一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒，属于脂蛋白残粒胆固醇测定技术领域。本发明专利技术所述试剂盒包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：PIPES缓冲液、显色底物、表面活性剂1和过氧化物酶；所述试剂2包括：PIPES缓冲液、4‑氨基安替比林、磷脂酶D、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和表面活性剂2。本发明专利技术提供的试剂盒操作简便，适用于临床检测，试剂检测线性范围宽，检测灵敏度高，稳定性好，抗干扰能力强，具有良好的准确度与精密度。

A Kit for the Determination of Cholesterol in Lipoprotein Residues

The invention relates to a kit for determining lipoprotein residue cholesterol, belonging to the technical field of determining lipoprotein residue cholesterol. The kit comprises reagent 1 and reagent 2; reagent 1 includes PIPES buffer, chromogenic substrates, surfactant 1 and peroxidase; reagent 2 includes PIPES buffer, 4 aminoantipyrine, phospholipase D, cholesterol esterase, cholesterol oxidase, peroxidase and surfactant 2. The kit provided by the invention is simple in operation, suitable for clinical detection, has wide linear range of reagent detection, high detection sensitivity, good stability, strong anti-interference ability, good accuracy and precision.

【技术实现步骤摘要】
一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒
本专利技术涉及脂蛋白残粒胆固醇测定
，具体涉及一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒。
技术介绍
脂蛋白残粒(Remnant-LikeParticle，RLP)又称富含甘油三酯(triglyceride，TG)脂蛋白残粒(TRL)，是乳糜微粒(chylomicron，CM)和极低密度脂蛋白(verylowdensitylipoprotein，VLDL)经脂蛋白酶(lipoproteinlipase，LPL)水解逐渐失去甘油三脂、磷脂、载脂蛋白A(apoproteinA，apoA)和apoC，转变为富含胆固醇、胆固醇酯和apoE的较小颗粒。RLP具有致动脉粥样硬化作用，脂蛋白残粒胆固醇(RLP-Cholesterol，RLP-C)水平升高是动脉粥样硬化性疾病和冠心病(coronaryheartdisease，CHD)以及动脉粥样硬化性有关的代谢性疾病的重要危险因素。血浆或血清中RLP-C浓度在动脉粥样硬化性疾病及动脉粥样硬化相关的疾病(如II型糖尿病、III型高脂血症和慢性肾功衰及胖患者)中显著增加。目前检测RLP-C的主要方法为免疫吸附法，但该方法需要对被测样本进行分离处理，过程繁琐，需花费大量时间。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒。本专利技术提供的试剂盒不仅操作简便，适用于临床检测，而且试剂检测线性范围宽，检测灵敏度高，稳定性好，抗干扰能力强，具有良好的准确度与精密度。本专利技术提供了一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：PIPES缓冲液、显色底物、表面活性剂1和过氧化物酶；所述显色底物包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺；所述表面活性剂1包括脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物、十二烷基硫酸三乙醇胺、TRITONX-100和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；所述试剂2包括：PIPES缓冲液、4-氨基安替比林、磷脂酶D、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和表面活性剂2；所述表面活性剂2包括烷基酚聚氧乙烯醚、聚环氧乙烯月桂酰醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或多种。优选的是，所述试剂1和试剂2中的PIPES缓冲液的浓度分别独立地为10～100mM，pH值独立地为5.0～10.0。优选的是，所述显色底物的质量浓度为0.05～4.0g/L。优选的是，所述脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物、十二烷基硫酸三乙醇胺、TRITONX-100和壬基酚聚氧乙烯醚的质量浓度分别独立地为1～20g/L。优选的是，所述试剂1和试剂2中过氧化物酶的酶浓度独立地为5～20KU/L。优选的是，所述4-氨基安替比林的质量浓度为0.01～3g/L。优选的是，所述磷脂酶D的酶浓度为3～15KU/L。优选的是，所述胆固醇酯酶的酶浓度为1～10KU/L。优选的是，所述胆固醇氧化酶的酶浓度为1～10KU/L。优选的是，所述烷基酚聚氧乙烯醚、聚环氧乙烯月桂酰醚和脂肪醇聚氧乙烯醚的质量浓度分别独立地为0.5～8g/L。本专利技术提供了一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒。本专利技术提供的试剂盒在后续使用中无需进行样品前处理，操作简便，检测快速，适用于全自动生化仪，适用于临床检测，试剂检测线性范围宽，检测灵敏度高，稳定性好，抗干扰能力强，具有良好的准确度与精密度。附图说明图1为本专利技术实施例5提供的实施例1的试剂盒与与对照组相关系数比对结果图；图2为本专利技术实施例5提供的实施例2的试剂盒与与对照组相关系数比对结果图；图3为本专利技术实施例5提供的实施例3的试剂盒与与对照组相关系数比对结果图；图4为本专利技术实施例5提供的实施例4的试剂盒与与对照组相关系数比对结果图；图5为本专利技术实施例7提供的线性范围检测结果图。