一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用，属于生物检测技术领域。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液。试剂R2还包括松三糖和乳果糖。该试剂盒采用直接法进行测定，具有灵敏度高、准确性强等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用。
技术介绍
人血清中的脂蛋白根据密度不同，主要分为：乳糜微粒(chylomicrons，CM)、极低密度脂蛋白(very-low-densitylipoprotein，VLDL)、中间密度脂蛋白(intermediate-densitylipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein，HDL)。其中，LDL颗粒中含胆固醇约50％，是血液中胆固醇含量最多的脂蛋白，故称为富含胆固醇的脂蛋白，它是人体组织吸收内源性胆固醇和胆固醇酯的主要载体。胆固醇又称胆甾醇，以游离胆固醇的形式或以和脂肪酸结合的胆固醇酯的形式存在于血液脂蛋白中，例如：低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)等。Baigent等人研究发现，LDL-C是引发动脉粥样硬化性心血管疾病(atheroscleroticcardiovasculardisease，ASCVD)重要的危险因素之一(BaigentC,KeechA,KearneyPM,etal.Efficacyandsafetyofcholesterol-loweringtreatment:prospectivemeta-analysisofdatafrom90056participantsin14randomisedtrialsofstatins.Lancet,2005,366:1267-1278.)。因此，临床上将LDL-C的高低作为冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断指标之一。根据我国《中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)》提出的临床血脂测定建议，血清LDL-C的测定主要使用匀相法，包括透射比浊法、表面活性剂清除法、过氧化氢酶清除法、可溶性反应法等。比如，中国专利CN100365409C公开了一种测定低密度脂蛋白胆固醇的试剂及制备方法，该试剂性质稳定、适用各种型号的全自动生化分析仪；但是，试剂中含有多种防腐剂，对试剂中的酶类活性抑制较大，灵敏度较差。再如，中国专利CN107505272A公开了低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其使用方法，该试剂盒使用过氧化氢酶清除法测定血清中的LDL-C的含量。但是，该试剂盒使用的多聚阴离子表面活性剂在碱性水溶液中稳定性较差，进而影响对非LDL脂蛋白的清除作用，故而该试剂盒难以准确地进行LDL-C的含量测定。因此，急需一种灵敏度高、准确性强的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对目前低密度脂蛋白胆固醇的检测步骤较为繁杂，特别是现有技术存在试剂灵敏度低、准确性差的问题。本专利技术提供的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒具有操作简单，检测效率及准确率高的优点。为了实现上述技术效果，本专利技术采用如下技术方案实现：一方面，本专利技术提供了一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；所述的试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液。其中，所述的试剂R2还包括松三糖和乳果糖。优选地，所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：表面活性剂a80.0-120.0mmol/L、胆固醇酯酶1.0-6.0KU/L、胆固醇氧化酶1.0-10.0KU/L、过氧化物酶8.0-30.0KU/L、4-氨基安替比林0.2-1.5mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、pH值为7.0的缓冲液10.0-50.0mmol/L，；所述的试剂R2包括：表面活性剂b50.0-150.0mmol/L、显色剂1.0-10.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、pH值为7.0的缓冲液10.0-50.0mmol/L、松三糖0.5-1.5g/L和乳果糖0.2-1.0g/L。更优选地，所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：表面活性剂a90.0-110.0mmol/L、胆固醇酯酶1.5-3.0KU/L、胆固醇氧化酶3.0-6.0KU/L、过氧化物酶12.0-20.0KU/L、4-氨基安替比林0.5-1.0mmol/L、氯化镁8.0-12.0mmol/L和pH值为7.0的缓冲液15.0-35.0mmol/L；所述的试剂R2包括：表面活性剂b80.0-120.0mmol/L、显色剂2.0-6.0mmol/L、氯化镁8.0-12.0mmol/L、pH值为7.0的缓冲液15.0-35.0mmol/L、松三糖0.4-0.8g/L和乳果糖0.4-0.7g/L。其中，所述的表面活性剂a为胆酸钠、磺酸盐和硫酸葡聚糖中的一种或几种；优选地，所述的表面活性剂a为胆酸钠。其中，所述的表面活性剂b为曲拉通X-100、吐温-20和Span-60中的一种或几种；优选地，所述的表面活性剂b为曲拉通X-100。其中，所述的显色剂为2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠、苯酚和4-氯苯酚中的一种或几种；优选地，所述的显色剂为2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠。其中，所述的缓冲液为3-吗啉丙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液和硼酸盐缓冲液中的一种或几种。优选地，所述的缓冲液为3-吗啉丙磺酸缓冲液。进一步优选地，所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：胆酸钠100.0mmol/L、胆固醇酯酶2.0KU/L、胆固醇氧化酶5.0KU/L、过氧化物酶15.0KU/L、4-氨基安替比林0.6mmol/L、氯化镁10.0mmol/L和pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液20.0mmol/L；所述的试剂R2包括：曲拉通X-100100.0mmol/L、2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠4.0mmol/L、氯化镁10.0mmol/L、pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液20.0mmol/L、松三糖1.0g/L和乳果糖0.5g/L。所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，还包括低密度脂蛋白胆固醇标准品冻干粉2g，需用生理盐水溶解后使用。本专利技术还提供了一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒的使用方法：本试剂盒适用于杜邦AR、日立7080/7170/7600/7180、迈瑞BS320、迪瑞CS600、雅培C8000、东芝TBA40FR、奥林巴斯AU2700、贝克曼DXC800、西门子ADVIA2400、罗氏P800等全自动生化分析仪。该测定试剂盒的测定方法为两点终点法，反应方向为升反应：(1)将300μL试剂R1和3μL待测样本混合均匀，37℃孵育5min后得到反应液1，测定吸光度A1，测定主波长为546nm、次波长为660nm；(2)加入100μL试剂R2混合均匀，反应5min，得到反应液2，测定吸光度A2，测定主波长为546nm、次波长为660nm；(3)按照步骤(1)-(2)，对不同浓度的低密度脂蛋白胆固醇标准品的吸光度进行测定，得到吸光度A空白和A标准；(4)以标准品的吸光度变化值ΔA(A标准-A空白)为纵坐标，以相应的标准品浓度c为横坐标，绘制标准曲线，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；所述的试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；所述的试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液。2.根据权利要求1所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2还包括松三糖和乳果糖。3.根据权利要求2所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：表面活性剂a80.0-120.0mmol/L、胆固醇酯酶1.0-6.0KU/L、胆固醇氧化酶1.0-10.0KU/L、过氧化物酶8.0-30.0KU/L、4-氨基安替比林0.2-1.5mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、pH值为7.0的缓冲液10.0-50.0mmol/L；所述的试剂R2包括：表面活性剂b50.0-150.0mmol/L、显色剂1.0-10.0mmol/L、氯化镁5.0-15.0mmol/L、pH值为7.0的缓冲液10.0-50.0mmol/L、松三糖0.5-1.5g/L和乳果糖0.2-1.0g/L。4.根据权利要求3所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：表面活性剂a90.0-110.0mmol/L、胆固醇酯酶1.5-3.0KU/L、胆固醇氧化酶3.0-6.0KU/L、过氧化物酶12.0-20.0KU/L、4-氨基安替比林0.5-1.0mmol/L、氯化镁8.0-12.0mmol/L和pH值为7.0的缓冲液15.0-35.0mmol/L；所述的试剂R2包括：表面活性剂b80.0-120....

【专利技术属性】
技术研发人员：林耀文，钟素萍，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33