一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，属于生物检测技术领域。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、显色剂和缓冲液；试剂R2包括：过氧化物酶、4‑氨基安替比林、防腐剂和缓冲液。试剂R1还包括壳多糖。该试剂盒采用过氧化物酶法进行测定，具有准确性高、特异性高且线性范围广等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用。
技术介绍
人血清中的脂蛋白根据密度不同，主要分为：乳糜微粒(chylomicrons，CM)、极低密度脂蛋白(very-low-densitylipoprotein，VLDL)、中间密度脂蛋白(intermediate-densitylipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein，HDL)。胆固醇又称胆甾醇，以游离胆固醇的形式或以和脂肪酸结合的胆固醇酯的形式存在于血液脂蛋白中，例如：小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等。Fishe首次提出低密度脂蛋白颗粒具有多分散度，根据颗粒相对大小分为A、B两型，A型为较大的颗粒，B型主要由直径小于25.5nm的小颗粒组成，密度较大，可称小而密低密度脂蛋白，其所携带的胆固醇称之为小而密低密度脂蛋白胆固醇即sdLDL-C(FisherWR.HeterogeneityofplasmaLDL:manifestationsofthephysiologicphyenomenoninman.Metabolism,1983,32(3):283-291.)。与普通低密度脂蛋白胆固醇相比，sdLDL-C半衰期长、穿透力强、更易被氧化，其致动脉粥样硬化能力更强，是评价冠状动脉粥样硬化性心脏病即冠心病的风险因素。因此，临床上将sdLDL-C的高低作为冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断指标之一。检测sdLDL-C的方法有梯度凝胶电泳法、密度梯度超速离心法、核磁共振光谱法等。其中，美国AtherotechDiagnostics公司VerticalAutoProfile(VAP)胆固醇检测系统是一种扩展型脂质特征测定产品，可报告22种血液胆固醇成分(包括对非空腹LDL亚型及脂蛋白所有子类的直接测定)，密度梯度超速离心法是目前国际上小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的参考方法；美国Quantimetrix公司的Lipoprint脂蛋白分类检测系统采用管式聚丙烯酰氨凝胶电泳原理，可完全分离鉴定所有脂蛋白(含7种LDL亚型，10种HDL亚型)。但上述方法有由于设备的局限性，在临床实验室无法推广。目前，通常使用清除法测定sdLDL-C，该法采用双试剂、通过清除非sdLDL-C以达到测定sdLDL-C的目的。比如，中国专利CN108410950A公开了一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该专利使用表面活性剂清除法测定sdLDL-C，适用于全自动生化分析仪检测；但是小而密低密度脂蛋白由直径小于25.5nm的小颗粒组成，表面活性剂难以对小颗粒进行准确识别、造成错误地清除sdLDL-C导致检测结果偏低的问题。再如，中国专利CN108841918A公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，稳定性好，操作简单，但是，选用叠氮钠及放射线酮作防腐剂，对试剂R2中胆固醇酯酶的活性抑制较大，难以准确测定sdLDL-C的含量。因此，十分需要一种准确度高的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术在sdLDL-C含量测定过程中存在的准确性差的缺陷，本专利技术提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，该试剂盒准确性高、特异性高且具有较宽的线性范围的，适用于临床全白动或半自动生化分析。为了实现上述技术效果，本专利技术采用如下技术方案实现：一方面，本专利技术提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、显色剂和缓冲液；所述的试剂R2包括：过氧化物酶、4-氨基安替比林、防腐剂和缓冲液。所述的试剂R1还包括壳多糖。优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1000.0-3000.0U/L、胆固醇氧化酶1000.0-3000.0U/L、磷脂酶10.0-50.0KU/L、过氧化氢酶1000.0-3000.0KU/L、显色剂0.5-5.0mmol/L、缓冲液50.0-150.0mmol/L和壳多糖0.2-2.5g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶5000.0-7000.0U/L、4-氨基安替比林1.0-5.0mmol/L、防腐剂0.05-0.5mL/L和缓冲液50.0-150.0mmol/L。更优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1500.0-2500.0U/L、胆固醇氧化酶1200.0-2000.0U/L、磷脂酶20.0-40.0KU/L、过氧化氢酶1500.0-2500.0KU/L、显色剂1.0-4.0mmol/L、缓冲液75.0-125.0mmol/L和壳多糖0.5-2.0g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶5500.0-6500.0U/L、4-氨基安替比林1.3-4.0mmol/L、防腐剂0.1-0.4mL/L和缓冲液75.0-125.0mmol/L。进一步优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1800.0-2200.0U/L、胆固醇氧化酶1400.0-1700.0U/L、磷脂酶25.0-35.0KU/L、过氧化氢酶1800.0-2200.0KU/L、显色剂1.5-3.0mmol/L、缓冲液90.0-110.0mmol/L和壳多糖0.7-1.5g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶5800.0-6200.0U/L、4-氨基安替比林1.5-2.5mmol/L、防腐剂0.15-0.3mL/L和缓冲液90.0-110.0mmol/L。其中，所述的显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸和2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠中的一种或几种；优选地，所述的显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐。其中，所述的防腐剂为Proclin300、叠氮钠和硫柳汞中的一种或几种；优选地，所述的防腐剂为Proclin300。其中，所述的缓冲液为pH值为7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、pH值为7.0的3-吗啉丙磺酸缓冲液和pH值为7.0的硼酸盐缓冲液中的一种或几种；优选地，所述的缓冲液为pH值为7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液。再进一步优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶2000.0U/L、胆固醇氧化酶1500.0U/L、磷脂酶30.0KU/L、过氧化氢酶2000.0KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐2.0mmol/L、pH值为7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液100.0mmol/L和壳多糖1g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶6000.0U/L、4-氨基安替比林2.0mmol/L、Proclin3000.2mL/L和pH值为7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液100.0mmol/L。所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、显色剂和缓冲液；所述的试剂R2包括：过氧化物酶、4‑氨基安替比林、防腐剂和缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、显色剂和缓冲液；所述的试剂R2包括：过氧化物酶、4-氨基安替比林、防腐剂和缓冲液。2.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1还包括壳多糖。3.根据权利要求2所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1000.0-3000.0U/L、胆固醇氧化酶1000.0-3000.0U/L、磷脂酶10.0-50.0KU/L、过氧化氢酶1000.0-3000.0KU/L、显色剂0.5-5.0mmol/L、缓冲液50.0-150.0mmol/L和壳多糖0.2-2.5g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶5000.0-7000.0U/L、4-氨基安替比林1.0-5.0mmol/L、防腐剂0.05-0.5mL/L和缓冲液50.0-150.0mmol/L。4.根据权利要求3所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1500.0-2500.0U/L、胆固醇氧化酶1200.0-2000.0U/L、磷脂酶20.0-40.0KU/L、过氧化氢酶1500.0-2500.0KU/L、显色剂1.0-4.0mmol/L、缓冲液75.0-125.0mmol/L和壳多糖0.5-2.0g/L；所述的试剂R2包括：过氧化物酶5500.0-6500.0U/L、4-氨基安替比林1.3-4.0mmol/L、防腐剂0.1-0.4mL/L和缓冲液75.0-125.0mmol/L。5.根据权利要求4所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1包括：胆固醇酯酶1800.0-2200.0U/L、胆固醇氧化酶1400.0-17...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈青松，林耀文，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33