一种脂联素测定试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种脂联素测定试剂盒及其应用，涉及生物检测技术领域。本发明专利技术通过向试剂R1中加入稳定剂和表面活性剂，控制稳定剂为质量比1

【技术实现步骤摘要】
一种脂联素测定试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种脂联素测定试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]脂联素是一种脂肪细胞因子，能在人体血浆中稳定存在，浓度范围约为3.0
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30.0mg/L，约占血浆蛋白的0.01％。人类脂联素含244个氨基酸，包括3个区域：氨基末端信号序列、胶原结构域和羧基末端的球形结构域。脂联素以三聚体(65kb)、六聚体(150kb)和高分子量聚合体(18
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36个多体，>280kb)三种亚型存在于血液中。临床研究显示，脂联素与肥胖、II型糖尿病、冠心病、胰岛素抵抗密切相关，具有抗动脉粥样硬化形成、抗炎症和血管损伤后抗内膜增生的特性。
[0003]脂联素的测定方法有多种，例如放射免疫法(RIA)或酶联免疫吸附法(ELISA)，如中国专利申请200910043672.X中公开了一种人脂联素酶联免疫吸附检测试剂盒及其制备方法与应用，所述试剂盒包括抗人APN单克隆抗体包被的酶标板，重组的gAPN蛋白标准品，抗人APN单克隆检测抗体，HRP－链霉素，10mM pH7.4的磷酸盐缓冲液，TMB酶底物显色液，0.1M pH7.4的磷酸盐缓冲液及2M H2SO4。该专利技术还包括所述试剂盒的制备方法与在人血APN含量检测中的应用。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，操作时间长、自动化程度低。放射免疫法(RIA)灵敏度高，但不稳定，重复性比ELISA差，而且存在放射性污染的危险。
>[0004]目前使用较多的是胶乳增强免疫比浊法，其优势是：
①
省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤。
②
稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人类血清中脂联素的含量。
③
应用广泛：免疫比浊法的灵敏度虽然比ELISA法差一些，但足以检测到人类血清中脂联素的下限值，可完全满足临床检测要求。
[0005]如中国专利申请202010101938.8中公开了一种定量检测脂联素ADPN的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备与应用方法，包括脂联素R1试剂和脂联素R2试剂；脂联素R1试剂包括缓冲液A、保护剂A、反应增强剂、防腐剂；脂联素R2试剂包括缓冲液B、保护剂B、防腐剂、包被抗人脂联素抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒；其中，包被抗人脂联素抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒中的抗人脂联素抗体与致敏聚苯乙烯胶乳颗粒之间通过链亲和素
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生物素系统连接。该专利技术还提供了一种定量检测脂联素ADPN的胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备与应用方法。但是给试剂盒的稳定性以及重复性和准确性都不能满足需求。
[0006]因此，需要提供一种稳定好、重复性和准确性高的脂联素测定试剂盒及其制备方法。

技术实现思路

[0007]针对现有技术中存在的不足，本专利技术提供了一种稳定好、重复性和准确性高的脂
联素测定试剂盒及其制备方法。
[0008]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0009]一种脂联素测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂。
[0010]所述的R1试剂包括缓冲液、电解质、稳定剂和表面活性剂A；
[0011]所述的R2试剂包括抗人脂联素抗体乳胶颗粒、缓冲液、表面活性剂B和防腐剂。
[0012]所述的表面活性剂A为槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠、聚乙二醇单辛基苯基醚、聚乙二醇6000、曲拉通X
‑
100和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
[0013]优选地，所述的表面活性剂为槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠、聚乙二醇单辛基苯基醚和聚乙二醇6000中的一种或几种；
[0014]再优选地，所述的表面活性剂为槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠和聚乙二醇6000的混合物；
[0015]进一步优选地，所述的表面活性剂为质量比1:1
‑
3:5的槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠和聚乙二醇6000的混合物；
[0016]再进一步优选地，所述的表面活性剂为质量比1:2:5的槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠和聚乙二醇6000的混合物。
[0017]所述的表面活性剂B为吐温
‑
20、吐温
‑
80、司盘
‑
60、司盘
‑
80和曲拉通X
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100中的一种或几种；
[0018]优选地，所述的表面活性剂B为吐温
‑
80。
[0019]所述的稳定剂为甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖和壳聚糖中的一种或几种；
[0020]优选地，所述的稳定剂为质量比1
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5:1的甘露醇和壳聚糖；
[0021]再优选地，所述的稳定剂为质量比2
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4:1的的甘露醇和壳聚糖；
[0022]进一步优选地，所述的稳定剂为质量比3:1的的甘露醇和壳聚糖。
[0023]所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、枸橼酸缓冲液和Tris缓冲液中的一种或几种，优选为三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
[0024]所述的电解质为质为氯化钠、氯化钾、氯化镁和硫酸镁中的一种或几种，优选为氯化钠。
[0025]所述的防腐剂选自叠氮钠、Proclin
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950或Proclin
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300中的一种，优选为Proclin
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300。
[0026]作为一些优选的技术方案，所述的试剂R1中还含有牛血清白蛋白。
[0027]在一些优选实施方案中，所述的槐糖脂和壳聚糖的浓度比为5
‑
15:1；优选地，所述的槐糖脂和壳聚糖的浓度比为8
‑
12:1；再优选地，所述的槐糖脂和壳聚糖的浓度比为12:1。
[0028]本专利技术在实施过程中意外地发现控制槐糖脂和壳聚糖的质量比，能够明显提高试剂盒的稳定性，即便在试剂R1不添加防腐剂的情况下，试剂盒长期放置16个月后依然具有很好的稳定性。
[0029]所述的脂联素测定试剂盒，所述的R1试剂包括缓冲液90
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120mmol/L、电解质3
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8g/L、甘露醇2
‑
5g/L、壳聚糖1
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3g/L、槐糖脂10
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15g/L、十二烷基苯磺酸钠20
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40g/L和聚乙二醇6000 50
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80g/L；
[0030]所述的R2试剂包括抗人脂联素抗体乳胶颗粒8
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12mg/L、缓冲液90
‑
120mmol/L、吐温
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80 60
‑
100g/L和防腐剂0.1
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...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂联素测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其特征在于：所述的R1试剂包括缓冲液、电解质、稳定剂和表面活性剂A；所述的R2试剂包括抗人脂联素抗体乳胶颗粒、缓冲液、表面活性剂B和防腐剂；所述的表面活性剂A为槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠、聚乙二醇单辛基苯基醚、聚乙二醇6000、曲拉通X
‑
100和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。2.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂为质量比1:1
‑
3:5的槐糖脂、十二烷基苯磺酸钠和聚乙二醇6000的混合物。3.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂B为吐温
‑
20、吐温
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80、司盘
‑
60、司盘
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80和曲拉通X
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100中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为甘露醇、山梨醇、海藻糖、蔗糖和壳聚糖中的一种或几种。5.根据权利要求4所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比1
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5:1的甘露醇和壳聚糖。6.根据权利要求5所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比3:1的的甘露醇和壳聚糖。7.根据权利要求6所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的槐糖脂和壳聚糖的浓度比为5
‑
15:1。8.根据权利要求1
‑
7任一项所述的脂联素测定试剂盒，其特征在于：所述的脂联素测定试剂盒，所述的R1试剂包括缓冲液90
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120mmol/L、电解质3
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8g/L、甘露醇2
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5g/L、壳聚糖1
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3g/L、槐糖脂10
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15g/L、十二烷基苯磺酸钠20
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40g/L和聚乙二醇6000 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：林耀文，王志，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：