【技术实现步骤摘要】
一种微流体装及置基于微流体装置的单细胞核酸适体单轮筛选方法
本专利技术涉及一种微流体装及置基于微流体装置的单细胞核酸适体单轮筛选方法。
技术介绍
核酸适体是上世纪90年代发展起来的，是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)从含大量寡聚核苷酸的核酸文库中筛选得到能高亲和性高特异性识别靶标的DNA/RNA分子。核酸适体具有可与抗体相媲美的识别功能，目前已成为化学与生物医学研究的重要工具。传统的核酸适体筛选技术只能针对纯物质(如提纯的蛋白质)来进行筛选，难以实现对细胞和复杂生命体系的有效识别。这是因为：1)许多疾病标志物尚未发现；2)可作为标志物的膜蛋白难以纯化；3)纯化后的蛋白与活细胞生理环境中蛋白的构象存在差异，导致纯蛋白为靶标的核酸适体不能识别细胞。我们课题组针对这一难题，提出了针对活细胞这一复杂体系进行核酸适体筛选的新概念，创建了以疾病相关阳性细胞为靶细胞、以阴性细胞为参比的细胞筛选法。细胞筛选方法的发展，解决了如何在标志物未知的情况下获得研究细胞及其它复杂生命体系所必需的分子探针的关键科学问题，为病变细胞膜蛋白标志物的高效发现和鉴定提供了基础。该方法先后被...
【技术保护点】
1.一种微流体装置，其特征在于，所述微流体装置包括微流体通道(1)，所述微流体通道(1)设有输入口(2)和输出口(3)，所述微流体通道(1)内腔底部设有若干个用于分配单个细胞的微室(4)。
【技术特征摘要】
1.一种微流体装置，其特征在于，所述微流体装置包括微流体通道(1)，所述微流体通道(1)设有输入口(2)和输出口(3)，所述微流体通道(1)内腔底部设有若干个用于分配单个细胞的微室(4)。2.如权利要求1所述的微流体装置，其特征在于，所述微流体通道(1)呈U型折流布置。3.如权利要求1所述的微流体装置，其特征在于，所述微流体通道(1)的长、宽、高均为20±0.5微米；所述微室(4)的直径为20±0.5微米，微室(4)的深度为20±0.5微米；彼此相邻的微室(4)之间的间距为2200-2400微米。4.一种基于权利要求1至3任一项所述微流体装置的单细胞核酸适体单轮筛选方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将靶细胞样品注射进入微流体装置，控制流体速度为50-100微升/分钟，使细胞分散于微流体装置的微室中；(2)将设计和合成的核酸适体文库与参比细胞孵育，然后离心，弃去与参比细胞结合的核酸适体，将未与参比细胞结合的核酸适体注射进入微流体装置，控制流速为50-100微升/分钟，使核酸适体与微室中的靶细胞结合；(3)将洗涤缓冲液注射进入微流体装置，通过改变洗涤时间和洗涤缓冲液流速来控制筛选压力，收集洗脱液，将洗脱液中的核酸适体即为筛选后所得的核酸适体；其中，改变洗涤时间的范围为3-10分钟，控制洗涤缓冲液的流速为50-100微升/分钟。5.如权利要求4所...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，蒋健晖，赵子龙，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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