具体实施方式本专利技术提供了一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：PIPES缓冲液、显色底物、表面活性剂1和过氧化物酶；所述显色底物包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺；所述表面活性剂1包括脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物、十二烷基硫酸三乙醇胺、TRITONX-100和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；所述试剂2包括：PIPES缓冲液、4-氨基安替比林、磷脂酶D、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和表面活性剂2；所述表面活性剂2包括烷基酚聚氧乙烯醚、聚环氧乙烯月桂酰醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或多种。在本专利技术中，所述试剂1和试剂2中的PIPES缓冲液的浓度分别独立地为10～100mM，pH值独立地为5.0～10.0。在本专利技术中，所述PIPES缓冲液的浓度优选为40mM，pH值优选为7.2。在本专利技术中，PIPES缓冲液能够提供一个合适的环境，使试剂中的酶类物质保持稳定，活度不会降低，从而影响结果的可靠性。本专利技术对PIPES缓冲液的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的PIPES缓冲液常规市售产品即可。在本专利技术中，所述显色底物优选包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)，在本专利技术中，所述显色底物的质量浓度为0.05～4.0g/L，优选为0.5g/L。本专利技术所述显色底物TOOS能够使反应更加灵敏，准确度更高。在本专利技术中，所述显色底物TOOS优选购自罗氏公司(Roche)。在本专利技术中，所述表面活性剂1优选包括脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物(B-28，优选购自花王株式会社)、十二烷基硫酸三乙醇胺(EMALTD，优选购自花王株式会社)、TRITONX-100(优选购自美国AMRESCO公司)和壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40，优选购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司)中的一种或多种。在本专利技术中，所述B-28、EMALTD、TRITONX-100和NP-40的质量浓度分别独立地为1～20g/L。在本专利技术中，所述B-28的浓度优选为1～5g/L，更优选为2g/L。在本专利技术中，所述EMALTD的浓度优选为1～5g/L，更优选为2g/L。在本专利技术中，所述TRITONX-100的浓度优选为1～5g/L，更优选为1.5g/L。在本专利技术中，所述NP-40的浓度优选为2～4g/L，更优选为1g/L。在本专利技术中，所述B-28、EMALTD、TRITONX-100和NP-40优选购自花王株式会社。在本专利技术中，所述表面活性剂1能抑制除脂蛋白残粒胆固醇以外的胆固醇与胆固醇酯酶及胆固醇氧化酶反应，对被测样品中的胆固醇进行广泛地抑制并保持体系还原性的稳定。在本专利技术中，所述试剂1和试剂2中过氧化物酶的酶浓度独立地为5～20KU/L。在本专利技术中，所述过氧化物酶的酶浓度更优选为10～20KU/L，最优选为18KU/L。在本专利技术试剂1中，所述过氧化物酶的作用是消除样本中原有的过氧化氢对结果的干扰；在试剂2中，所述过氧化物酶的作用是在脂蛋白残粒胆固醇在胆固醇酯酶及胆固醇氧化酶的作用下分解生成过氧化氢，经Trinder’s反应呈色，即过氧化氢在过氧化物酶及4-氨基安替比林存在的存在下，与显色底物发生显色反应，由其吸光度测定出脂蛋白残粒胆固醇含量。本专利技术对所述过氧化物酶的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规过氧化物酶市售产品即可，如日本TOYOBO东洋纺的过氧化物酶。在本专利技术中，所述4-氨基安替比林的质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：PIPES缓冲液、显色底物、表面活性剂1和过氧化物酶；所述显色底物包括N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺；所述表面活性剂1包括脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物、十二烷基硫酸三乙醇胺、TRITON X‑100和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；所述试剂2包括：PIPES缓冲液、4‑氨基安替比林、磷脂酶D、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和表面活性剂2；所述表面活性剂2包括烷基酚聚氧乙烯醚、聚环氧乙烯月桂酰醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：PIPES缓冲液、显色底物、表面活性剂1和过氧化物酶；所述显色底物包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺；所述表面活性剂1包括脂肪胺与环氧乙烷、环氧丙烷的嵌段聚合物、十二烷基硫酸三乙醇胺、TRITONX-100和壬基酚聚氧乙烯醚中的一种或多种；所述试剂2包括：PIPES缓冲液、4-氨基安替比林、磷脂酶D、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和表面活性剂2；所述表面活性剂2包括烷基酚聚氧乙烯醚、聚环氧乙烯月桂酰醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂1和试剂2中的PIPES缓冲液的浓度分别独立地为10～100mM，pH值独立地为5.0～10.0。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述显色底物的质量浓度为0.05～4.0g/L。...

【专利技术属性】
技术研发人员：方朝君，郑江萍，
申请(专利权)人：浙江达美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33