生物学功能(专利CN101940579A,2011)。由于玄参的应用广、效疗多、成分复杂，目前《中国药典》仅收载有哈巴苷和哈巴俄苷的薄层鉴别与含量测定方法，而忽视了对其它活性成分的检测与质量评定，不能准确地评价玄参的产品质量和疗效，指导临床用药。因此，探讨一种对其多种活性成分进行检测和综合质量评价的方法显得尤为重要。
技术实现思路
为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法。本专利技术的具体方案如下：一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，包括以下步骤：S1：含量测定：通过对哈巴苷、哈巴俄苷的含量测定，以确定玄参是否符合《中国药典》的含量要求，建立肉桂酸的含量测定方法以进一步增加对玄参质量控制的专属性，初步判别玄参质量的优劣；S2：指纹图谱相似度评价：采用相似度分析对桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸的特征图谱鉴别，用于增加对玄参质量真假、优劣的鉴别，以及对玄参质量的均一性、稳定性的评价；S3：综合评分：建立一个加权综合评价体系对玄参的质量进行全面评估，以比较得出玄参质量的优劣。优选地，所述对肉桂酸的含量测定具体方法为：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：含量测定：通过对哈巴苷、哈巴俄苷的含量测定，以确定玄参是否符合《中国药典》的含量要求，建立肉桂酸的含量测定方法以进一步增加对玄参质量控制的专属性，增加对玄参质量优劣的判定指标；S2：指纹图谱相似度评价：采用相似度分析对桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸的特征图谱鉴别，用于增加对玄参质量真假、优劣的鉴别，以及对玄参质量均一性、稳定性的评价；S3：综合评分：建立一个加权综合评价体系对玄参的质量进行全面评估，以比较得出玄参质量的优劣。

【技术特征摘要】
1.一种基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：含量测定：通过对哈巴苷、哈巴俄苷的含量测定，以确定玄参是否符合《中国药典》的含量要求，建立肉桂酸的含量测定方法以进一步增加对玄参质量控制的专属性，增加对玄参质量优劣的判定指标；S2：指纹图谱相似度评价：采用相似度分析对桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸的特征图谱鉴别，用于增加对玄参质量真假、优劣的鉴别，以及对玄参质量均一性、稳定性的评价；S3：综合评分：建立一个加权综合评价体系对玄参的质量进行全面评估，以比较得出玄参质量的优劣。2.根据权利要求1所述的基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，其特征在于，所述对肉桂酸的含量测定具体方法为：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.5％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；梯度洗脱程序为：0～10分钟，流动相A60→70％，流动相B40→30％；10～12分钟，流动相A70→60％，流动相B30→40％；检测波长为264nm，理论塔板数按肉桂酸计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取肉桂酸对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含肉桂酸20μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取过三号筛的玄参样品粉末约1.0g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人50％甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡1小时，采用功率500W、频率40kHz的超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。3.根据权利要求1所述的基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，其特征在于，对哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸的含量测定具体方法为：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0～25分钟，流动相A5→35％，流动相B95→65％；25～35分钟，流动相A35→70％，流动相B65→30％；35～37分钟，流动相A70→5％，流动相B30→95％，检测波长为207nm，理论塔板数按哈巴苷哈巴俄苷与哈巴苷峰计算均应不低于5000；对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品和肉桂酸对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含哈巴苷60ug、哈巴俄苷40ug、肉桂酸20ug的溶液，即得；供试品溶液的制备：取过三号筛的玄参样品粉末约1.0g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡1小时，采用功率500W、频率40kHz的超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。4.根据权利要求3所述的基于玄参多活性成分检测的综合质量评价方法，其特征在于，所述采用相似度分析对桃叶珊瑚苷、哈巴苷、阿魏酸、安格洛苷C、哈巴俄苷、肉桂酸的特征图谱鉴别，具体方法为：A：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟振平，刘佩玲，李玲，
申请(专利权)人：药圣堂湖南制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43